Relación entre la actividad endoscópica e histológica, el desarrollo microvascular y la expresión de los factores angiogénicos y linfangiogénicos en la mucosa cólica de pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal

Abstract

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Medicina. Fecha de lectura: 27-06-2016Objetivo: Investigar la relación entre la angiogénesis y la linfangiogénesis en biopsias de mucosa intestinal y la actividad endoscópica e histológica de pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal (EII). Métodos: Se incluyeron prospectivamente pacientes con y sin EII que acudieron a realizarse una colonoscopia por práctica clínica. El grado de actividad endoscópica se determinó mediante el subíndice endoscópico de Mayo para la colitis ulcerosa (CU) y el SES-CD para enfermedad de Crohn (EC). La expresión de los factores en mucosa cólica se determinó por inmunohistoquímica. Los resultados de la expresión de VEGF-A, -C, -D, -R1, -R2, -R3 y PlGF se clasificaron como sigue: (++) si se tiñeron más del 50% de las células del tejido, (+) por debajo del 50% y (-) tinción negativa. Ang-1, Ang-2 y Tie-2, y la densidad microvascular CD34 y D2.40, se evaluaron mediante el recuento directo en cinco campos de visión a un aumento de 40x. Resultados: Se incluyeron 58 pacientes con EII (36 CU y 22 EC) y 19 controles, y se evaluó un total de 101 biopsias. Se observó una mayor expresión de Ang-1 y -2 en las biopsias procedentes de segmentos intestinales con inflamación endoscópica grave comparada con las procedentes de tramos sin actividad endoscópica (p<0,01). La expresión de VEGF-D (p<0,05), PlGF (p<0,05) y VEGFR-3 (p<0,01), y la media de recuento de Ang-1 (p<0,05) y Ang-2 (p<0,01), fueron diferentes en función de la actividad histológica. La intensidad de la expresión aumentó en paralelo con la gravedad de las lesiones histológicas, excepto la de VEGF-D, que disminuyó. La expresión y el recuento medio de Ang-1, Ang-2, VEGFR-2 (p<0,01) y VEGF-C, -R1 y Tie-2 fueron mayores en las muestras de pacientes con CU que en las de EC (p<0,05). En los pacientes con EC, el recuento medio de Ang-1, y la expresión de VEGF-C, -D, -R2, -R3 y PlGF fue mayor (p<0,05), y del resto de los factores menor, que en los controles. La expresión de Ang-2 (p<0,05) y la de todos los factores estudiados fue mayor en las muestras de EC activa que en las inactivas. La expresión de todos los factores fue mayor en los pacientes con CU que en los controles (p<0,05). El recuento medio y la expresión de Ang-1, Ang-2 y VEGF-D fue menor (p<0,05) en las muestras con CU activa. El mayor área bajo la curva ROC para el diagnóstico de actividad endoscópica en CU fue de 0,72 para la Ang-1 (punto de corte 42,2: sensibilidad 53% y especificidad 67%). Conclusiones: La expresión de VEGF-A, -D, -R3, PlGF y Ang-1 y -2 en las biopsias de mucosa se correlaciona con la actividad histológica de la EII. La expresión de Ang-1 en muestras de mucosa constituye un marcador de desarrollo angiogénico en la EII. Los factores angiogénicos se expresan de manera diferente en la mucosa de los pacientes con EC y CU. Estos resultados sugieren un papel de estos factores en la actividad de la EIIAim: To evaluate the relationship between angiogenesis and lymphangiogenesis in colonic mucosa biopsies with the endoscopic and histological activity in patients with inflammatory bowel disease (IBD). Methods: Patients with and without IBD that underwent a colonoscopy because of medical criteria were prospectively included. Endoscopic activity was assessed by endoscopic Mayo subscore for ulcerative colitis (UC) and SES-CD for Crohn’s disease (CD). Protein expression in colonic mucosa was determined by immunohistochemistry. VEGF-A, -C, -D, -R1, -R2, -R3 and PlGF expression results were graded as follows: (++) over 50% of the tissue cells were stained, (+) below 50%, and (-) completely negative. Ang-1, Ang-2 and Tie-2, and micro vessel density CD34 and D2.40, were assessed as the average density of five hot spots at a magnification of x40. Results: 58 patients with IBD (36 UC and 22 CD) and 19 controls were included, and a total of 101 biopsies were evaluated. Higher expression of Ang-1 and Ang-2 was found when the endoscopic activity was severe compared to inactive disease (p<0.01). Expression of VEGF-D (p<0.05), PlGF (p<0.05) and VEGFR-3 (p<0.01), and mean count of Ang-1 (p<0.05) and Ang-2 (p<0.01) were also significantly different depending on the histological activity. These expressions were increased in parallel with the severity of histological lesions excepting for VEGF-D, which was decreased with the severity of the activity. Expression and mean count of Ang-1, Ang-2, VEGFR-2 (p<0.01), and VEGF-C, -R1 and Tie-2 were higher in samples from patients with UC compared to CD (p<0.05). In patients with CD, Ang-1 mean count, and expression of VEGF-C, -D, -R2, PlGF, and VEGFR-3, were higher (p<0.05), and the rest of factors were lower, than in controls. Expression of Ang-2 (p<0.05) and of all the studied factors were higher in active samples than in non-active CD; on the opposite, VEGF-D and -R3 were lower. In UC, expression of all factors were higher in patients with UC than in controls (p<0.05). Mean count and expression of Ang-1, Ang-2 were higher, and VEGF-D was lower (p<0.05) in samples with active, compared to inactive UC. The best area under the ROC curve for the diagnosis of endoscopic activity in UC was 0.72 for Ang-1 (cut-off at 42.2: 53% sensitivity and 67% specificity). Conclusions: The expression of VEGF-A, -D, -R3, PlGF, and Ang-1 and -2 in mucosal biopsies correlates with the histological activity of IBD. Ang-1 expression in mucosal samples is a marker of angiogenic development in IBD. Angiogenic factors are differentially expressed in mucosa from patients with CD and UC. These findings might support a role of angiogenic factors in IBD activit