Tesis doctoral inédita cotutelada por la Universidad Federal do Ceara (Benfica-Fortaleza), Centro de Tecnología, Departamento de Engenharía Química y por la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 27-02-2015Este trabalho de tese apresenta suportes ativados com divilsulfona (DVS) como úteis para a
estabilização de enzimas por ligação covalente multipontual, os suportes são muito estáveis, e
reagem com diferentes grupos de enzimas em diferentes condições, etc. No entanto, em
algumas ocasiões produzem a inativação das mesmas, ou a imobilização é muito lenta,
sugerindo que a imobilização não é tão fácil como em outros suportes. O caráter
moderadamente hidrofóbico do grupo introduzido pode ter consequências. Tem sido
demonstrado que a imobilização pode ser realizada em diferentes valores de pH, e isto parece
envolver diferentes áreas das moléculas da proteína, uma vez que após a incubação a pH 10 e
subsequente bloqueio, as propriedades são muito diferentes. Além disso, confirmou-se a
possibilidade de modular lipases através da imobilização ou subsequente modificação física
ou química, que podem ser: não só a estabilidade, mas também a especificidade e seletividade
podem ser alteradas significativamente. Essas mudanças não são previsíveis e dependem do
substrato, das condições experimentais, e em caso de alterações posteriores, ou do protocolo
de imobilização utilizado. Também é mostrado um protocolo simples que permite "um
bioimprinting" da forma aberta de lipases utilizando um detergente para forçar a abertura, e a
estabilização desta lipase aberta é conseguida por meio da adição de um polímero iônico
revestindo a superfície da proteína.Esta tesis muestra que los soportes activados con divinil sulfona (DVS) pueden ser muy útiles
para conseguir la estabilización de enzimas por unión covalente multipuntual, los soportes son
muy estables, reaccionan con diferentes grupos de las enzimas en diferenets condiciones, etc.
Sin embargo, en ocasiones producen la inactivación de las mismas, o la inmovilización es
muy lenta sugiriendo que la inmovilización no es tan sencilla como en otros soportes. El
carácter moderadamente hidrofóbico del grupo introducido puede tener consecuencias. Se ha
demostrado como la inmovilización puede realizarse a diferentes pHs, y que esto parece
implicar diferentes áreas de las moléculas de proteína, ya que tras su incubación a ph 10 y
posterior bloqueo, las propiedades son muy diferentes. Por otro lado, se confirma que las
lipasas se pueden modular via inmovilización o modificación química o física posterior: no
solo la estabilidad, sino también la especificidad y la selectividad pueden alterarse de forma
muy significativa. Estos cambios no son predecibles y dependen del sustrato, condiciones
experimentales, y en el caso de las modificaciones posteriores, del protocolo de
inmovilización utilizado. También se ha mostrado un protocolo muy sencillo que permite “el
bioimprinting” de la forma abierta de lipasas usando un detergente para forzar la apertura de
las lipasas y estabilizando esta forma abierta por al adición de un polímero ionico que recubre
la superfice de la protein