Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 25-10-2013Los bacteriófagos son virus que infectan bacterias. Para ello, después de
reconocer a la célula hospedadora y transferir el material genético a su interior y
redirigen toda la maquinaria celular para producir más partículas virales. El primer
paso fundamental para que este proceso se pueda llevar a cabo es la correcta
interacción entre el fago y la membrana de la célula, por lo que los virus han
desarrollado mecanismos para realizar eficientemente este proceso.
La mayor parte de los bacteriófagos descritos pertenecen al orden Caudovirales,
que se caracterizan por tener una cápside icosaédrica o prolada y una cola. En
muchos casos, en la base de la cola hay fibras o espinas, que actúan como receptores
de la célula hospedadora. Las fibras son proteínas triméricas que en su extremo distal
presentan el dominio de unión al hospedador. Son proteínas muy estables, pero su
forma de L también les confiere también cierta flexibilidad, necesaria para su unión
al receptor, generalmente reversible.
Los Caudovirales agrupan tres familias diferenciadas en función de la morfología
de su cola: Myoviridae, Podoviridae y Siphoviridae. La familia Myoviridae incluye
fagos con una cola larga y contráctil; siendo T4 el myovirus mejor estudiado, que
tiene seis fibras largas y seis fibras cortas. La familia Podoviridae abarca los fagos
con una cola corta y no contráctil. A esta familia pertenece el fago T7, que tiene seis
fibras formadas por trímeros de la proteína gp17. Estas fibras han sido caracterizadas
únicamente por microscopía electrónica y análisis bioquímicos. La familia
Siphoviridae, está formada por fagos con una cola larga y flexible. El siphovirus T5
tiene tres fibras largas con forma de L formadas por trímeros de la proteína pb1, que
han sido poco estudiadas hasta el momento.
En esta tesis doctoral se planteó el estudio de la estructura del extremo carboxilo
terminal de las fibras de los fagos T7 y T5, formadas por las proteínas gp17 y pb1
respectivamente. La determinación de la estructura atómica de los extremos de las
fibras de los fagos abre nuevas posibilidades para el desarrollo de aplicaciones
biotecnológicas, como la modificación de los aminoácidos que interaccionan con el
receptor y, por lo tanto, redireccionando los fagos hacia otras bacterias de interés.
Debido a la aparición, cada vez más frecuente, de bacterias con resistencia a
múltiples antibióticos, los fagos se presentan como una posible alternativa contra
cepas bacterianas que causan patologías importantes en humanos.Bacteriophages are viruses that infect bacteria. For this infection they recognise
the host cell, transfer the genetic material inside the cell and redirect the cell
machinery in order to produce many viral particles. The first step for a successful
infection is the correct interaction between the phage and the cell membrane. For this
reason, viruses have developed mechanisms to bind efficiently to a specific receptor.
Most bacteriophages belong to the order Caudovirales. These phages have
icosahedral or prolate capsids with a tail. In most cases, fibres or spikes are attached
to the base of the tail, and function as receptors for the host cell. Fibres are trimeric
proteins with a carboxy-terminal host-binding domain. Because of their folding, they
are very stable proteins, resistant to denaturing agents and high temperature, but their
L shape confers them flexibility, facilitating receptor binding. This receptor binding
is generally reversible and is followed by the irreversible interaction with a
secondary receptor. After the receptor binding, the tail penetrates through the cell
membrane and the phage DNA is ejected into the cell cytoplasm.
The Caudovirales are divided into three families according to their tail
morphology. The Myoviridae family consists of phages with a long contractile tail.
T4, perhaps the best-known member of the Myoviridae family, has six long tail
fibres and six short tail fibres. The Podoviridae family consists of phages with a
short non-contractile tail. Bacteriophage T7, which has six fibres made by gp17
trimers, belongs to this family. These fibres have been previously analysed by
electron microscopy and biochemical studies, but the atomic structure was still
unknown. The last family, the Siphoviridae family, consists of phages with a long
flexible tail. The siphovirus T5 has three L-shaped long fibres made by trimers of
protein pb1 and they have been poorly studied.
In this PhD thesis, a study of the carboxy-terminal parts of T7 and T5 fibres, made
by the proteins gp17 and pb1 respectively, has been done. The knowledge of the
atomic structure of the distal part of the fibres opens new approaches to future
biotechnological applications: amino acids interacting with the receptor can be
modified to redirect the phage to other bacteria of interest. At a time when the
antibiotics are losing their effectiveness to resistant bacteria, phages represent a
possible alternative