口腔内のカンジダ属真菌について，研究報告の多くは老齢者が対象となっている。本研究の目的は，若年者の口腔内にカンジダ属真菌の検出率を高齢者のそれと比較することである。また，カンジダ属真菌が検出された若年者とその若年者の生活スタイルや罹患している病気との間に何らかの関与があるかどうかについても検討した。直接鏡検では全例菌要素は検出されなかった。培養では100 例中17例にコロニーが分離された。若年者の舌からのカンジダ属真菌分離率は老齢者のそれと比較すると低く，子どものそれと比べると高率であることが明らかになった。カンジダ属真菌の分離率と生活スタイルについての明らかな関与はみられなかったが，気管支喘息に罹患している若年者は他の気管支喘息に罹患していない若年者に比較し，カンジダ属真菌の分離率が有意に高かった

Tsushima, Aiko

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− 1 −岡山大学大学院教育学研究科研究集録　第170号（2019）1−4岡山大学大学院教育学研究科　発達支援学系　700−8530　岡山市北区津島中３−１−１Isolation of Candida Species from the Tongues of Young SubjectsAiko TSUSHIMADivision of Developmental Studies and Support, Graduate School of Education, Okayama University, 3-1-1 Tsushima-naka, Kita-ku, Okayama 700-8530若年者の舌から分離されたカンジダ属真菌の検討津島　愛子　口腔内のカンジダ属真菌について，研究報告の多くは老齢者が対象となっている。本研究の目的は，若年者の口腔内にカンジダ属真菌の検出率を高齢者のそれと比較することである。また，カンジダ属真菌が検出された若年者とその若年者の生活スタイルや罹患している病気との間に何らかの関与があるかどうかについても検討した。直接鏡検では全例菌要素は検出されなかった。培養では100例中17例にコロニーが分離された。若年者の舌からのカンジダ属真菌分離率は老齢者のそれと比較すると低く，子どものそれと比べると高率であることが明らかになった。カンジダ属真菌の分離率と生活スタイルについての明らかな関与はみられなかったが，気管支喘息に罹患している若年者は他の気管支喘息に罹患していない若年者に比較し，カンジダ属真菌の分離率が有意に高かった。Keywords：若年者，カンジダ属真菌，直接鏡検，クロモアガーカンジダ培地Ⅰ　はじめに　カンジダ属真菌はヒトに対し病原性を有している真菌として知られているが，皮膚，消化管，膣内などに常在する菌としても知られている1）。今回の調査部位である，舌を含めた口腔内もカンジダ属真菌の常在する部位の一つとして知られている1）。口腔内におけるカンジダ属真菌の分離に関しては，既に多くの報告が見られるが，そのほとんどは高齢者を対象にした報告である2）3）。高齢者以外の舌からのカンジダ属真菌を分離した報告は極めて少ない。そこで，今回，若年者の舌のカンジダ属真菌の分離状況を調査し，他の年代の舌カンジダ属真菌の分離状況と比較した。また，カンジダ属真菌の分離の有無が被験者の生活スタイルや疾病との間に何らかの関係があるかどうかも検討した。Ⅱ　対象と方法１．対象　研究対象者は，自由意志による研究参加の同意を本人から取得可能な20歳以上30歳未満（平均年齢22歳）の若年女性100名とした。調査の実施は，平成29年10月から平成30年９月の間に実施した。２．倫理的配慮　研究への参加意思については，本検査の施行前に本人に書面と口頭で本研究の意義を説明し同意と承諾を得た。また，参加の有無により不利益が生じることがないことも伝えた。なお，本調査は岡山大学医療系部局研究倫理審査専門委員会（番号:研1807-001）の承認を得ている。３．調査項目　調査項目は，喫煙及びアルコール飲酒習慣の有無，歯磨きの励行の有無，舌のブラッシング施行の有無，歯間ブラシの使用の有無，病歴（糖尿病，気管支喘息など），服薬状況を記載した質問用紙を事前に渡し，あらかじめ記入してもらい検査当日に持参してもらった。　また，調査当日は，被験者の舌表面を肉眼的に観察し，舌の発赤，萎縮の有無や白色変化や白苔の付着などの有無を調査した。また，舌の疼痛の有無や味覚異常を問診した。全被験者に対し直接顕微鏡検査と培養検査を施行した。直接顕微鏡検査の検体材料として，滅菌舌圧子で舌背を擦過したものを使用した。それを検体材料として，スライドグラス上に塗抹し苛性カリ法で鏡検し真菌要素（出芽性分生子   津島　愛子− 2 −集団や仮性菌糸）の有無を調べた。その結果，真菌要素を認める材料を直接顕微鏡検査陽性とした。　培養は津島3）4）の施行した方法に準じておこなった。すなわち，滅菌綿棒で舌表面を約10回擦過して検体材料とした。培地としてクロモアガーカンジダ培地を用いた。検体材料を培地に塗抹後，35℃，48時間恒温器内で培養後，コロニーの有無とコロニーの発色の違いによりカンジダ属真菌の菌種を同定した。日本皮膚科学会ガイドライン，皮膚真菌症診断，治療ガイドライン5）に従い，培養でカンジダ属真菌のコロニーを確認しかつ，直接顕微鏡検査で菌要素を認めたものを舌カンジダ症と診断することとした。４．統計学的処理　アンケートで得られた選択肢による回答や検査結果についてはクロス集計表を作成し，得られた分布を比較した。得られたデータはχ2検定を用いて検討し有意水準は５％未満とした。統計処理には，SPSS ver.23を用いた。Ⅲ　結果１．舌表面の性状と自覚症状　舌の自覚症状と疼痛を有していた症例は２例，舌表面に白苔が見られた症例が４例みられた。その他の異常な変化は見られなかった。２．直接顕微鏡検査結果　直接顕微鏡検査を全例に施行したが，真菌要素は全例に検出されなかった。後述する培養結果でカンジダ属真菌のコロニーが分離された17検体は直接顕微鏡検査でも菌要素が見られなかった。以上より，今回施行した全症例は舌カンジダ症と診断されなかった。３．培養結果　総検体，100例の培養を施行したところ，17検体（17.0％）にカンジダ属真菌のコロニーが分離された。分離された菌種で最も多くみられたのはCandida albicans（13検体）であった。続いてCandida glaburata（２検体）でこの２種で全分離菌種の約90％を占めていた。　また検出された分離菌種を単独菌種と複数菌種で比較しみると，単独分離された検体はCandida albicansが11検体，Candida glabrataが４検体であった。単独菌種ではCandida albicansが73％と最も多く分離された。複数分離された検体は，Candida albicans と Candida krusei が １ 検 体，Candida albicansとCandida glabrataが１検体であった（表１）。４ ．舌表面の症状及び自覚症状とコロニー分離との関係　カンジダ属真菌コロニーの分離の有無と舌の性状及び自覚症状との間には，各々有意差はみられな表１　コロニーが分離された17検体の菌種の内訳Candida albicans 単独 11Candida glabrata 単独 4Candida albicans＋Candida krusei 1Candida albicans＋Candida glabrata 1計 17表２　各ライフスタイルとカンジダ属真菌分離率の比較（N＝100）カンジダ（＋） カンジダ（−） ｐ値喫煙 あり（n=0） 人数（％）なし（n=100）人数（％）0（0）17（17）0（0）83（83）飲酒 あり（n=71） 人数（％）なし（n=29）人数（％）13（18.3）４（13.8）58（81.7）25（86.2） 0.77歯磨き（１日３回以上）あり（n=12） 人数（％）なし（n=88）人数（％）４（33.3）13（14.8）8（66.7）75（85.2） 0.12舌のブラッシングあり（n=25） 人数（％）なし（n=75）人数（％）3（12.0）14（18.7）22（88.0）61（81.3） 0.55歯間ブラシ あり（n=3） 人数（％）なし（n=97） 人数（％）0（0）17（17.5）3（100）80（82.5） 1.00表３　気管支喘息罹患学生とカンジダ属真菌の分離率（N＝100）カンジダ（＋）カンジダ（−） ｐ値気管支喘息 罹患している　（n=7）　人数罹患していない（n=93）人数４（57.1）13（14.0）３（42.9）80（86.0） 0.15   若年者の舌から分離されたカンジダ属真菌の検討− 3 −かった。５．生活スタイルとコロニー分離との関係　カンジダ属真菌コロニーの分離と喫煙，アルコール飲酒習慣，歯磨きの励行，ブラッシング施行，歯間ブラシの使用などの生活スタイルとの間には有意な差はみられなかった（表２）。６．疾病とコロニー分離との関係　疾病との関係をみると，気管支喘息罹患者にのみ有意差がみられた（表３）。気管支喘息の罹患者７人のうち４人がコロニー分離陽性であった。７．服薬とコロニー分離との関係　気管支喘息罹患者７人のうち，コロニー分離陽性者４人全員が治療の為，ステロイド吸入歴及び使用中であった。Ⅳ　考察　20代前後の若年者の舌からのカンジダ属真菌分離の報告は我々の知る限りUmezawa Yら6）の報告がみられる。彼らの検査方法と今回施行した我々の検査方法はやや異なっている為，単純に比較することはできない。彼らの報告では，カンジダ属真菌分離率は30.6％と今回の我々の結果（17.0％）と異なり，高率であった。しかし ,  今までの高齢者の報告2）3）と比べると，低率であった。今回，我々は津島3）4）の施行した検査方法と全く同様の方法で直接顕微鏡検査と分離培養を行った。そこで，今回の直接顕微鏡検査結果を津島3）4）の報告と比べてみると11歳から16歳では０％，今回の我々の結果は０％，65歳以上の高齢者の16％であった。これらの結果より，直接顕微鏡検査で菌要素が検出される，いわゆる舌カンジダ症と診断される症例は高齢者では見られたが，小，中学生や今回施行した若年者ではみられなかった。一方，分離状況を比較してみると，11歳から16歳のカンジダ属真菌分離率は4.2％，今回施行した若年者の舌からのカンジダ属真菌の分離結果は分離率17％，65歳以上のカンジダ属真菌分離率は80.4％であった。この結果より，舌からのカンジダ属真菌の分離率は年代を重ねるにつれ増加することが明瞭に示された。そのカンジダ属真菌の分離率の増加の原因の一つとして，加齢による，口腔内環境の変化が考えられる。年代を経るにつれ，口腔内生理環境の変化7）8）や免疫機能の変化9）などにより舌表面にカンジダ属真菌が定着し易い環境になっていくものと思われた。　今回の分離されたカンジダ属菌種であるが，Candida albicans，Candida glabrataとCandida kruseiの３菌種が分離された。２例はCandida albicansとCandida glabrata，Candida albicansとCandida kruseiの複数分離例であった。今回の結果も，過去の文献10）11）と同様に口腔内に分離された主要なカンジダ属真菌種はCandida albicansであった。次いでnon albicans Candidaの代表菌種であるCandida glabrataであった。この結果も，今までの報告と同様であった3）。　カンジダ属真菌の分離された若年者と分離されなかった若年者との違いはいかなる原因に基いているのかを検討したが，舌の表面の性状や自覚症状，あらかじめ質問して得た，ライフスタイルの情報からは，有意な関係は推察できなかった。　罹患している病気とカンジダ属真菌が分離された若年者との関係をみてみると，気管支喘息に罹患している若年者にのみ，カンジダ属真菌の分離が有意に高率にみられた。カンジダ属真菌が分離された気管支喘息に罹患している学生全員がステロイド吸入治療経験を有していた。過去の報告12）にあるように，ステロイド吸入剤を使用していることによる，宿主側の防御機能低下が生じていることが推察された。学校においてこの口腔内のカンジダ属真菌を分離する検査が，学生の口腔内が易感染状態にあるかどうかの鋭敏な検査の一つとして使えるようになるかは今後の検討課題である。V　結語　100例の若年者の口腔内のカンジダ属真菌の直接顕微鏡検査と分離培養を試みた。直接顕微鏡検査では全例陰性，分離培養では17例の陽性例がみられた。分離菌種はCandida albicansが分離された症例が13例（２例は複数分離例）で最も多く，次にCandida glabrataが５例（１例は複数分離例），Candida krusei（複数分離例）が１例であった。既報と比較することにより，加齢に伴い，次第に口腔内のカンジダ属真菌の分離率が増加することが示された。気管支喘息罹患者とカンジダ属真菌の分離陽性には有意な関係がみられた。参考文献１）西川朱實 :カンジダの菌学 .真菌誌 38: 126-128, 2007２）加藤卓朗，木村京子，谷口浩子ほか：高齢者の舌からの直接顕微鏡検査と分離培養によるCandida albicans の検出．真菌誌 38:253-257, 1997３）津島弘文：高齢患者の舌から分離されたカンジ津島 愛子− 2 −集団や仮性菌糸）の有無を調べた。その結果，真菌要素を認める材料を直接顕微鏡検査陽性とした。培養は津島3）4）の施行した方法に準じておこなった。すなわち，滅菌綿棒で舌表面を約10回擦過して検体材料とした。培地としてクロモアガーカンジダ培地を用いた。検体材料を培地に塗抹後，35℃，48時間恒温器内で培養後，コロニーの有無とコロニーの発色の違いによりカンジダ属真菌の菌種を同定した。日本皮膚科学会ガイドライン，皮膚真菌症診断，治療ガイドライン5）に従い，培養でカンジダ属真菌のコロニーを確認しかつ，直接顕微鏡検査で菌要素を認めたものを舌カンジダ症と診断することとした。４．統計学的処理アンケートで得られた選択肢による回答や検査結果についてはクロス集計表を作成し，得られた分布を比較した。得られたデータはχ2検定を用いて検討し有意水準は５％未満とした。統計処理には，SPSSver.23を用いた。Ⅲ 結果１．舌表面の性状と自覚症状舌の自覚症状と疼痛を有していた症例は２例，舌表面に白苔が見られた症例が４例みられた。その他の異常な変化は見られなかった。２．直接顕微鏡検査結果直接顕微鏡検査を全例に施行したが，真菌要素は全例に検出されなかった。後述する培養結果でカンジダ属真菌のコロニーが分離された17検体は直接顕微鏡検査でも菌要素が見られなかった。以上より，今回施行した全症例は舌カンジダ症と診断されなかった。３．培養結果総検体，100例の培養を施行したところ，17検体（17.0％）にカンジダ属真菌のコロニーが分離された。分離された菌種で最も多くみられたのはCandida albicans（13検体）であった。続いてCandida glaburata（２検体）でこの２種で全分離菌種の約90％を占めていた。また検出された分離菌種を単独菌種と複数菌種で比較しみると，単独分離された検体はCandidaalbicansが11検体，Candida glabrataが４検体であった。単独菌種ではCandida albicansが73％と最も多く分離された。複数分離された検体は，Candidaalbicans と Candida krusei が １ 検 体，CandidaalbicansとCandida glabrataが１検体であった（表１）。４．舌表面の症状及び自覚症状とコロニー分離との関係カンジダ属真菌コロニーの分離の有無と舌の性状及び自覚症状との間には，各々有意差はみられな表１ コロニーが分離された17検体の菌種の内訳Candida albicans 単独 11Candida glabrata 単独 4Candida albicans＋Candida krusei 1Candida albicans＋Candida glabrata 1計 17表２ 各ライフスタイルとカンジダ属真菌分離率の比較（N＝100）カンジダ（＋） カンジダ（−） ｐ値喫煙 あり（n=0） 人数（％）なし（n=100）人数（％）0（0）17（17）0（0）83（83）飲酒 あり（n=71）人数（％）なし（n=29）人数（％）13（18.3）４（13.8）58（81.7）25（86.2） 0.77歯磨き（１日３回以上）あり（n=12）人数（％）なし（n=88）人数（％）４（33.3）13（14.8）8（66.7）75（85.2） 0.12舌のブラッシングあり（n=25）人数（％）なし（n=75）人数（％）3（12.0）14（18.7）22（88.0）61（81.3） 0.55歯間ブラシ あり（n=3） 人数（％）なし（n=97）人数（％）0（0）17（17.5）3（100）80（82.5） 1.00表３ 気管支喘息罹患学生とカンジダ属真菌の分離率（N＝100）カンジダ（＋）カンジダ（−） ｐ値気管支喘息 罹患している （n=7） 人数罹患していない（n=93）人数４（57.1）13（14.0）３（42.9）80（86.0） 0.15   津島　愛子− 4 −ダ属真菌の検討．広島医学 67:8-12, 2014４）津島弘文：小，中学生の舌からのカンジダ分離．広島医学 66:171-173, 2013５）渡辺晋一，望月隆，五十棲健ほか :皮膚真菌症診断．治療ガイドライン．日本皮膚科学会雑誌119:289-300, 2009６）Umezawa Y, Ninomiya K, Mataga I: Prevalence of Candida carriage in healthy oral cavity. 日口内誌18:31-38, 2012７）山崎裕，佐藤淳，秦浩信ほか :義歯に定着したカンジダ菌種の評価−オゾン水を用いた義歯洗浄効−．日口粘膜誌 17:44-49, 2011８）Dodds MW, Johnson DA, Yeh CK: Health benefits of saliva:a review. Journal of Dentistry 33:223-233, 2004９）湊長博：免疫老化と疾患：胚中心反応と濾胞性T細胞応答．生化学84 :  203-208, 201210）Akapan A, Morgan R: Oral candidiasis. Post graduated Medical Journal 78: 455-459, 200211）Li L, Redding S, Dongari-Bagtzoglou A: Candida glabrata, an emerging oral opportunistic pathogen. Journal of Dental Research 86: 201-295, 200712）加藤卓朗：皮膚カンジダ症の臨床面．真菌誌 48:123-125, 2007

Isolation of Candida Species from the Tongues of Young Subjects

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