Cryopréservation des gamètes de mollusques bivalves

Abstract

ThIs report describes is a preliminary study on oyster cryopreservation on cupped oysters : Crassostrea gigas. Cryopreservation will be used to make crosses and hybridize different species of  Crassostrea. Liquid nitrogen is used to freeze oyster sperm. The deep freezing of samples was made with a "Minicool LC 40" system which used liquid nitrogen to decrease the temperature of samples to -70°C at a speed of 4.7°C/mn. The samples were immersed into liquid nitrogen for storage. The sperm was obtained by stripping than deep frozen. Five cryoprotectors, Glycerol, Methanol, sucrose DMSO and PVP were tested AT differents concentrations from 5% to 15%, but none of them could be used alone. The association between DMSO at 10% and 15% with different concentrations of glycine from 0,2% to 5% were studied with different time of contact (from 5min to 60min) before freezing and 4 different ways of warming. The combination of DMSO 10% and Glycine 0,8% in contact for 15min with the oysters sperm an when the oysters sperm was in contact for 15 minutes with a mixture of DMSO at 10% and Glycine a 0.8%. After sperm is warned for 1min 15s at 35°C. The fertility is 13,21 % in compared to the control. It is the best protocol to cryopreserve oyster sperm in this study.Ce rapport constitue la base d'une étude sur la cryopréservation du sperme d'huîtres creuses Crassostrea gigas .La cryopréservation servira lors des croisements ou d'hybridations d'huîtres L'azote liquide est utilisée comme source de froid . La congélation des échantillons s'effectue grâce à "Minicool LC 40" qui utilise l'azote, pour descendre la température des échantillons à -70°C à une vitesse de 4.7°C/mn. Les échantillons sont alors plongés directement dans l'azote pour le stockage. Le sperme est obtenu par stripping, puis congelé. Cinq cryoprotecteurs, le glycérol, le méthanol, le sucrose, le DMSO et le PVP, sont testés à des concentrations variant de 5% à 15%, aucun n'est utilisable seul. L'association du DMSO à 10% et 15%, et d'une variation de glycine de 0.2% à 5% est étudiée, des temps de contact de 5mn à 60mn et 4 modes de réchauffement. La combinaison de 10% de DMSO et de 0.8% de glycine, mis en contact 15mn avec le sperme et réchauffé pendant 1mn15s à 35°C, fournit une fertilité optimale, 43.21% par rapport au témoin