Alnus acuminata es una especie forestal a la cual mundialmente se ha prestado gran interés, bien sea como árbol asociado a fijadores de nitrógeno o como árbol muy promisorio para la reforestación

Gonzaga-Gutiérrez, Luis

Spanish

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Ri sa ral da, Quin dío y Hui la, con t° en tre 7­17 °C, pre ci pi ta cio nes anua les de 1  000 a 2  500 mi lí me tros y al ta hu me­dad re la ti va. Co mo el jaúl o ali so (co mo se lo co no ce en Co lom bia) es una es pe cie aló ga ma de po li ni za ción ane mó fi la, se tie nen ro da les se mi lle ros pa ra la ob ten­ción de se mi lla, en lu gar de ár bo les ais la­dos, por el al to ries go de en do ga mia que es to con lle va. Exis ten plan ta cio nes con fi nes prin ci pal men te pro tec to res en Ri sa­ral da, Cun di na mar ca, Na ri ño, Quin dío y Cal das (CO NIF, 1996).En re la ción con su pa pel co mo ár bol muy pro pio pa ra la re fo res ta ción se en cuen tra que Al nus acu mi na ta es tá sien do em plea do en pro gra mas de es te ti po en Nue va Ze lan da (Ha lloy, 1996) y en el con ti nen te afri ca no en pro gra mas pa ra ob ten ción de ma de ra co mo com­bus ti ble. Y la más im por tan te ins ti tu ción que agru pa los re fo res ta do res de Amé ri­ca, la coo pe ra ti va CAM CO RE, lo ha se ña la do co mo una de las es pe cies más im por tan tes en sus pro gra mas de pro­Abs tract Calluses of Alder Tree (Alnus acuminata H.B.K) were obtained in MS/2 media with combinations of auxins and cytokinins (ANA 1 mg.L and BA 3 mg. L­1). After transference of these calluses into MS media without hormones, a high rate of regeneration of somatic embryos has been obtained. Germination of somatic embryos was achieved in a medium with giberelin.In tro duc ciónAl nus acu mi na ta es una especie fo res tal a la cual mun dial men te se ha pres ta do gran in te rés, bien sea co mo ár bol aso cia­do a fi ja do res de ni tró ge no o co mo ár bol muy pro mi so rio pa ra la re fo res ta ción. En Co lom bia se en cuen tra na tu ral men te en los bos ques se cos, hú me dos y muy hú me dos del mon ta no y mon ta no ba jo, en es pe cial en las pro vin cias de Cal das, 114Vol. 14;  Nº 2.El Jaúl (Al nus acu mi na ta)  un fo res tal con gran res pues ta a la em brio gé ne sis so má ti ca Luis Gonzaga Gu tié rrez L.11 Bió lo go. La bo ra to rio de Bio tec no lo gía Ve ge tal, Fa cul tad de Cien cias Am bien ta les. Uni ver si dad Tec no ló gi ca de Pe rei ra, Co lom bia, Su ra mé ri ca. Correo electrónico: luis go n@am bien ta l.ut p.e du .coGonzaga Gu tié rrez L. Luis El Jaúl (Al nus acu mi na ta) un fo res tal con gran res pues ta a la em brio gé ne sis so má ti ca. Tecnología en Marcha. Vol 14 N° 2.de nu dos y ye mas ju ve ni les. Pa ra la de sin fec ción las ra mas se cor ta ron y se co lo ca ron en so lu ción de NaOCl 0,05 % de clo ro ac ti vo du ran te 24 ho ras, con el fin de al can zar to dos los si tios de la plan­ta, eli mi nan do po si bles agen tes con ta mi­nan tes. Lue go se les re ti ra ronn las ho jas y se la va ron los mi croes que jes con Twin 20.Co mo de sin fec tan te pre vio a la siem bra, se em pleó tam bién hi po clo ri to de so dio en con cen tra ción de 1,6% de clo ro ac ti­vo. Co mo an tio xi dan te se uti li zó L­cis­teí na (60 mg L­1) y co mo fun gi ci da Ben­la te (1 g L­1).To das las siem bras del ma te rial des cri to se hi cie ron en me dio MS/2. Adi cio nal­men te, se co lo ca ron L­cis teí na (60 mg.L­1) pa ra evi tar la oxi da ción de los ex plan­tes.Pa ra la eva lua ción de los me dios uti li za­dos y los tra ta mien tos hor mo na les, se par tió de tra ba jos pre vios rea li za dos en es ta es pe cie por Hod son et al., 1988 y Ba di lla et al., 1992. Ini cial men te, se eva lua ron tres di fe ren tes tra ta mien tos em plean do me dio Mu ras hi ge & Skoog a la mi tad de la con cen tra ción comple­men ta do con con cen tra cio nes de au xi­nas /ci to qui ni nas (ANA y BA) en di fe­ren tes com bi na cio nes, que con du je ron a la ob ten ción de ca llos (Cuadro 1). Co mo con trol se em pleó MS/2 sin hor mo nas con con cen tra cio nes de 4 % de sa ca ro sa y ge li fi ca do con Phy ta gel (Sig ma) al 3 %. El pH de to dos los me dios se ajus tó a 5,8 con NaOH 1N y HCl 1N an tes de la es te ri li za ción. Re sul ta dos y dis cu siónOb ten ción de ca llosDe bi do a que los tres me dios que apa re­cen en el Cuadro 1 eran re por ta dos co mo ade cua dos pa ra la mi cro pro pa ga ción, la tras for ma ción de los ex plan tes en 100 % duc ción. Se re por ta mi cro pro pa ga ción en las es pe cies Al nus glu ti no sa (Pe ri net et al., 1983; La var de et al., 1987), Al nus cris­pa (Trem blay et al., 1984), Al nus ne pa­len sis (Kaur et al., 1993), Al nus cre mas­togy ne (Tang et al., 1996), des ta cán do se los tra ba jos de Trem bay et al., Ves tri et al., Cre mie re et al., y Dha wan et al., con pu bli ca cio nes en cul ti vo in vi tro en di fe­ren tes es pe cies de Al nus, en los años 1984,1986 y 1987. Wa ki ta et al., 1997, re ge ne ró plan tas de Al nus fir ma a par tir de pro to plas tos de ho jas.Es pe cí fi ca men te en el gé ne ro Al nus acu mi na ta se en cuen tran cua tro tra ba jos en mi cro pro pa ga ción, tres de los cua les no fi gu ran en los abs tracts in ter na cio­na les son es tos los rea li za dos por Hod­son et al., 1988 en la Uni ver si dad Ja ve­ria na en Bo go tá; En ri co, R.J., 1997 de Ar gen ti na y Gon zá lez y Vil ca del Pe rú en 1998. El cuar to es re por ta do por los cos ta rri cen ses Ba di lla et al., 1992 los cua les tra ba ja ron en mi cro pro pa ga ción de la es pe cie.La pro pa ga ción ma si va de jaúl o ali so lo gra da en el La bo ra to rio de Bio tec no­lo gía Ve ge tal de la Uni ver si dad Tec no­ló gi ca de Pe rei ra y con el apo yo del Ins ti tu to Co lom bia no pa ra el De sa rro llo de la Cien cia y la Tec no lo gía “Fran cis co Jo sé de Cal das” –COL CIEN CIAS– es el úni co tra ba jo re por ta do pa ra es ta es pe cie que pro po ne la vía de em brio gé­ne sis so má ti ca (Ma ru lan da et al., 1998), y res pon de a la ne ce si dad de la con ser­va ción, ma ne jo y apro ve cha mien to de es pe cies fo res ta les que pre sen tan gran po ten cia li dad pa ra la re fo res ta ción y la con ser va ción de sue los. Ma te ria les y méto dosMa te rial ve ge talPlan tas de Al nus acu mi na ta H.B.K. de un año de edad se uti li za ron co mo do na do ras 115Vol. 14;  Nº 2.116Vol. 14;  Nº 2.de ca llos (Fotos 1 y 2) a los trein ta días de ex po si ción, con el tra ta mien to ANA 1 mg L­1 + BA 3 mg L­1 , nos su gi rió de in me dia to la vía de la em brio gé ne sis so má ti ca, ra zón por la cual los es fuer zos ha cia la pro pa ga ción ma si va de es ta es pe cie en el La bo ra to rio se enfocaron a eva luar me dios ade cua dos pa ra la in duc­ción de em brio nes so má ti cos. De be re sal tar se que si bien la ma yo ría de los tra ba jos pre sen ta dos re por tan éxi tos en la ob ten ción de em brio gé ne sis uti li zan­do com bi na cio nes au xi nas /ci to qui ni nas, en las cua les la au xi na es tá en ma yor con cen tra ción que la ci to qui ni na, tra ba­jos co mo los de Rout et al., 1995 en Aca cia ca te chu, en cuen tran la con cen­tra ción ANA 0,5 mg. L­1 y Ki ne ti na 3 mg L­1 co mo ideal pa ra la em brio gé ne­sis; Igual men te, Bon neau et al., 1994 pro po ne con éxi to com bi na cio nes hor­mo na les pa ra em brio gé ne sis en don de la ci to qui ni na es más con cen tra da que la au xi na, pa ra la pro pa ga ción del fo res tal Euony mus eu ro paeus.In duc ción de em brio géne sis so má ti caTe nien do en cuen ta que la com bi na ción ANA 1 mg L­1 + BA 3 mg L­1 no ge ne­ra ba por sí mis ma em brio gé ne sis, ya que la ex po si ción de más de 120 días, tan to en luz co mo en os cu ri dad, pro vo ca ba so la men te pro li fe ra ción de ca llos de as pec to ma rrón. Se pro ce dió a eva luar Cuadro 1Me dios eva lua dos ini cial men te en mi croes que jes de Al nus acu mi na ta       Medios (mg. L­1) % Micropropagación % de producción   de callos  MS/2­ANA(1)BA(3) 0 100MS/2­ANA(1)BA(8) 0 0 MS/2­ANA(0,02)BA(10) 0 0 MS/2 (Sin hormonas)                  Control 0 0 Foto 1Segmento nodal (1 cm) de jaúl con formación de callo luego de 30 días de implantaciónFoto 2Callo embriogénico de jaúl de aspecto friablemo nas, con un por cen ta je de 46 % de pro duc ción de em brio nes en los ca llos lue go de seis me ses de ex po si ción (Grá­fi co 1), y te nien do en cuen ta que los pri me ros em brio nes apa re cie ron a los 120 días de ini cia do el tra ta mien to. Es to coin ci de con los tra ba jos en Aca cia, en los cua les ca llos em brio gé ni cos fue ron ob te ni dos des pués de co lo car los en me dio sin hor mo nas (Rout et al., 1995).Ger mi na ción de em brio nes, elon ga ción de plán tu las y adap ta ción a vi ve roLa ma yo ría de los em brio nes, 80 % ger­mi nan (Foto 4) tan to en luz co mo en os cu­me dios hor mo na les pa ra lo grar la pro­duc ción de em brio nes, en los cua les se uti li za ron en tre 30 a 50 ca llos por ca da tra ta mien to; di chos tra ta mien tos hor mo­na les con sis tie ron en ba jas con cen tra­cio nes de au xi na o bien la au sen cia to tal de ella (Cuadro 2). Los ca llos de los di fe ren tes tra ta mien tos fue ron eva lua­dos en con di cio nes de luz y os cu ri dad en con trán do se que la pro duc ción de em brio nes (Foto 3) no era ma yor en nin gu no de los ca sos, ra zón por la cual se con ti nuó la pro duc ción en con di cio­nes de 12 ho ras de luz. Los me jo res re sul ta dos co mo pue de ob ser var se en la Cuadro 2 se lo gra ron en me dio sin hor­117Vol. 14;  Nº 2.Cuadro 2Por cen ta je de te ji do em brio gé ni co ob te ni do a par tir de ca llos des pués de seis me ses de ex po si ción al tra ta mien to       Medios para Número de explantes % de callos     Embriogénesis (Callos) por tratamiento embriogénicos         (mg L­1)  MS/2­BA(5,0) 39 0MS/2­ANA(0,01) 35 0MS/2­KINET(0,5) 27 14MS/2­BA(10) 50 4MS/2 (sin hormonas) 28 4650403020100BA (5,0) ANA (0,01) KINET (0,5)Tratamientos% de tejidoembriogénicoBA (10) SinhormonasGrá fi co 1Por cen ta je de te ji do em brio gé ni co ob te ni do a par tir de ca llos des pués de seis me ses de ex po si ción al tra ta mien tomg L­1 (Ma ru lan da, 2000), con los cua les se ha lo gra do un óp ti mo de sa rro llo de las plán tu las ger mi na das (Foto 5).La adap ta ción a vi ve ro con sis te en co lo­car las plán tu las en ca mas de are na y tie­rra cu bier tas, con el fin de man te ner hu me dad al ta, lue go de 15 días de adap­ta ción, du ran te los cua les la cu bier ta es des ta pa da unas ho ras al día, se pa san las plán tu las a bol sas con tie rra. La su per vi­ven cia del ma te rial que se ha pa sa do a tie rra es de apro xi ma da men te el 70 %. Al ta ta sa de pro li fe ra ción de em brio nes por sub cul ti voLa ta sa de pro li fe ra ción em brio gé ni ca a par tir del ca llo que ha si do lim pia do de em brio nes, se ha eva lua do al re de dor de 15 em brio nes por ca llo de 1,5 cm de diá­me tro. Tal pro duc ti vi dad ocu rre apro xi­ma da men te 45 días des pués de lim pia dos los ca llos de los em brio nes. Co mo se ob ser va en el Cuadro 3, la pro li fe ra ción ocu rre no so lo en los me dios sin hor mo­nas (pro pios pa ra el sub cul ti vo) si no, ade más, en los ca llos li bres de em brio nes pre sen tes en los me dios pa ra ger mi na­ri dad apro xi ma da men te 15 días des pués de ser co lo ca dos en me dio MS/2 com­ple men ta do con 0,5 mg L­1 de áci do gi be ré li co so lo o en com bi na ción con ki ne ti na 1 mg L­1 Pa ra la elon ga ción de las plán tu las se han uti li za do tra ta mien tos si mi la res a los em plea dos en el la bo ra to rio en la mi cro pro pa ga ción de mo ra de cas ti lla; es to es AIA 0,05 mg L­1 + AG3 0,25 mg L­1 y AIA 0,5 mg L­1 + AG3 0,5 118Vol. 14;  Nº 2.Foto 3Embriones somáticos de jaúl (0,5 cm) de aspecto cotiledonarFoto 5Plántula (3 cm) de embriones somáticos de jaúl en fase de elongaciónFoto 4Plántula de jaúl (1,5 cm) germinada a partir de embriones somáticosAG3 0,5 mg L­1Un al to por cen ta je de su per vi ven cia (70 %) se lo gró du ran te la fa se de acli­ma ta ción a vi ve ro, la cual se rea li za man te nien do las plán tu las en me dio de are na y tie rra, cu bier tas por apro xi ma da­men te 15 días. Una ele va da pro li fe ra ción em brio gé ni ca (apro xi ma da men te 15 em brio nes por ca llo de 1,5 cm de diá me tro), se ha lo gra do al sub cul ti var los ca llos li bres de em brio nes, en un me dio sin hor mo nas.De bi do que el ma te rial sem bra do par­tió de ár bo les de más de un año de edad, exis te la pro ba bi li dad que la via em brio gé ni ca pue da ser im ple men ta da en ma te rial “eli te” adul to pa ra pro gra­mas de pro duc ción.Se ha de mos tra do la pro pa ga ción ma si va de Al nus acu mi na ta por la vía de la em brio gé ne sis so má ti ca.Re co men da cio nesSe re co mien da el es ca la mien to de la pro pa ga ción ma sal de ali so ce re zo me dian te bio rreac to res o sis te ma RI TA, en si tua cio nes ta les co mo pro pa ga ción de ma te rial se lec cio na do en pro gra mas de pro duc ción de ma de ra pa ra eba nis te­ría, pro duc ción de pul pa, o pro duc ción de cer cas vi vas, en las cua les la uti li za­ción, y en los me dios pa ra elon ga ción de plán tu las, don de con fre cuen cia apa re ce em brio gé ne sis se cun da ria.Con clu sio nesUti li zan do ma te rial de plan tas de un año de edad de Al nus acu mi na ta y con la com bi na ción hor mo nal ANA 1 mg L­1 + BA 3 mg L­1 en me dio MS/2 se lo gró el 100 % de pro duc ción y pro li fe ra ción de ca llo, lue go de 30 días de ex po si ción al tra ta mien to, en con di cio nes tan to de luz co mo de os cu ri dad.Em brio nes so má ti cos fue ron pro du ci­dos en me dio sin hor mo nas a par tir de pa sar los ca llos ob te ni dos con la com bi­na ción ANA 1 mg L­1 + BA 3 mg L­1 y lue go de 180 días de ex po si ción al tra ta­mien to en con di cio nes tan to de luz co mo de os cu ri dad (ob te nién do se em brio nes so má ti cos en apro xi ma da­men te      50 % de los ca llos co lo ca dos en me dio li bre de hor mo nas)Una al ta ta sa de ger mi na ción de los em brio nes (80 %) se lo gró em plean do me dio MS/2 com ple men ta do con 0,5 mg L­1 de áci do gi be ré li co so lo o en com bi na ción con ki ne ti na 1 mg L­1.El óp ti mo de sa rro llo de las plan tas se lo gró con los me dios AIA 0,05 mg L­1 + AG3 0,25 mg L­1 y AIA 0,5 mg L­1 + 119Vol. 14;  Nº 2.Cuadro 3Ta sa de pro li fe ra ción de em brio nes por sub cul ti vo lue go de 45 días de ex po si ción Tratamiento Número promedio de  embriones por callo  de 1,5 cm de diámetroSin hormonas 15AG3 0,5 mg L­1 10AIA 0,05 mg L­1+ AG3 0,25 mg L­1 5AIA 0,5 mg L­1+ AG3 0,5 mg L­1 5in So ma tic Embr yos from Lea ves of Quer cus su ber”. 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El Jaúl (Alnus acuminata) un forestal con gran respuesta a la embriogénesis somática

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El Jaúl (Alnus acuminata) un forestal con gran respuesta a la embriogénesis somática

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