A paratuberculose, ou Doença de Johne, é uma doença crônica degenerativa que incide nos ruminantes domésticos. O agente etiológico Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) é um bacilo de crescimento lento pertencente ao complexo Mycobacterium avium (MAI). Nos EUA, a enfermidade acarreta grandes prejuízos econômicos. No Brasil, são poucos os relatos de casos da doença e não se conhece a real situação epidemiológica da paratuberculose bovina. O objetivo desse trabalho foi padronizar um teste de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real para auxiliar na confirmação de casos da enfermidade.A técnica foi testada com DNA de diversas espécies do gênero Mycobacterium e avaliada quanto à sensibilidade e eficiência. Uma vez atestada sua confiabilidade, a metodologia foi aplicada para confirmar um caso suspeito de paratuberculose bovina. Foi enviada para análise no Laboratório Nacional Agropecuário/MG (Lanagro/MG) amostra de linfonodo mesentérico e alça intestinal de um bovino da raça holandesa com suspeita de paratuberculose. A amostra foi processada e inoculada para crescimento em meio Herrold’s com micobactina. A combinação entre a técnica do isolamento bacteriano em meio apropriado juntamente com a PCR em tempo real foi capaz de diagnosticar a presença da micobactéria no animal. Esse foi o primeiro caso de paratuberculose confirmado em um laboratório oficial do Ministério da Agricultura
