thesis

Detection of Borrelia burgdorferi sensu lato DNA in serum and parasitizing ixodids of the wild boar (Sus scrofa) in northern Portugal by nested-PCR

Abstract

Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da SaúdeA Borreliose de Lyme (BL) é a zoonose transmitida por carraças mais frequente no hemisfério norte. Esta doença é causada por espiroquetas do complexo B. burgdorferi s.l. e por causa do seu difícil diagnóstico laboratorial e amplo número de manifestações clínicas é ainda subdiagnosticada em Portugal. Vertebrados como os ratos, veados e aves passeriformes têm um papel essencial na transmissão dos agentes da BL, tanto como reservatórios para as espiroquetas como hospedeiros onde as carraças infetadas se alimentam. O objetivo deste estudo foi averiguar qual o papel do javali (Sus scrofa) no ciclo epidemiológico da BL, tendo como área de estudo a região de Trás-os-Montes, norte de Portugal. Para concretizar este objetivo, foram colectados 91 soros e 239 carraças a partir da vegetação e de uma amostra populacional de 107 javalis (e uma raposa) abatidos em montarias na região durante a época venatória de 2011/2012. Um total de 205 amostras (114 carraças fêmeas e 91 soros de animais capturados) foram submetidas a extração de DNA e amplificação por nested-PCR. O DNA de Borrelia foi detetado pela primeira vez em soro de javali e a sequenciação demonstrou 93-99% de homologia com B. afzelii em três das quatro amostras de soro positivas (4+/91). Os resultados moleculares obtidos neste estudo sugerem o papel potencial (?) do javali como reservatório para o agente da BL e hospedeiro para carraças, assim como a importância de técnicas sensíveis como o nested-PCR para uma deteção de DNA bem sucedida. Por último, mas não menos importante, estes resultados são relevantes na medida em que contribuem para uma melhor compreensão e conhecimento da epidemiologia de B. burgdorferi s.l. na fauna silvática do país.Lyme Borreliosis (LB) is the most common tick-borne zoonosis in the northern hemisphere. This disease is caused by spirochetes of the B. burgdorferi s.l. complex and because of its difficult laboratory diagnostic and broad range of clinical presentations, it’s still underdiagnosed in Portugal. Vertebrates like mice, deer and passerine birds play an essential role in the transmission of the LB agents, either as reservoir hosts for the spirochete or as hosts for infected ticks to feed on. The goal of this study was to determine the role of the wild boar (Sus Scrofa) in the epidemiological cycle of LB in the Trás-os-Montes region, northern Portugal. To perform this objective, 91 sera and 239 ticks collected from vegetation and 107 wild boars (and one fox) shot in this region during the hunting season of 2011/2012. A total of 205 samples (114 female ticks and 91 sera from captured animals) were subjected to DNA extraction and nested-PCR amplification. Borrelia DNA was detected for the first time in wild boar sera and the sequencing showed 93-99% identity with B. afzelii in three of the four positive serum samples (4+/91). The molecular results obtained in this study emphasize the potential role (?) of the wild boar as a reservoir host for the agent of LB and host for feeding ticks, as well as the importance of sensitive techniques like the nested-PCR for a successful DNA detection. Last but not least, these results are relevant in a way that they contribute for a better understanding and knowledge of B. burgdorferi s.l. epidemiology in the wild animals of the country

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