research article

Viabilidade de folículos pré-antrais bovinos isolados de ovários após vitrificação

Abstract

The aim of this study was to evaluate isolated bovine preantral follicles after vitrification procedure. Ovaries were obtained at a local slaughterhouse and submitted to follicular isolation. From the obtained suspension, one part was destined to control group. The remaining suspension was divided into two parts, one to the toxicity test and the other one to the vitrification procedure. For vitrification, the follicles were exposed for 1 min to vitrification solution-1, composed of 10% ethylene glycol, 10% DMSO in saline solution (NaCl 0.9%), and then 1 min to vitrification solution-2, composed of 20% ethylene glycol, 20% DMSO in the same saline solution supplemented with 0.5 M sucrose. The follicles were vitrified by use of glass capillaries and remained vitrified for 24 h. After warming, they were transferred to a 0.25 M sucrose solution for 5 min and then transferred to a 0.15 M sucrose solution for another 5 min. For the toxicity test, the follicles were only exposed to cryoprotectants and analised. The preantral follicles were classified as non-viable orviable when they were stained or not stained by trypan blue, respectively. Differences (P<0.05) in follicular viability were observed among the control, non-vitrified group (93.6%), and exposed (64.1%) or vitrified follicles (66%). The percentages of normal follicles found after exposure to cryoprotectant did not differ significantly (P>0.05) from that found after vitrification, indicating that the reduction of percentage of viable preantral follicles was due to a toxic effect of cryoprotectants and not to the vitrification procedure itself.KEYWORDS: bovine; cryoprotectants; oocytes; vitrification.O objetivo de presente estudo foi avaliar a viabilidade de foliculos pré-antrais bovinos isolados após processo de vitrificação. Ovários foram obtidos em abatedouro e submetidos a isolamento folicular. A suspensão obtida foi dividida em três partes, uma parte foi para o grupo controle, uma para o teste de toxicidade e a outra para procedimento de vitrificação. Para vitrificação, os folículos foram expostos por 1 minuto à solução de vitrificação 1, composta de 10% de etileno-glicol, 10% de DMSO em solução salina (NaCl a 0,9%), e então 1 minuto à solução de vitrificação 2, composta de 20% de etileno-glicol, 20% de DMSO na mesma solução agora suplementada com 0,5 M de sacarose. Os folículos foram vitrificados com o uso de capilares de vidro e permaneceram vitrificados por 24 horas. Após desvitrificação, foram transferidos para solução a 0,25 M de sacarose por 2 minutos e então transferidos para solução de 0,15 M de solução de sacarose por outros 2 minutos. Para o teste de toxicidade, os folículos foram somente expostos aos crioprotetores e analisados. Os foliculos pré-antrais foram classificados em não viáveis ou viáveis quando foram corados ou não com o azul de tripan, respectivamente. Diferenças (P<0,05) na viabilidade folicular foram observadas entre o controle (93,6%) e folículos expostos (64,1%) ou vitrificados (66%). A porcentagem de folículos normais encontrados após exposição aos crioprotetores não apresentou diferença em relação aos vitrificados, indicando que a redução de viabilidade é atribuída aos efeitos tóxicos e não ao processo de vitrificação.PALAVRAS-CHAVE: bovinos; crioprotetores; ovócitos; vitrificação

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