新潟大学博士（医学）新潟大学平成20年3月24日新大院博（医）第1198号新大院博（医）甲第1198号thesi

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筒井, 奈々子

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－ 270 － － 271 －r　『礫鞘｛　¶一　「『｝　噺氏　　　　　名学　　　　　位学位記番号学位授与の日付学位授与の要件博士論文名つついななこ筒井奈々子博士（医学）新大院博（医）第1198号平成20年3月24日学位規則第4条第1項該当Distinct cytokine-induching ability of Streptococcus pyogenes strains isolated from toxic shock-like syndrome cases（劇症型溶血性レンサ球菌感染症症例から分離されたS.pyogenes株のサイトカイン産生能に関する検討）論文審査委員 主査副査副査教授教授教授山本達男下條文武藤井雅寛博士論文の要旨【目的】5trθρτococcμ5ρyo9θηθ5はA群レンサ球菌（GAS）で知られるグラム陽性球菌である。＆ρyo9θηθsにより引き起こされる疾患は扁桃炎、蜂窩織炎、リンパ節炎、丹毒などの急性感染症の他に、感染宿主の免疫反応が関与する狸紅熱やリウマチ熱、急性糸球体腎炎など多岐に渡るが、その中でも劇症型レンサ球菌感染症（TSLS）は致死的でより重篤な感染症である。　TSLSは黄色ブドウ球菌による毒素性ショック症候群（TSS）に類似した疾患で、大量のサイトカイン産生が惹起される。A群以外のserogroupに属するレンサ球菌もTSLSを引き起こすが、　GASは報告例の94％を占める。病原因子としてはM蛋白の他にも様々な因子が候補として考えられているが、何故＆ργ09θηe5にTSLSを引き起こす株と起こさない株があるかは不明である。TSLS症例から分離される菌株の多くはM蛋白1（M1）型またはM3型である。しかし他の型も分離される他、　M1型やM3型は無症状の保菌者や軽症の局所感染症患者からも分離される。このことから本研究ではM蛋白以外の病原性因子の関与の可能性を考え、TSLS症例から分離されたM3型株と非TSLS症例から分離されたM3型株をもちいてマウスでの病原性とサイトカイン誘導能力を比較解析した。【材料と方法】TSLS症例から分離されたM3型の5ρyo9θ5θ54株と、無症状または咽頭炎由来のM3型＆ρyoσθηθ54株を用いた。マウス感染実験では、各菌株5×107CFUを腹腔内に接種し、24時間後に血液を採取して血液中の生菌数を測定した。また、接種6時間後と24時間後の血清中のサイトカインをELISA　kitを用いて測定した。　In　vitroにおいてサイトカイン誘導能を比較した実験では、マウスの腹腔マクロファージを分離し、8ρア09θηθ5を加えて培養して6時間後のサイトカインをELISA　kitを用いて測定した。溶血活性の測定実験では、各菌株を液体培養し、培養上清を採取して溶血活性を比較した。－ 270 － － 271 －㌔、一w照一口　「・　＾→【結果】（1）マウスの腹腔内にTSLS分離株と非TSLS分離株を接種し・24時間後にマウス血液中の生菌数を測定したところ、TSLS群は非TSLS群に比較して、有意に高値を示した。（2）接種6時間後に血中サイトカイン（TNF一αとIL－1α）を測定したところ・TSLS群が非TSLS群に比較して、有意に高い値を示した。IL－6においては有意差を認めなかったが・TSLS群の多く（4匹中3匹）でIL－6値は780　P9／m1に上り、非TSLS群の最高値（465　P9／m1）より高値であった。接種24時間後に測定したIFN一γ値は、　TSLS群が非TSLS群に比して有意に高値であった。（3）マウス腹腔マクロファージに菌株を加え、6時間後にTNF一αを測定したところ・TSLS群は非TSLS株に比べて有意に高い値を示した。しかし、　IL－1αとIL－6では有意差を認めなかった。（4）各菌株を液体培養し、培養上清を回収してヘモリシン活性を比較したところ・TSLS群が非TSLS由来株に比較して有意に高かった。【考察】本研究ではTSLSの発症にM蛋白以外の病原性因子が関与する考え・ともにM3型のTSLS由来株と非TSLS由来株についてマウスでの病原性、サイトカイン誘導能を比較・解析した。　TSLS由来株は非TSLS由来株に比べてマウス血液中残存時間が長く、かつTNF一αなどの血清炎症性サイトカイン濃度が高く、より強毒性と考えられた。In　vitroにおいてもほぼ同様の傾向を認めた。TNF一αは敗血症において重要なサイトカインで、ショックや組織障害を引き起こす。このようなTNF一α産生には主にマクロファー一ジが関与するが、　SpeAなどのスーパー抗原が誘導するT細胞依存性機序では説明できない。TSLS由来株がもつ強いSLO活性がTNF一αなどのサイトカイン誘導に関与している可能性がある。【まとめ】TSLS由来株は非TSLS由来株に比べて、マウスで病原性が強く、高い炎症性サイトカイン誘導能をもつ。TSLS由来株が示す高いSLO活性がTSLSの病態に関与している可能性がある。（論文審査の要旨）劇症型レンサ球菌感染症（TSLS）は、　Strθρtocoocロsρyogθロθsによって引き起こされる致死的な重症感染症である。本研究では同じM蛋白型を示すTSLS由来株と非TSLS由来株についてマウスでの病原性とサイトカイン誘導能を解析した。TSLS由来株は非TSLS由来株に比べてマウス血液中残存時間が長く、かつTNF一αなどの血清炎症性サイトカイン濃度が高く、より強毒性と考えられた。In　vitroにおいてもほぼ同様の傾向を認めた。　TNF一αは敗血症において重要なサイトカインで、ショックや組織障害を引き起こす。このようなTNF一α産生には主にマクロファージが関与する。SpeAなどのスーパー抗原が誘導するT細胞依存性機序では説明できないため、TSLS由来株がもつ強いSLO活性がTNF一αなどのサイトカイン誘導に関与しているのではないかと結論した。　以上、本研究はTSLS由来株の強い病原性を明らかにした点と、SLOがTSLSの病態に関与している可能性を示唆した点に、学位論文としての価値を認める。

Distinct cytokine-inducing ability of Streptococcus pyogenes strains isolated from toxic shock-like syndrome cases

https://niigata-u.repo.nii.ac.jp/record/5073/files/%E9%99%A2%E5%8D%9A%28%E5%8C%BB%291198.pdf

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