Il lavoro dell\u2019unit\ue0 operativa sar\ue0 orientato a caratterizzare le alterazioni di parametri cellulari e molecolari indotte dall\u2019esposizione a farmaci d\u2019abuso e a stimoli avversivi non evitabili. Pi\uf9 specificatamente, le modificazioni indotte dalle droghe verranno valutate in modelli di sensitizzazione a due tra i pi\uf9 diffusi farmaci d\u2019abuso, quali la morfina ed il delta-9-tetraidrocannabinolo, mentre per quanto concerne le alterazioni indotte da gli stimoli avversivi non evitabili ci avvarremo dei modelli comportamentali messi a punto dalle altre unit\ue0 partecipanti alla ricerca (Prof. Tagliamonte). Infine, per convalidare il possibile coinvolgimento di specifiche cascate intracellulari nei sopracitati processi ci avvarremo di topi geneticamente mutati che sotto- o sovra-esprimono la proteina di interesse.
A tale scopo verranno allestiti i seguenti saggi:
1. binding in autoradiografia per i recettori cannabici e i diversi sottotipi di recettori oppiacei eventualmente seguiti da saggi condotti su membrane delle aree cerebrali trovate positive, per meglio specificare i valori di Kd e Bmax;
2. binding in autoradiografia del [35S]GTPgammaS per valutare l\u2019efficienza di accoppiamento recettore/G proteine, eventualmente seguiti da saggi condotti su membrane delle aree cerebrali trovate positive, per specificare i parametri meccanicistici di tale interazione in termini di Kd, Bmax, EC50 e Emax;
3. valutazione in specifiche aree cerebrali delle variazioni a carico della cascata del cAMP in termini di livelli di cAMP, attivit\ue0 della PKA e induzione dei fattori di trascrizione cAMP correlati (CRE);
4. valutazione in specifiche aree cerebrali della cascata delle MAP Kinasi in termini sia di livelli che di attivit\ue0, prendendo in considerazione sia ERK1, che ERK2, p38 e JNK. In parallelo, verr\ue0 anche studiata l\u2019attivazione dei pi\uf9 comuni fattori di trascrizione ad essi correlati;
5. studio della risposta comportamentale basale, di quella indotta dall\u2019esposizione alle droghe, nonch\ue8 dell\u2019apprendimento dell\u2019avversione condizionata al gusto in animali knock out o iperesprimenti Ras-GRF1, fattore attivante di Ras in maniera tirosinkinasi-indipendente e cruciale per la trasduzione mediata da ERK.
Testo ingles
