A szilva himlő vírus elleni rezisztencia kialakításának lehetősége csonthéjas növényekben = Developing new strategies for plum pox virus resistance in stone fruit trees
Elkészítettünk egy konstrukciót, mely tartalmazta a karfiol mozaik vírus 35S promóterét, a NOS terminációs szignált, és e két szabályozó régió között a hasznos gént, vagyis a szilva himlő vírus köpenyfehérje génjét és a 3’ nem kódoló régióját inverted repeat formában nem transzlálható módon, köztük pedig egy intron szekvenciát. A kanamicin mentes konstrukcióval való dohány transzformálás után 477 vonalat neveltünk fel, melyből 15 pozitív eredményt adott PCR-rel. Később a 15 egyedből csupán egy tartotta meg transzgénikus tulajdonságát. Transzgénikus növényekkel oltási kísérleteket végeztünk. Az eredmények szerint a transzgénikus rezisztens rész sem alanyként, sem nemesként nem tudta biztosítani a rezisztenciát a nem rezisztens részeknek. Fontos kérdés, hogy ha egy rezisztens növényt más vírus felülfertőz, a növény elveszti-e rezisztenciáját. Az eredmények szerint egy rezisztens növényt, ha más vírus felülfertőz, akkor sem fogja elveszteni az adott vírusra a rezisztenciáját. A szilva transzformációs kísérletekben levélnyelet és sziklevelet transzformáltunk három különböző konstrukcióval, 433 hajtást neveltünk fel. Az első vizsgálatokban 81 volt PCR pozitív. Nagy részüknél a második vizsgálat negatív eredményt adott. Azonosítottunk egy a CP génben deléciós izolátumot, mely nem minden antiszérummal volt kimutatható megfelelő hatékonysággal. A rekombináns izolátumokat vizsgálva azonosítottunk egy második rekombinációs pontot is a P3 génben. | A new gene construct was designed containing the Cauliflower mosaic virus 35S promoter and NOS termination signal. Between these regions, the construct contained the PPV CP gene in inverted repeat form with an intron spacer sequence. Nearly 500 plants were grown up from transformation with these kanamycin marker free construct. Only 15 were positive by PCR for the transgene, but at the end only one stored the transgenic behaviour, which was resistant against PPV as well. Grafting experiment was done, concluding that the transgenic resistant part could not protect the non transgenic section. We demonstrated that the plant will not lose the transgenic mediated resistance if another virus infection is present using grafting experiments. In plum transformation experiment using petiole and cotyledon 433 shoot were produced. Out of more than 400 plants 81 were transgenic by PCR in he first PCR experiments. The second round most of them were PCR negative. A PPV isolate was identified containing a large deletion in he coat protein gene. This isolate was not detectable every antisera efficiently. Studying recombinant PPV isolates a second recombination point was identified int he P3 gene of the virus
