A kalcium homeosztázisban szerepet játszó fehérjék vizsgálata siRNS technikával. = The role of intracellular calcium stores in the regulation of calcium homeostasis in muscle cells under physiological and pathological conditions

Abstract

A protein kináz C (PKC) izoenzimek eltérő módon befolyásolják epidermális keratinocyták proliferációját és differenciálódását, melynek hátterében a megváltozott kalciumhomeosztázis és purinoreceptor expresszió áll. Epidermális keratinocyták (HaCaT és NHEK) osztódását rövid UVB besugárzás szignifikánsan csökkenti. A csökkent nyugalmi kalciumszint, alacsonyabb ATP-indukálta kalciumtranziens amplitúdók mellett a P2X3 és P2X7 receptorok degradációját, valamint a P2X1 downregulációját tapasztaltuk, melyek felelősek lehetnek a besugárzás onkogén hatásáért. Sejttenyészetben és szöveti preparátumban található melanoma malignum sejtek erős TASK-3 immunpozitivitást mutatnak, mely érinti a melanoma sejtek magját is, de legkifejezettebb a mitokondriumokban. A csatorna expressziójának gátlása RNS-interferenciával a melanoma sejtek számát, míg HEK293 sejteken a TASK-3 csatornákon átfolyó áramot szignifikánsan csökkentette. Triadin 95-öt overexpresszáló C2C12 sejtvonalon és egér primer sejtkultúrán az elemi kalciumfelszabadulási események amplitudója és frekvenciája lecsökkent a kontrollhoz képest. Patkány primer izomrostokon specifikus shRNS transzfekciót követően a spontán kialakuló kalcium hullámok és kalcium spark-ok szignifikánsan nagyobb amplitúdóval és frekvenciával jellemezhetők, mint kontroll izomrostokon. A nyugalmi kalciumkoncentrációt és a kálium indukálta depolarizációt szintén jelentősen befolyásolta a triadin expressziójának megváltoztatása. | Protein kinase C izoenzymes have different role in regulating the proliferation and differentiation of keratinocytes mainly due to the altered calcium homeostais and purinergic receptor expression. Changes of the membrane potential, ion current and intracellular calcium concentration caused by hyposmotic solutions are more pronounced in cells where the PKC system was activated. Proliferation of epidermal keratinocytes (HaCaT and NHEK) is significantly reduced following short time UVB irradiation. The oncogen properties of irradiation could be due to the decreased calcium concentration, ATP-induced calcium transient amplitude, degradation of the P2X3 and P2X7 receptors and the downregulation of P2X1 receptor. Cultured and tissue melanoma cells show strong TASK-3 immunopositivity in the cytoplasm, mainly in the mitochondria. Reducing the expression of the channel protein by RNA interference decreased the number of viable cells, and the total ion current on HEK293 cells overexpressing TASK-3. C2C12 and mouse primary cultured myotubes overexpressing triadin 95 generated elementary calcium release events with lower amplitude and frequency than control cells. However, the amplitude and frequency of calcium transients and sparks were significantly higher in rat primary muscle cells following triadin 95-specific shRNA transfection than in control myotubes. Changes of the triadin expression altered the intracellular calcium concentration and potassium induced depolarization