Thrombocyta aktiváció során bekövetkező változások biokémiai és sejtbiológiai jellemzés = Biochemical and cell biological changes during platelet activation
Ex vivo mintákon végzett analízisek közül elvégeztük 30 db stent beültett beteg esetében perifáriás vérminták analízisét az alábbi thrombocyta aktivációs markerekre: thrombocyta P-selectin, solubilis P-selectin, CD63 expresszió, heterotipikus aggregátumok aránya, mikropartikula mennyiség. Fenti eredményeket korreláltattuk a betegek előzetes kezelési protokolljával (csak ASA, vagy ASA+clopidogrel). A XIII-as faktorral (F XIII) kapcsolatos vizsgálatok során megállapítást nyert, hogy thrombocyták TRAP aktiválása, az FXIII expresszió fokozódásával jár. Azonban kimutattuk, hogy ez a plazmában lévő FXIII kötődése és nem az intracellluláris FXIII felszíni megjelenése miatt jön létre. Specifikus fibrinogének felhasználásával tisztáztuk az FXIII kötődés biokémiai jellemzőit. A thrombocyta foszfatáz inhibitorokkal végzett kísérletek során PRP-ben bizonyítottuk, hogy az 1 és 2A típusú foszfatázoknak csak együttes gátlása hozza létre a thrombocyta aktiválás során észlelhető hatást. TRAP aktivált mintákon bizonyítottuk, hogy mind az aggregáció, mind a P-selectin expresszió dózisfüggő módon gátlódik calyculin (CLA) hatására. Ugyanakkor nem aktivált mintákon azt találtuk, hogy a CLA dózisfüggő módon alakváltozást hoz létre a thrombocytákban, mely aggregometriával, valamint áramlási citometriai fényszórási és antigén expressziós vizsgálatokkal bizonyítható volt. | On ex vivo samples we examined 30 cases of stent implanted patients where in peripheral blood samples the following platelet activation markers were investigated: paletelt P-selectin, soluble P-selectin, CD63, heterotypic aggregates, microparticles. The above data were correlated with previous treatment protocol of the patients (ASA only or ASA and clopidogrel). Regarding studies with factor XIII we identified that in TRAP-activated platelets FXIII is elevated on the platelet surface. However, we proved, that FXIII is not derived from intracellular source but is attached from the plasma. By using specific fibrinogens we identified the biochemical requirements for FXIII binding to platelets. The manuscript was submitted to Thrombosis and Haemostasis where a minor revision was required. Regarding phosphatase inhibitors we found that phosphatase 1 and 2A types are both involved in platelet activation, since their simultaneous inhibition by calyculin is required to prevent TRAP-elicited P-selectin axpression and platelet aggregation. At the same time on non-activated platelet samples we found that calyculin dose-dependently inhibited platelet shape-change as measured by aggregometry and flow cytometry
