Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2017En mamíferos los ritmos circadianos están regulados por relojes moleculares alojados en el núcleo supraquiasmático del hipotálamo. Señales del medioambiente como la luz y la dieta, entrenan el reloj en ciclos de 24 hs que regulan ritmos en sistemas periféricos y cuya alteración se asocia a patologías. En el presente trabajo de tesis hemos caracterizado la influencia de los ritmos biológicos en el funcionamiento de la inmunidad en la mucosa intestinal a lo largo del día. Más específicamente, hemos descripto algunos mecanismos que gobiernan la localización temporal de distintas poblaciones leucocitarias en sitios inductivos de la respuesta inmune como ganglios linfáticos mesentéricos (GLM) y placas de Peyer (PP) y su impacto en fenómenos claves de la homeostasis como la tolerancia hacia antígenos provenientes de la dieta. Encontramos oscilaciones en poblaciones linfocitarias y en distintas subpoblaciones de células presentadoras de antígenos (CPA) a lo largo de un período de 24 hs que estuvieron relacionadas con cambios en los niveles de la quimiocina CCL21 producida en GLM así como con una expresión diferencial de moléculas como CD69 y CD62L. En simultáneo con las oscilaciones en las poblaciones, encontramos diferencias significativas en la producción de citoquinas anti- y pro-inflamatorias entre los períodos diurnos y nocturnos. Estudiamos también la capacidad de CPA obtenidas de vasos linfáticos aferentes a distintos tiempos de inducir células T regulatorias Foxp3+ y receptores homing sobre linfocitos CD4+, y encontramos diferencias significativas entre las fases de actividad/descanso de los animales. A nivel de sitios efectores encontramos cambios en las túnicas que componen las paredes intestinales a lo largo del día en condiciones estándares de luz/oscuridad que se vieron exacerbadas luego de la disrupción lumínica Estas condiciones también provocaron cambios en las poblaciones linfocitarias en GLM y PP. Tanto los cambios en las poblaciones como la capacidad de las CPAs de inducir Foxp3 o receptores homing se encontraron alterados en animales deficientes para el gen Per2, lo que muestra que se esta capacidad de las CPA depende de la integridad del reloj molecular. El hecho de que el ingreso a GLM de linfocitos y CPA esté sincronizado en un determinado tiempo del día sugiere que habría momentos en los que la probabilidad de que se induzca una respuesta inmune antígeno específica en la mucosa intestinal es mayor. Esta ventana temporal coincidiría con la masiva entrada de antígenos, durante el período de actividad e ingesta de los animales. Nuestros datos también demuestran que tiempos tempranos en el proceso de activación linfocitaria, sería crucial en la generación y tipo de las respuesta inmunes adaptativas en intestino. Evaluando la respuesta adaptativa específica para ovoalbúmina (OVA) en modelos de tolerancia observamos que la ingesta del antígeno durante la fase oscura tardía induce menores índices de proliferación que cuando la ingesta del antígeno ocurre durante la fase lumínica tardía. Más aún, en ensayos de inducción de poblaciones efectoras y regulatorias, la administración diaria de OVA al final de la fase oscura (ZT23) resultó en una inducción significativamente mayor del factor de transcripción Foxp3 en células OVA específicas (CD4+ OT-II+) y la localización selectiva de estas células en la lámina propia. Nuestros resultados muestran que en un período de 24 hs, en el GLM existe una ventana temporal determinada en la que confluyen sincronizadamente una serie de condiciones que promueven el desarrollo de respuestas tolerogénicas que son esenciales para la homeostasis intestinal.Fil: Barrios, Bibiana E. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.Fil: Correa, Silvia Graciela. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Correa, Silvia Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.Fil: Motran, Claudia Cristina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.Fil: Motran, Claudia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.Fil: Contin, María Ana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.Fil: Contin, María Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.Fil: Lorenzo, Alfredo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología; Argentina.Fil: Anzulovich Miranda, Ana Cecilia. Universidad Nacional de San Luis; Argentina.Fil: Anzulovich Miranda, Ana Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones Biológicas de San Luis; Argentina
