A partir do xenodiagnóstico aplicado em 30 pacientes chagásicos crónicos, com parasitem!*!detectável, avaliou-se a quantidade de epimastigolas e tripomasligotas, eliminados através das fezes e daurina dos triatomíneos.Nas fezes, a quantidade de epimastigotas foi, significalivamenle maior do que triponiasligoias,e na urina houve uma inversão: a quamidade de tripomastigotas foi significalivamenle maior do queepimasligotas, pelo teste /, ao nível de 1%.Os experimentos foram realizados numa câmara biológica ã temperatura de 28 ± 1*C.umidade relativa de 70 ± 5%, fotoperíodo de 12 horas

Isac, Eliana

Santos, Adelair Helena dos

Silva, Heloísa Helena Garcia da

Silva, lonizete Garcia da

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Rev.Pal.Trop.,23(l):101-106,jan./jun.l994ELIMINAÇÃO DE EPIMASTIGOTAS ETRIPOMASTIGOTAS ESTIMADA ATRAVÉS DA LEITURADO XENODIAGNÓSTICO, PELO MÉTODO DAS DEJEÇÕESESPONTÂNEASHeloísa Helena Garcia da Silva', Adelair Helena dos Santos", Eliana Isaclonizete Garcia da Silva'"RESUMOA partir do xenodiagnóstico aplicado em 30 pacientes chagásicos crónicos, com parasitem!*!detectável, avaliou-se a quantidade de epimastigolas e tripomasligotas, eliminados através das fezes e daurina dos triatomíneos.Nas fezes, a quantidade de epimastigotas foi, significalivamenle maior do que triponiasligoias,e na urina houve uma inversão: a quamidade de tripomastigotas foi significalivamenle maior do queepimasligotas, pelo teste /, ao nível de 1%.Os experimentos foram realizados numa câmara biológica ã temperatura de 28 ± 1*C.umidade relativa de 70 ± 5%, fotoperíodo de 12 horas.UNITERMOS: Xenodiagnóstico, Doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, formas evolutivas.INTRODUÇÃONa pesquisa básica em doença de Chagas, utiliza-se, de rotina, inoculo deTrypanosoma cruzi em animais de laboratório. A infectividade do tripanossoma é alta' Farmacêutica de Dept." de Parasitologia - 1PTSP/UFG" Aluna do Curso de Mestrado em Patologia Tropical - IPTSP/UFG"' Profs. do Dept.0 de Parasitologia - IPTSP/UFGApoio financeiro: SENESU/PRPPG-UFG, FUNAP-UFGRecebido para publicação em 05/04/94102SILVA,H.H.G.; SANTOS,A.H.; ISAC,E. & SILVA.I.G. Eliminação de epimasligotas e tripomastigolaseslimada alravés de leitura do xcnodiagnóstico, pelo método das dejeções esponlãneas. Rev.Pat.-Trop..23(l):101-106,jan./jun.l994.quando o inoculo é feito de sangue de um animal infectado em outro suscelível,porem quando se inocula fezes de triatomíneos em animais de laboratório, ainfectividade é baixa. Neste trabalho, estudou-se a quantidade de formas tripomasti-gotas e epimastigotas eliminadas nas fezes e na urina, com a finalidade de otimizara preparação e infectividade de inóculos, realizados com fezes de triatomíneosinfectados pelo T.cruzi, para animais de laboratório.MATERIAL E MÉTODOSO xenodiagnóstico foi aplicado em 30 pacientes cliagásicos, queapresentavam parasitemia detectável, de um total de 206 estudados, na fase crónicae não tratados, do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás, dos quaiseram conhecidos os exames clínico e sorológico (imunofluorescência indircta chemagiutinação indireta) com soros reatógenos.Em todos os pacientes, o xenodiagnóstico foi realizado com ninfas de 4.°e 5.° estádios de Triatoma tnfeslans criadas numa câmara biológica à temperatura de25 ± 1°C, umidade relativa de 70 ± 5% e fotoperíodo de 12 horas2. Imediatamenteapós a ecdise para o 4.° e 5.° estádios, as ninfas eram separadas em frascos depolietileno, transparentes, cilíndricos medindo 3 x 5 cm, com tampas perfuradas aocentro e a estas coladas uma tela fina de náilon, com cerca de 250 malhas por cm2,o fundo forrado com papel filtro e, perpendicular a este e à tampa, um pedaço decartolina como substrato para os triatomíneos se alimentarem. Nestes, permanecemcm jejum, por 25 e 30 dias, para 4° e 5° estádios, respectivamente. Após esteperíodo, aplicava-se o xenodiagnóstico e, em seguida, os trialomíneos eramacondicionados numa câmara (CDG-247 da FANEN) à temperatura de 28 ± 1°C,umidade relativa de 70 ± % e fotoperíodo de 12 horas.As leituras foram realizadas após 30 dias, pelo método das dejeçõesespontâneas3'5. Basicamente, esta técnica consiste em alimentar o triatomíneo até arepleção total6, que é condição fundamental para o inseto eliminar as dejeções. Paraisto, camundongos foram imobilizados em tela de náilon como mostra a Fíg.l, coma cabeça recurvada para o ventre, para que o animal não furasse a tela. Em volta docorpo do camundongo a tela foi grampeada de forma a não permitir nenhummovimento e, posteriormente, era afixado aos tubos com os triatomíneos'1. Após 3 a4 minutos os triatomíneos eliminam as fezes, e, de 10 a 40 minutos eliminam aurina. As primeiras gotas do material fecal são densas e escuras, exceto após aecdise, quando são amareladas e se cristalizam rapidamente. As gotas subsequentes,103SILVA,H.H.G.; SANTOS.A.H.; ISAC,E. & SILVA,1.G. Eliminação de epimastigoias e Iripomasligouiseslimada alravés de leitura do xenodiagnóslico, pelo método das dejeções esponlãneas. Rev.Pal.-Trop.,23(l):101-106,jan./jun.l994.vão clareando até tornarem-se hialinas, neste caso considerou-se como a urina. Como auxílio de micropipetador e com a tampa aberta apenas o necessário para introduzi-lo no frasco, colhia-se fezes ou urina, examinava-se entre lâmina e lamínula aomicroscópio de inversão com médio aumento (400x) e contava-se o número detripanossomas1.As formas epimastigotas e tripomastigotas foram diferenciadas pelamorfologia e pela mobilidade que se apresenta chicoteante, lenta e com movimentoirregular para epimastigotas e, serpenteante, rápida e direcional, para tripomastigotas.RESULTADOSOs resultados são apresentados na Tabela 1. A quantidade de formasepimastigotas foi significativamente maior do que as tripomastigolas, nas fezes e, naurina houve uma inversão, a quantidade de tripomastigotas foi significativamentemaior do que epimastigotas. Verificou-se, também, que não houve resultado negativopara epimastigotas nas fezes e nem tripomastigotas na urina em nenhum dospacientes estudados.DISCUSSÃOA partir deste trabalho e com o uso da técnica das dejeções espontâneas,tornar-se-á mais fácil a preparação de inóculos com a urina e, por conseguinte, maiorsucesso na infecção de camundongos7.A técnica das dejeções espontâneas permite realizar a leitura doxenodiagnóstico quantas vezes for conveniente, devido ao fato de se alimentar otriatomíneo para se obterem as dejeções sem causar-lhe nenhum tipo de traumatismo.É característica dessa técnica a utilização do material fecal sem diluí-lo em soluçãosalina, como é feito com o método da compressão abdominal e neste trabalho,evidenciou-se uma predominância de epimastigotas sobre as tripomastigotas;examinar separadamente fezes e urina e/ou um "poof" delas. O exame separado daurina ficou caracterizado pela predominância de tripomastigotas em material hialino,praticamente livre de contaminação de fungos e de bactérias, possibilitando assim,uma melhor infectividade de animais de laboratório e/ou clonagem de cepas. Alémdisso, essa técnica permite estudar a relação parasito-hospedeiro e a curvaparasitêmica do vetor infectado, durante todo o seu desenvolvimento ninfal e sualongevidade.104SiLVA,H.H.G.; SANTOS,A-H.; ISAC.E. & SILVA.I.G. Eliminação de epimasligolas e Irípomasligotasestimada airavés de leitura do xenodiagnóstico, pelo método das dejeções esponlâneas. Rev.Pal.-Trop.,23(l):l01-106,jan./jun.l994.Tabela 1 - Quantidade de formas epimastigotas e tripomastigolas eliminadas pelo 'fria toma infestans eestimada por lâmina, através da leiiura do xenodiagnóstico.PACIENTES0102(130405060708091011121314151617IS1920212223242526272 H2930MECHABRROPADRÃOFEZESEpi mastigo ta1071403210052501010304020510021512101220210672803004021503845013837,9±9,7URINATri pó m as U gola76100012051000905000200000148020039120309006107(XI(K)030000000213,5±4.6Epi mastigo ta722600000209250000002020010SI52001544121000012170003050000000034,3±16.3Trípomastigola162506115059035002040308201049610117250321016115311418355036026051915100,5±29.6105SILVA.H.H.G.; SANTOS.A.H.; ISAC.E- & SILVA.1.G. Eliminação de epimasligolas e Iripomasligolasestimada através de leitura do xenodiagnóstico, pelo método das dejeções espontâneas. Rcv.Pai.-Trop.,23(l):101-106,jan./jun.l994.A inoculação da urina ao invés de fezes, apresenta as seguintes vantagens:ter maior número de tripomastigotas, inoculo com pouca contaminação c maiorinfectivídade.SUMMARYEpimastigote and trípomastigote elimination by xenodiagnosisreading by spontaneous dejection methodThirty patients on the chronic phase of Chagas' disease were submited toxenodiagnosis, in order to evaluate the quantity of evolutive fonns (epimastigote andtrípomastigote).In faeces, the quantity of epimastigotes was significantly bigher than withtripomastigotes. In urine, the number of tripomastigotes was significantly higher thanwith epimastigote by spontaneous dejection method (t test, p< 0,01).The experiments were performed at 28 ± 1°C, 70 ± 5% of relativohumidity and fhotoperiod of 12 h.KEYWORDS: Xenodiagnosis, Chagas' disease, Trypanosoma crnzi, evolulive forms.REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS01. BRENER,Z. Contribuição ao estudo da terapêutica experimental da doença deChagas. Tese de Livre Docência, Faculdade de Odontologia e Farmácia deMinas Gerais, Belo Horizonte, 1961.02. SILVA,I.G. Influência da temperatura na biologia de triatomíneos.I.TVm/rwmmbrovaria (Blanchard,1843) (Hemiptera, Reduviidae). Rev.Goiana Med.,31:1-37, 1985.03. SILVA,I.G. Nova técnica para a leitura do xenodiagnóstico.Rev.Goiana Med.,36:35-39, 1990.04. SILVA.I.G, & FERREIRA,!.R. Influência da fonte sanguínea na multiplicaçãoda cepa Y de Trypanosoma cruzi em Triatoma infestans (Klug,1834) cRhodnius neglectus Lent,1954. Rev. Goiana Med., 36:41-48, 1990.106SILVA.H.H.G.; SANTOS.A.H.; ISAC.E. & SILVAJ.G. Eliminação de epimastigotas e Irípomastigoiasestimada alravés de leitura do xenodiagnóstico, pelo método das dejeções espontâneas. Rev.Pal.-Trop.,23(l);10M06,jan./jun.l994.05. SILVA.I.G.; OSTERMAYER,A.L. & SILVA,H.H.G. Importância do método deobtenção das dejeções dos triatomíneos na avaliação da suscetibilidadetriatomínica ao Trypanosoma crwz/.Rev,Soc.Bras. Med.Trop., 26: 19-24,1993.06. SILVAJ.G & SILVA.H.H.G. Estudo comparado do desenvolvimento deIriatomíneos a duas temperaturas. Mem.Inst.Oswaldo Cruz,84:499-500,1989.07. SILVAJ.G & SILVA,H.H.G. Suscetibilidade de 11 espécimes de 7 triatomíneos(Hemiptera, Reduviidae) à cepa Y de Trypanosoma cruzi (Kinetoplastida,Tripanossomatidae).Rev.Iiras.Ent., 37:459-463, 1993.

ELIMINAÇÃO DE EPIMASTIGOTAS E TRIPOMASTIGOTAS ESTIMADA ATRAVÉS DA LEITURA DO XENODIAGNÓSTICO, PELO MÉTODO DAS DEJEÇÕES ESPONTÂNEAS

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