Shiga toxins (Stxs) are the main agent responsible for the development of hemolytic uremic syndrome (HUS), the most severe and life-threatening systemic complication of infection with enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) strains. We previously reported Stx2 expression by eukaryotic cells after they were transfected in vitro with the stx2 gene cloned into a prokaryotic plasmid (pStx2). The aim of this study was to evaluate whether mammalian cells were also able to express Stx2 in vivo after pStx2 injection. Mice were inoculated by hydrodynamic based transfection (HBT) with pStx2. We studied the survival, the percentage of polymorphonuclear leukocytes in plasma, plasma urea levels and histology of the kidney and the brain of mice. Mice displayed a lethal dose-response to pStx2. Stx2-mRNA was recovered from the liver and Stx2 cytotoxic activity was observed in plasma of mice injected with pStx2. Stx2 was detected by immunofluorescence in the brains of mice inoculated with pStx2, and markers of central nervous system (CNS) damage were observed, including increased expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) and fragmentation of NeuN in neurons. Moreover, anti-Stx2B immunized mice were protected against pStx2 inoculation. Our results show that Stx2 is expressed in vivo from the wild stx2 gene, reproducing pathogenic damage induced by purified Stx2 or secondary to EHEC-infection.Fil: Bentancor, Leticia Veronica. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Mejias, Maria Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pinto, Alípio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas; ArgentinaFil: Bilen, Marcos Fabian. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; ArgentinaFil: Meiss, Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rodriguez Galan, Maria Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico - CONICET - Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Baez, Natalia Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico - CONICET - Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Pedrotti, Luciano Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico - CONICET - Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Goldstein Raij, Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Ciencias Fisiológicas. Laboratorio de Fisiopatogenia; ArgentinaFil: Ghiringhelli, Pablo Daniel. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celular; ArgentinaFil: Palermo, Marina Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin
