抑制微RNA-30d-5p促进线粒体自噬缓解高糖作用下的足细胞损伤

Abstract

目的探讨微RNA（miR）-30d-5p在高糖诱导下足细胞损伤中的作用。方法采用30 mmol/L葡萄糖诱导足细胞高糖化，使用miR-30d-5p抑制剂和模拟物转染，再经1 mg/mL 3-甲基腺嘌呤（3-MA）处理。定量逆转录聚合酶链反应检测miR-30d-5p的转染效率；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测肾病蛋白、微管相关蛋白轻链（LC）3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62、自噬相关基因（ATG）5蛋白、PTEN诱导假定激酶（PINK）1和Parkin基因（PARK2）蛋白表达。JC-1作为荧光探针检测线粒体膜电位，通过相关试剂盒检测细胞中的三磷酸腺苷（ATP）含量。结果在高糖诱导下，足细胞凋亡增加，miR-30d-5p和P62表达上调，肾病蛋白、ATG5、PINK1、PARK2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平降低（均P&lt;0.01）。miR-30d-5p抑制剂部分逆转了高糖对足细胞凋亡以及ATG5、PINK1、PARK2、肾病蛋白、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62表达的影响（均P&lt;0.01）。高糖诱导足细胞线粒体膜电位流失、ATP含量减少，抑制miR-30d-5p后能增加膜电位和ATP含量（均P&lt;0.05）。自噬抑制剂3-MA和miR-30d-5p模拟物可逆转miR-30d-5p抑制对高糖诱导的足细胞凋亡、自噬和线粒体功能的影响（均P&lt;0.05）。结论抑制miR-30d-5p可能通过促进ATG5、PINK1、PARK2的表达促进线粒体自噬，进而缓解高糖诱导的足细胞损伤。</sec