Avaliação da idade e do sexo de peixe-boi-marinho, Trichechus manatus manatus (Linnaeus, 1758) sobre a descrição morfológica e cultivo in vitro da derme

Abstract

O peixe-boi-marinho é um herbívoro aquático que pertence a ordem dos sirênios, e que se encontra vulnerável à extinção. Em virtude disso, estratégias de conservação por meio da utilização da derme têm sido observadas, uma vez que, essa fonte valiosa possibilita sua aplicação em biotecnologias mais complexas. Contudo, ainda é necessário o conhecimento acerca dos padrões morfológicos e celulares desta região, especialmente no que se refere aos fatores que podem influenciar suas características, como a idade e sexo do animal. Considerando essa abordagem, o objetivo foi avaliar a influência da idade e sexo sobre os padrões morfológicos e cultivo in vitro da derme de T. m. manatus. Para tanto, fragmentos de derme abdominal de seis indivíduos (três machos vs. três fêmeas; dois até 3 anos e 5 meses vs. dois entre 3 anos e 6 meses até 16 anos vs. dois até 23 anos e 6 meses) foram obtidos, e transportados ao laboratório. No laboratório, a derme foi fragmentada (6,0 mm3), e as amostras foram distribuídas para descrições histológicas e cultivo in vitro. Para a descrição histológica, fragmentos corados com hematoxilina-eosina, tricrômico de Gomori e nitrato de prata foram usados para avaliações morfológicas, morfométricas e potencial proliferativo das células, respectivamente. Já para o cultivo in vitro, células recuperadas foram avaliadas quanto à morfologia, viabilidade por azul de tripan, atividade proliferativa pela determinação do tempo de duplicação da população, metabolismo pelo ensaio de 3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-di-fenil brometo de tetrazolina, níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs), potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) e níveis apoptóticos por marcadores fluorescentes. Todos os dados foram expressos como média ± erro padrão, usando o software Graphpad (P < 0,05). Dentre os principais resultados, <3,5 anos e de 3,6-16 anos (72 ± 8) apresentaram uma maior quantidade de células somáticas (80 ± 9) quando comparado aos de 23,6 anos (39 ± 7). Indivíduos de 3,6-16 anos demonstraram menor quantidade de colágeno (82% ± 2), maior ΔΨm (1,1 ± 0,7) e EROs (1,3 ± 0,8), em relação as outras idades. Para os sexos, o quantitativo de células somáticas em fêmeas (49 ± 10) foi menor que em machos (78 ± 8). Animais do sexo masculino demonstraram maior quantidade de unidades arbitrárias de ΔΨm (1,0 ± 0,5), em comparação com as fêmeas (0,8 ± 0,3). As demais avaliações não demonstraram diferenças entre idades e sexos. Apesar de as idades e os sexos influenciarem no quantitativo de células somáticas e no potencial da membrana mitocondrial, ambos são vantajosos para aplicação científica, colaborando com a conservação de T. m. manatus.The Antillean manatee is an aquatic herbivore belonging to the Sirenian order, which is vulnerable to extinction. As a result, conservation strategies through the use of the dermis of their skin have been commonly observed, since this valuable source enables the development of reproductive biotechnologies. However, for this realization, knowledge about the morphological and cellular patterns of this region is necessary, especially with regard to the factors that can influence its characteristics, such as the age and sex of the animal. Considering this approach, the aim of this work was to evaluate the influence of age and sex on the morphological patterns and in vitro culture of the dermis. For this purpose, the abdominal dermis of six individuals (three males vs. three females; two to 3 years and 6 months vs. two between 3 years and 6 months up to 16 years vs. two up to 23 years and 6 months) were obtained and transported to the laboratory. In the laboratory, the dermis was fragmented (6.0 mm3), and the samples were distributed for description and histological evaluations and in vitro culture. Thus, for the histological description, fragments stained with hematoxylin-eosin, Gomori's trichrome and silver nitrate were used for morphological, morphometric and proliferative potential evaluations of the cells. As for in vitro culture, recovered cells were evaluated for morphology, viability by trypan blue, proliferative activity by determination of population doubling time, metabolism by 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2 assay, Tetrazoline 5-diphenyl bromide, reactive oxygen species (ROS) levels, mitochondrial membrane potential (ΔΨm) and apoptotic levels by fluorescent markers. Finally, all data were expressed as mean ± standard error, using the Graphpad Instant software, and considering P < 0.05. Among the main results, antillean manatees with <3,5 years had a higher number of somatic cells (80 ± 9) when compared to 3,6-16 years (72 ± 8) and 23,6 years (39 ± 7). 3,6-16 years T. m. manatus showed a lower amount of collagen (82% ± 2), a higher amount of ΔΨm (1.1 ± 0.7) and ROS (1.3 ± 0.8), compared to other ages. Regarding genders, the number of female somatic cells (49 ± 10) was smaller than males (78 ± 8). Male animals showed a higher number of arbitrary units of ΔΨm (1.0 ± 0.5) compared to females (0.8 ± 0.3). The other evaluations did not demonstrate differences between ages and sexes. Although ages and sexes influence the number of somatic cells and mitochondrial membrane potential, both are advantageous for scientific application, contributing to the conservation of T. m. manatus.71 f