RESUMO: A cana-de-açúcar é uma das principais culturas do Brasil, que é o maior produtor mundial de açúcar e álcool. A cultura da cana-de-açucar é extremamente vulnerável a doenças devido ao sistema de propagação por toletes facilitar a disseminação dos patógenos, uma vez que os colmos mesmo infectados podem não apresentar sintomas. A propagação dessas doenças em monoculturas em grandes áreas facilita as epidemias, sendo importante para o plantio de mudas sadias, métodos para a detecção precoce de doenças. Dentre as doenças mais importantes em cana-de-açúcar, são conhecidas as causadas por bactérias como a Leifsonia xyli subsp.xyli, agente causal do Raquitismo-da-soqueira ou ?ratoon stunting disease? (RSD) e a Xanthomonas albilineans, responsável pela Escaldadura das folhas ou ?sugarcarne leaf scald? (Ashby); por fungo como o do carvão (Ustilago scitaminea) que é uma doença considerada em todos os programas de melhoramento genético, com longo período de latência. Foram utilizadas como amostras folhas de plântulas de cana-açúcar desenvolvidas de cultura de tecido com cerca de 2 meses de transplante. Foram utilizados iniciadores de literatura para raquitismo e escaldadura ou desenvolvido pelo laboratório para carvão. Os fragmentos amplificados de cada doença foram clonados e a identidade confirmada por BLAST. O DNA dos controles positivos das reações foi obtido de clones dos fragmentos amplificados de plantas infectadas. Os iniciadores desenvolvidos para carvão mostraram especificidade em amostras de folhas de plântulas de cana-de-açúcar. A detecção de infecção confirma a eficácia da metodologia em plântulas com 2 meses de transplante, assim como o uso de clones como controle positivo, a maior facilidade para diagnostico de infecção em plântulas de cana-de-açúcar