La muerte inmunogénica es una modalidad de muerte celular que estimula al sistema inmune para establecer una respuesta específica contra las células de cáncer. El IMMUNEPOTENT CRP (ICRP) es una mezcla de substancias de bajo peso molecular obtenidas de bazo de bovino, se ha reportado que in vitro tiene actividad citotóxica en diferentes líneas celulares de cáncer e in vivo modula la respuesta inmunológica. El objetivo de este estudio fue determinar si el efecto citotóxico del ICRP y su combinación con oxaliplatino (OXP) en la línea celular B16F10 de melanoma murino es mediante muerte inmunogénica. El ensayo de citotoxicidad con la tinción de ioduro de propidio - anexina V, y la determinación de la exposición de calreticulina fueron realizados por citometría de flujo. La determinación de la liberación de ATP fue realizado por ensayo de bioluminiscencia, HSP70 y HSP90 por Western blot y la liberación de HMGB1 determinada por Western blot y por ELISA. Nuestros estudios in vitro demuestran que los tratamientos con ICRP u OXP causaron muerte celular de una manera dependiente de tiempo, pero el tratamiento con la combinación de ICRP + OXP incrementó el efecto citotóxico desde las 24 horas. La exposición de calreticulina y la liberación de ATP, HSP70, HSP90 y HMGB1 fueron inducidos por los tratamientos con ICRP y la combinación de ICRP + OXP, este último, incrementó significativamente la exposición y liberación de estos DAMPs; el tratamiento con OXP indujo la exposición de calreticulina y liberación de ATP y HMGB1. En los experimentos in vivo se observó que la administración subcutánea del lisado tumoral rico en DAMPs (tratado con ICRP y con la combinación de ICRP + OXP) previno la aparición del melanoma cuando fueron retados con células tumorales viables, contrario a lo observado con la administración del lisado tumoral tratado con OXP. Nuestros resultados sugieren que el IMMUNEPOTENT CRP puede ser usado como un agente capaz de incrementar la capacidad antitumoral de fármacos e inducir muerte inmunogénica previniendo el desarrollo de melanoma
