DINATO, N. B.

FAVERO, A. P.

LEONARDECZ NETO, E.

PAULA, A. F. de

SANTOS, I. R. I.

Portuguese

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67ª Reunião Anual da SBPC  C.8.1 – Genética  Viabilidade de grãos de pólen de Paspalum notatum armazenados em nitrogênio líquido  Naiana B. Dinato1, Izulmé R. I. Santos2, Eduardo Leonardecz Neto3, Ailton F. de Paula1, Alessandra P. Fávero4   1. Estudante de Pós - graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - UFSCar; *nanadinato@hotmail.com 2. Pesquisadora da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia – Brasília/DF 3. Professor Doutor do departamento de Genética e Evolução da UFSCAR – São Carlos/SP 4. Pesquisadora da Embrapa Pecuária Sudeste – São Carlos/SP  Palavras Chave: Paspalum, desidratação, grãos de pólen, nitrogênio líquido  Introdução O gênero Paspalum tem um grande potencial para ser utilizado em programas de melhoramento para produção de forrageiras. Contudo, muitas espécies apresentam dessincronia de florescimento, inviabilizando assim a utilização das mesmas em cruzamentos intra e interespecíficos. Para evitar essa situação, é indicada a criopreservação de grãos de pólen, visando a manutenção  da viabilidade dos gametas masculinos por diferentes períodos. A viabilidade do pólen pode ser influenciado por fatores fisiológicos, genéticos, físicos e pelas condições de armazenamento, como temperatura e umidade. A longevidade do grão de pólen está relacionada também com o teor de água, pois este influencia na conservação e armazenamento do mesmo. Dado que quando a temperatura é sub-zero, a célula atinge um super-resfriamento, formando cristais de gelo no meio intracelular e extracelular que causam danos às células (2). Portanto, é necessário reduzir o teor de água para contribuir também na redução da atividade metabólica e ação microbiana (3). Vários métodos são utilizados para a redução do teor de água dos grãos de pólen, como o uso de sais saturados (LiCl, MgCl2, NaOH, Mg(NO3)2, NH4NO3 e KCl), sílica gel e dissecação à vácuo. Segundo Connor e Towill (1993), os grãos de pólen podem sobreviver aos procedimentos de secagem e respondem com sucesso ao armazenamento em temperaturas de - 80ºC e a - 196ºC, se a umidade for mantida dentro de certos limites. Esse trabalho tem como objetivo avaliar a viabilidade de grãos de pólen de Paspalum notatum desidratados com sais saturados e sílica gel e armazenados em nitrogênio líquido (- 196ºC).  Resultados e Discussão O estudo foi realizado na Embrapa Pecuária Sudeste, localizada na cidade de São Carlos, SP, com um acesso de Paspalum notatum. Foram colhidas inflorescências da espécie citada, e colocadas em casa de vegetação. As inflorescências foram cobertas com saquinhos e no dia seguinte à coleta, agitou-se as flores levemente pela manhã, após a deiscência das anteras para a liberação de grãos de pólen, que foram colocados em placa de petri e levados para a desidratação utilizando os sais saturados: LiCl (75%), MgCl2 (75%), NaOH (75%) e sílica gel (15 g).  Colocaram-se os grãos de pólen em caixas gerbox com os sais saturados e manteve-se as caixas fechadas por diferentes intervalos de tempo (30, 60 e 120 minutos) à temperatura de 25ºC. Após esse período, as amostras de grãos de pólen foram armazenadas em cápsulas de gelatina dentro de criotubos. Estes foram imersos em nitrogênio líquido por 24 h. Após a retirada dos tubos do criotanque, os grãos de pólen foram analisados quanto a sua viabilidade, por meio do uso do teste de tetrazólio 0,25%. Para cada tratamento houve seis repetições. A testemunha foi considerada como a amostra de grãos de pólen recém colhida, sem criopreservação. As soluções salinas saturadas produzem umidade relativa do ar própria de cada sal em uma determinada temperatura. Observou-se que os melhores tratamentos de desidratação de grãos de pólen foram com LiCl por 30 minutos e a sílica gel por 120 minutos, que apresentaram viabilidade estatisticamente iguais à testemunha.  A escolha de qual tratamento utilizar depende da disponibilidade de sais e do tempo disponível para realizar o trabalho, além do custo da pesquisa, uma vez que a sílica gel tem menor custo que o cloreto de lítio. A viabilidade do grão de pólen sob condição natural, foi entre 65% a 70%. O armazenamento do pólen em nitrogênio líquido nessas condições, ou seja, sem desidratação, não foi satisfatório, pois após a retirada as amostras, obteve-se apenas 37% de grãos de pólen viáveis.  Tabela 1. Viabilidade de grãos de pólen de Paspalum notatum após cada tratamento com agentes de desidratação.  Tempo/Trat MgCl2 NaOH Sílica gel LiCl 30 60,25 b 46,08 c 42,50 c 68,91 a 60 55,58 b 50,33 c 55,41 b 60,67 b 120 T 45,17 c 68,50 a 57,25 b 65,25 a 67,42 a 65,25 a 49,33 c 66,58 a T – valores da testemunha  Conclusão O estudo aponta que a desidratação dos grãos de pólen com cloreto de lítio e sílica gel resultaram em um adequado armazenamento a longo prazo, pois a viabilidade permaneceu a mesma que a de grãos de pólen recém-colhidos. Agradecimentos  ___________________ REFERÊNCIAS 1 - CONNOR, F. K.; TOWILL, L. E. Pollen-handling protocol and hydration/dehydration characteristics of pollen for application to long-term storage. Euphytica, Wageningen, v. 68; p. 77-84, 1993. 2 - SANTOS, I. R. I. Criopreservação: Potencial e perspectivas para a conversação de germoplasma vegetal. Revista Brasileira Fisiologia Vegetal, v. 12, (Esp.), p. 70-84, 2000. 3 - STANLEY, R. G.; LINSKENS, H. E.  Pollen: Biology, Biochemistry, Management. New York: Springer-Verlag, 1974. 

Viabilidade de grãos de pólen de Paspalum notatum armazenados em nitrogênio líquido.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/1029009/1/alessandra.pdf

Viabilidade de grãos de pólen de Paspalum notatum armazenados em nitrogênio líquido.

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