KIKUCHI, T. Y. P.

MOTA, M. G. da C.

NUNES, H. da C. B.

RIBEIRO, S. I.

VIEIRA, I. M. S.

RCAAP - Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal

Produção de plântulas in vitro a partir de diferentes explantes de sementes de camu-camu (Myrciaria dubia (H.B.K.) Mc vaugh).

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PRODUÇÃO DE PLÂNTULAS in vitro A PARTIR DE DIFERENTES EXPLANTES DE SEMENTES~. <_ ~AMU-CAMU(Myrciaria dubia (H.B.K)Mc vaugh)KIKUCHI, Tatiani Yuriko Pinheiro. I; NUNES, Henriqueta da Conceição Brito.'; MOTA, Milton Guilherme da Costa.';RIBEIRO, Sidney Itauran.'; VIEIRA, lrenice Maria Santos.'INTRODUÇÃOO camu-camu (Myrciaria duhia) é uma espécie frutífera com potencial econômico por apresentar um alto teor de ÁcidoAscórbico (vitamina C). O interesse pelo seu cultivo tem aumentado nos últimos anos devido a divulgação de técnicas de plantio,identificação de pragas e enfermidades, e as possibilidades de industrialização (Vilachica, 1996). Normalmente a propagação docamu-camu é feita por sementes, o que segundo Falcão e/ ai. (1989) tem levado a uma desuniformidade na produção dos frutos.Buscando solucionar este problema, bem como desenvolver outros métodos de propagação e produção de mudas para o camu-camu, iniciou-se em junho/2000 no Laboratório de Recursos Genéticos e Biotecnologia Vegetal da FCAP, trabalhos para amicropropagação "in vitro" de camu-camu.As técnicas de biotecnologia têm apresentado novas alternativas para o melhoramento genético vegetal. principalmentepara aquelas espécies cujo melhoramento convencional, por si só, não tem avançado. Esta técnica permite a multiplicação rápidade genótipos superiores, resgate de embriões de híbridos raros, conservação de germoplasma in vitro, produção de plantastransgênicas, dentre outras, porém o processo de regeneração de plantas in vitro é a maior limitação para sua aplicação (Emons et aI.1993). A micropropagação tem sido a principal aplicação prática das técnicas de cultura de tecidos de plantas. O uso temviabilizado a propagação clonal em massa de plantas de bananeira (Cronauer & Krikorian, 1984) e de várias outras espéciesfrutíferas e ornamentais. Entretanto, um dos aspectos fundamentais para desenvolvimento de protocolos visando amicropropagação é a utilização de explantes assépticos.Souza, et ai (1997) avaliando fontes de explantes assépticos para o desenvolvimento de técnicas de propagação in vitro deQuina (Quassia amara L.) observou que as sementes com tegumento tratadas com álcool puro por quinze minutos, em seguida comhipoclorito de sódio (NaOC1) a 3% por 20 minutos. posteriormente sem tegumento tratados em álcool a 70% durante 5 segundos,em seguida em NaOCl a 2% por 2 minutos e cultivadas em meio MS com a metade das concentrações dos sais mineraissuplementado com 4,33M de Ácido Giberélico (AG,) e ausência deste obteve-se 100% de germinação e nenhuma contaminação.Sabá, et aI (1997) desenvolvendo a partir de germinação in vitro plantas assépticas de urucuzeiro (Bixa orellana L.) conseguiramuma eficiência de 95,46 e 86,37% para 24 e 72 horas de imersão, respectivamente com desinfecção com álcool 70% por 30segundos a 1% (NaOC1) por 15 minutos sob agitação, lavagem três vezes com água estéril e imersas em meio líquido MS comadição de sulfato de Streptomicina (100. Mg. L·I) e Benlate (200 mg. L·I) a40 rpm por24 e 72 horas.Este trabalho teve por objetivo avaliar os melhores tratamentos de assepsia para a produção de plantas assépticas a partirde sementes de camu-camu cultivadas in vitro com vista à estabelecer protocolos para iniciar a micropropagação da espécie.MATERIAL E MÉTODOSA coleta dos frutos foi feita no Banco Ativo de Germoplasma (BAG) da Embrapa Amazônia Oriental. os quais foramlevados para o Laboratório de Biotecnologia e Recursos Genéticos da FCAP, onde foram lavados, despolpados e feita a retirada doendocarpo da semente em água corrente. Em seguida as sementes receberam os seguintes tratamentos de assepsia (Tabela 1).Após a imersão das sementes em NaOCI, todos os tratamentos receberam sob câmara de fluxo laminar de três a cincolavagens com água autoclavada. Posteriormente as sementes foram inoculadas em meio MS (Murashige & Skoog, 1962), com ametade das concentrações dos sais minerais, contendo I% de Sacarose, 0,2 % de Phytagel e o pH do meio foi ajustado para 5,8.Após a inoculação os tubos foram transferidos para sala de crescimento com foto período de 16h / luz / dia e temperatura de 25° ±2°C.O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 10 tubos de ensaio/tratamento. total izando 80 tubos, e cadatubo representou uma repetição., Bolsista de Iniciação Científica PIBIC/CNPq/FCAP- Acadêmica do 7° Semestre do curso de Engenharia Agronômical Engenheira Agrônorna - Aluna de Mestrado em Agronomia/Biologia Vegetal Tropical da FCAP., Orientador - Prof". Dr. DBVF /FeAP• Pesquisador M. Se. da Ernbrapa Amazônia Oriental CP. 48- CEP 66095-100, Prof. Dr. Departamento de Química e Tecnologia-DQT/FC AP.313Depois de estabelecido o melhor tratamento de assepsia para sementes de carnu-camu foi feito um outro experimento paragerminação de plantas in vitro de diferentes explantes a partir de sementes de camu-camu. Os frutos foram coletados no BancoAtivo de Germoplasma da Embrapa Amazônia Oriental, em seguida levados para o Laboratório de Biotecnologia e RecursosGenéticos da FCA P onde foram despolpados e lavados e feita a retirada do endocarpo da semente em água corrente, irnersas emdetergente durante 15 minutos e em seguida lavados com água destilada. Sob câmara de fluxo Laminar as sementes foram imersasem uma solução de NaOCI a I% durante trinta minutos. Posteriormente, foram inoculados em meio MS, com cinco concentraçõesde Ácido Giberélico (AG,): 0,0; O, I; 0,5; 1,0; 2,0 M ou mgl,", sendo os explantes utilizados: Sementes inteiras; Sementes inteirascom corte no lado oposto ao embrião; Embrião + 50% de endosperma; Embrião + 25% de endosperma e Embrião isolado. Odelineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 5 X 5 com 25 tratamentos (Tabela 2) com 10repetições cada, totalizando 250 tubos de ensaio.Tabela I: Tratamentos de assepsia em camu-camu (Myrciaria dubia)A,: Sem tratamento de assepsia (Testemunha);A1: Termoterapia a 40°C/ 30' e Detergente Líquido/ 15' e NaOCI a 2%/30';A): Detergente Líquido I 15' e NaOCI2% 130';A,: Detergentel 15' e NaOCI I% I 30';A~:Álcool Puro I I' e NaOCI2% I 15';A.: Álcool Puro I l'eNaOCII%1 15';A,: Álcool Puro I 10' e NaOCI2% I 10';A,: Álcool Purol Ia' e NaOCII%1 10'.Tabela 2: Diferentes tratamentos para produção in vitro de plântulas assépticas de carnu-camu em delineamento inteiramentecasualizado em esquema fatorial5x5.AG,MoumgL' 0,0 0,1 0,5 1,0 2,0*C, T, T" Til T", T"C, T, T7 TIO T" LC, T, T. T" T" T,)C, T, T" T" T,,) Te<C; T; T", T" T", T,;* C,: Sementes inteiras; C,: sementes inteiras com corte na parte oposta ao embrião; C,: Embrião + 50% de endosperma; C,:Embrião + 25% de endosperma; C;: Embrião isolado.RESULTADOS E DISCUSSÃO-Assepsia em sementes de carnu-carnu (Myrciaria dubia): após 30 dias de cultivo in vitro foi observado que as sementessem tratamento de assepsia (A,) apresentaram 90% de contaminação por fungos. Enquanto que nos tratamentos (A" A" A, e A,)utilizando NaOCI a 2% em diferentes tempos de imersão, observou-se que houve uma queima (oxidação) do tecido vegetalculminando em morte do embrião. As sementes imersas em álcool puro por 10'(A, e A.) oxidaram em 70% dos tubos. Notratamento A, as sementes iniciaram o processo de germinação.Após 60 dias de cultivo "in vitro" no tratamento A, ocorreu a formação de seis plântulas e quatro sementes apresentavam oembrião enturnescido. Enquanto que nos demais tratamentos não houve respostas.-Gerrninação de sementes de camu-carnu in vifro: Os resultados para o experimento são ainda parciais. Até o presenteverificou-se que a partir do 13°dia de cultivo in vitro nos embriões das sementes de alguns tratamentos houve indução de radícula, eapós 30 dias de cultivo emissão do caulículo. A germinação das sementes de camu-camu pelo processo convencional ocorre aos 36dias (KIKUCHI et ai, 1998).Os tratamentos T" To, T14, T,,)e T" após 80 dias de cultivo os embriões apresentavam-se entumescidos e ressecados ouoxidados. O AG; é utilizado para quebrar a dormência das sementes e para acelerar o processo germinativo (FERRI, 1979 ),entretanto nesse experimento observou-se que o AG, influenciou a produção de plantas somente na concentração de 2,0 rngl.".314CONCLUSÃOo tratamento mais eficiente para assepsia de sementes de camu-camu é a imersão em detergente líquido por quinzeminutos, seguida da imersão em NaOCl a 1%portrinta minutos.A produção de plântulas de camu-camu in vitro é influenciada na presença do meio MS implementado com 2 mgl." deAG, a partir de explantes de sementes inteiras e sementes inteiras com corte no lado oposto do embrião.BIBLIOGRAFIACRONAUER, S.S.; KRIKORIAN, A.D. Rapid multiplication ofmusa ofbananas and plantains by in vitro shoot tip culture.Hort Science, Alexandria, v. 19, p. 324-325, 1984.EMONS, A. M. C.; SAMElLO-DOPPERS, A.; VAN DER TOOR, C. The intluence ofsucrose. mannitol, l-proline, abscisicacid and gibberellic acid on the maturation of somatic embryos of zea rnays L. from suspension cultures. Journal PlantPhysiology, v. 141, p. 597-604, 1993.FALCÃO, M.A.; FERREIRA, S.A.N.; FLORES, W.B.C.; ClEMENT, C.R. Aspectos fenológicos e ecológicos do camu-carnutMyrciaria dubia (H.B.K) Mc. Vaugh) na terra firme da Amazônia central. Anais do Congresso Brasileiro de Fruticultura,10, Fortaleza, sbf. 1989. p.59-64.FERRI, M.G. Fisiologia Vegetal 2 . SP: EPU, 1979.1985.KIKUCHI, T. Y. P.; ARAÚJO, 1. M. F. de; SILVA, S. P. G. da; MOTA, M. G. da C; VIEIRA. I. M. S. Velocidade e Percentagem degerminação de sementes de carnu-camu (Myrciaria dubia (H.B.K) Me. Vaugh.) em diferentes populações. In: VIII Semináriode Iniciação Científica da FCAP. Resumos. Belérn, p. 166. 1998.MURASHIGE,T.; SKOOG,F. A revised médium for rapid growth and biossays with tobacco tissue cultures PhysiologyPlantarum, V15, p.473-497. 1962.SABÁ, R. T; OLIVEIRA, R. de S. et a/. Germinação in vitro de sementes de Urucu. 11Reunião dos Botânicos da Amazônia.Sociedade Botânica do Brasil Sellicional da Amazônia 07 a 12de dezembro de 1997- hotel solar, Salinopólis- PA. Resumos-MPEG.SOUZA, M. c., lAMEIRA, O. A. GOMES, A. P do R.; BEM-BOM, L.S.P.; et ar Germinação in vitro de sementes de Quina. liReunião dos Botânicos da Amazônia. Sociedade Botânica do Brasil Sellicional da Amazônia 07 a 12 de dezembro de 1997-hotel solar, Salinopólis- PA. Resumos-MPEG.VllACHICA, H. Frutales y Hortalizas prornissorios de IaAmazonia. Tca. lima. 1996315

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