O objetivo deste trabalho foi verificar as respostas hematológicas do transporte em matrinxãs exercitados à velocidade moderada pelo período de 60 dias

HACKBARTH, A.

INOUE, L. A. K. A.

MORAES, G.

ROJAS, G.

SIMÕES, G. S.

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RESPOSTAS HEMATOLÓGICAS E PLASMÁTICAS DE MATRINXÃS Brycon amazonicus EXERCITADOS E SUBMETIDOS AO TRANSPORTE  Gustavo Rojas*, Araceli Hackbarth, Luís Antônio Kioshi Aoki Inoue,  Guilherme Silveira Simões e Gilberto Moraes  Universidade Federal de São Carlos - Departamento de Genética e Evolução, CEP 13565-905 São Carlos, SP.  Fone: (16) 3351-8376. E-mail: matamba2@yahoo.com.br  Resumo  O objetivo deste trabalho foi o de verificar as respostas metabólicas do transporte em matrinxãs exercitados à velocidade moderada pelo período de 60 dias. Foram utilizados 108 alevinos de matrinxãs Brycon amazonicus, divididos aleatoriamente em seis tanques circulares com 12 peixes cada. Três caixas realizaram o exercício à velocidade de 1 cc/seg, por 60 dias, e três caixas não realizaram qualquer tipo de atividade. Após 60 dias, os animais foram submetidos a 4 horas de transporte, sendo que um grupo exercitado e um sedentário foram sacrificados antes do início do experimento (C0h e E0h) e, os demais grupos foram sacrificados nas seguintes horas: C4h e E4h, C6h e E6h, C24h e E24h, C48h e E48h, C120h e E120h. Foram analisados os seguintes parâmetros bioquímicos: hematócrito, hemoglobina, contagem de eritrócitos, sódio, potássio, cloreto, proteína, amônia, lactato e glicose. Observaram-se todas as respostas clássicas de estresse, tanto para peixes exercitados como para sedentários: alteração dos íons, aumento do hematócrito, da glicose, lactato, amônia e proteína, sendo que os valores retornam aos valores basais ao longo da recuperação. O exercício desempenhou um papel atenuador das respostas secundárias ao estresse ao permitir o retorno mais rápido aos valores basais da maioria dos índices avaliados nos peixes exercitados. A prática de exercício moderado pode contribuir para a criação intensiva de matrinxãs ao diminuir os índices de estresse e consequentemente, favorecer o crescimento.  Introdução  A aqüicultura é uma atividade que está em pleno desenvolvimento, expandindo-se e intensificando-se em muitos lugares do mundo. Neste sentido, a necessidade de desenvolver tecnologias que viabilizem a produção de espécies nativas em regime intensivo com base na preservação do meio ambiente e no desenvolvimento social são desafios a vencer por parte de aqüicultores e pesquisadores. Para isso, algumas práticas de manejo devem ser aprimoradas visando melhorar a produtividade e o bem-estar animal.   O transporte de peixes é uma prática comum em todas as fazendas de piscicultura, bem como nas estações de pesquisa. No entanto, este procedimento leva a uma série de respostas fisiológicas e bioquímicas que alteram seu equilíbrio homeostático e o balanço energético (Rocha et al., 2004; Inoue et al., 2005). Na tentativa de ajustar-se a estas condições adversas, os peixes respondem com uma série de respostas primárias e secundárias, como aumento das catecolaminas e do cortisol, o que estimula a mobilização de reservas energéticas, alteração dos parâmetros sanguíneos e cardiorrespiratórios através do aumento do número de eritrócitos, da concentração de hemoglobina e do hematócrito, aumento dos batimentos operculares levando a mudanças na capacidade de trocas iônicas, além de uma pronunciada excreção nitrogenada plasmática (Iwama et al., 1997; Mommsem et al., 1999; Urbinati & Carneiro, 2001).   A utilização de condicionadores tipo sal e/ou anestésicos em diversas concentrações são estratégias empregadas que visam minimizar o impacto do transporte em peixes e diminuir as respostas ao estresse (Carneiro & Urbinati, 2001; Inoue et al., 2005). No entanto, outras alternativas podem ser consideradas viáveis e mais vantajosas para a saúde dos peixes. O exercício em peixes em velocidades moderadas - 1,0 a 1,5 comprimento corporal/segundo (cc/seg) - tem mostrado efeitos benéficos ao crescimento, qualidade da carne e performance de natação (Davison, 1997; Ogata & Oku, 2000; Hackbarth & Moraes, 2006), bem como apresentam menores taxas de mortalidade e maior homogeneidade no tamanho (Jobling, 1994; Davison, 1997).  Trutas arco-íris apresentaram aumento da capacidade aeróbica do músculo branco e vermelho quando exercitadas a velocidade moderada (Richards et al., 2002) e, baixos níveis de catecolaminas, cortisol e glicose foram encontrados em salmonídeos após três semanas de treinamento (Woodward & Smith, 1985; Wood, 1991; Davison, 1997). Outra resposta metabólica positiva de peixes exercitados frente a situações de estresse agudo é que eles são metabolicamente menos sujeitos à exaustão, e o metabolismo retorna aos valores basais muito mais rapidamente que em peixes não treinados (Lackner et al., 1988; Young & Cech, 1994; Davison, 1997). Como o exercício tem se mostrado promissor em diminuir as respostas ao estresse e promover a recuperação mais rápida, acredita-se que as conseqüências metabólicas causadas pelo transporte possam ser atenuadas em peixes que se exercitam à velocidade moderada. O objetivo deste trabalho foi verificar as respostas metabólicas em matrinxãs exercitados à velocidade moderada pelo período de 60 dias e submetidos ao transporte.   Material e Métodos  Foram utilizados 108 alevinos de matrinxãs Brycon amazonicus (Spix & Agassiz, 1829), com peso e comprimentos iniciais de 40 ± 5g e 15 ± 2 cm. Os peixes foram “chipados” com “transponders” de identificação (Animall TAG) e separados em seis tanques circulares com capacidade de 200L cada, dotados de abastecimento contínuo e aeração constante. Os peixes foram alimentados duas vezes ao dia até a saciedade, com dieta comercial extrusada contendo 36% de proteína bruta e 4000 kcal/kg de ração de energia bruta, durante um período experimental de 60 dias. Temperatura, oxigênio dissolvido, pH e amônia foram monitorados em dias intercalados. A velocidade de correnteza de água em cada tanque foi feita regulando-se a entrada de água, sendo esta medida em comprimentos corporais/segundo (cc/seg), e determinada por fluxômetro mecânico (General Oceanics Inc). A velocidade foi reajustada a cada 21 dias, juntamente com a realização da biometria.  O experimento foi realizado com triplicata e os peixes foram aleatoriamente divididos em seis tanques, perfazendo um total de 12 peixes por caixa. Em três caixas foi imposto o exercício com velocidade de 1 cc/seg, por 60 dias e, nos outros tanques restantes, os peixes não realizaram qualquer tipo de exercício durante o período experimental. Após o tempo de exposição ao exercício, os animais foram expostos ao seguinte experimento de transporte: inicialmente, três animais de cada caixa foram imediatamente sacrificados, totalizando 9 peixes controle e 9 peixes exercitados, os quais foram chamados respectivamente de C0h e E0h. Os animais restantes foram colocados em 10 sacos aerados contendo 9 peixes em cada um e transportados por um período de 4 horas. Finalizado o transporte, sacrificaram-se 9 peixes do controle e 9 peixes do exercício, que foram nomeados C4h e E4h. Os demais peixes passaram pelo tempo de recuperação, contado desde o momento que o experimento iniciou, ou seja, desde 0h. Então 9 peixes do controle e 9 peixes do exercício foram amostrados nas diferentes horas. Os grupos de recuperação são nomeados de acordo com o tempo de recuperação atingido: C6h e E6h, C24h e E24h, C48h e E48h, C120h e E120h.  Em todos os animais amostrados foram feitas coletas de sangue e tecidos para análises posteriores. Analisaram-se os seguintes parâmetros hematológicos: hematócrito (Ht), hemoglobina (Hb) e contagem de eritrócitos (RBC). Foram realizadas as seguintes determinações plasmáticas: sódio, potássio, cloreto, proteína, amônia, lactato e glicose. As análises de variância e o pós-teste de Tukey para comparação das médias foram realizados com o auxílio do Graph Pad Instat (Version 3.0, Win 95/NT, 1997).   Resultados e Discussão  Em relação aos dados hematológicos, pode-se observar que o hematócrito aumentou para os dois grupos expostos ao transporte (C4h e E4h) e, em seguida, retornou aos valores basais (Tabela 1). O RBC apresentou-se maior para os grupos exercitados E0h e E120h, enquanto que a hemoglobina diminuiu para os grupos C6h e E6h, retornando aos valores basais em E24h e C48h (Tabela 1).   Tabela 1: Parâmetros hematológicos, iônicos e metabólitos de plasma de matrinxã não-exercitado e exercitado exposto a transporte por 4 horas.  Parâmetro hematológico e plasmático Condição experimental  C0h E0h C4h E4h C6h E6h RBC 2,1±0,5a 2,5±0,2b 2,4±0,3 a 2,5±0,2 a,b 2,1±0,3 a 2,3±0,3 a Ht 32±3 a 33±1,4 a 39,1±5,4b 40±4,4 b 26,4±2 c 27,6±5,9 c Hb 9,5±0,6 a 9,5±0,7 a 10,3±1 a 10,4±3,1 a 8,1±0,6 b 8,3±1,3 b Sódio 173,9±6,5 a 167,6±8,3 a 167,1±7,3 a,b 172,4±8,4 a,b 158,3±14,3 b 156,5±16,2 b Potássio 3,3±0,7 a 3±0,7 b 8,1±3,5 b 8,6±1,5 a 3±0,9 a 2,8±1,2 a Cloreto 1,35±0,1 a 1,33±0,1 a 1,2±0,1 b 1,2±0,1 b 1,3±0,1 a 1,2±0,2 a Amônia 3,7±1,3 a 3,5±0,5 a 7,2±1,7 b 7,1±0,9 b 5,1±0,6 a 4,6±0,7 a Lactato 1,6±0,5 a 1,6±0,3 a 15,6±4,7 b 14,2±4,1 b 2,02±0,5 a 2,9±2,3 a Proteína 0,3±0,1a 0,4±0,07 a 0,4±0,05 a 0,4±0,06 a 0,5±0,1 b 0,5±0,05 b  C24h E24h C48h E48h C120h E120h RBC 2,1±0,3 a 2,2±0,3 a 2,08±0,1 a 2,02±0,2 a 1,8±0,2 a,c 2,4±0,1 a,b Ht 27,3±3,3 a 28,9±3,5 a 28,5±3,1 a 30,3±3,3 a 38,1±3,2 a,c 3,19±3,1 b Hb 7,8±0,5 b 9,7±0,9 a 9,1±1,4 a 9,2±1,4 a 8,4±1 b 9,7±1,2 a Sódio 160,8±7,3 b 204,3±24,4 c 210±12,4 c 222,6±9,3 d 225,3±8,1 c 214±13 c Potássio 2,1±0,7 a 2,2±0,8 a 2,8±0,9 a 2,8±0,9 a 2,8±0,7 a 2±0,8 a Cloreto 1,3±0,06 a 1,3±0,1 a 1,4±0,09 c 1,4±0,05 c 1,4±0,03 c 1,4±0,04 c Amônia 4,9±0,8 a 4,4±0,9 a 4,6±0,4 a 3,9±0,4 c 3,8±0,5 a 4,03±0,9 a Lactato 2,2±0,4 a 2,6±1,1 a 1,9±0,5 a 2,1±0,7 a 1,9±0,3 a 1,6±0,7 a Proteína 0,6±0,08 b,c 0,6±0,06 b 0,5±0,04 b 0,6±0,06 c 0,5±0,07 b 0,5±0,06 b Letras diferentes indicam diferenças significativas (P<0,05), na linha.  Os eritrócitos são as células responsáveis pelo transporte da hemoglobina no sangue e seu número aumentado nos peixes exercitados sugere que o exercício moderado exigiu maior consumo de oxigênio. Considerando-se que o grupo exercitado apresentava esta elevação antes do transporte, é possível associar seu número não ao manejo imposto mas ao exercício realizado. Valores de hemoglobina alterados pelo transporte são relatados em diferentes espécies (Tavares-Dias et al., 2001; Caruso et al., 2005). Entretanto, observa-se uma recuperação mais rápida dos valores de hemoglobina nos peixes exercitados, o que em conjunto com o RBC aumentado, reflete uma adaptação metabólica desta espécie ao exercício, indicando que os animais exercitados podem lidar com determinadas condições de estresse recuperando-se mais efetivamente do que os não treinados.  O hematócrito aumentado nos grupos C0h e E0h é um indicador de estresse bem documentado (Iwama et al., 1997; Urbinati & Carneiro, 2001; Inoue et al., 2005), e não demonstra ter sido afetado pelo exercício, já que os valores são similares para os peixes sedentários e treinados. Esta resposta deve-se talvez ao fato de o matrinxã exercitado responder mais eficazmente com a variação de RBC e hemoglobina.   O equilíbrio iônico também sofreu alteração pelo transporte observando-se um aumento nas concentrações de sódio nos grupos C4h e E4h, diminuição para aquém dos valores basais em C6h e E6h e aumento para além dos valores iniciais em C48h e E48h, permanecendo assim até o final da recuperação (Tabela 1). A concentração de potássio aumentou nos grupos C4h e E4h e o cloreto aumentou nos grupos C4h e E4h, retornando aos valores basais em C6h e E6h. Porém, aumentou além dos valores iniciais em C48h e E48h e C120h e E120h, tal como o sódio (Tabela 1).   Sabe-se que, sob estresse, o equilíbrio iônico é afetado pelo cortisol, desequilibrando o balanço iônico nas brânquias e causando significativas mudanças da capacidade de trocas iônicas das lamelas. Assim, as concentrações de Na+, Cl- e K+ ficam prejudicadas sob estresse (McDonald & Milligan, 1997; Mommsen et al., 1999). Tais alterações são evidentes em ambos os grupos, treinados e sedentários, quando expostos a 4 horas de transporte. Pode-se observar que a partir do momento em que eles foram expostos ao transporte, os três íons sofreram aumentos nas suas concentrações e somente o potássio retornou aos valores basais. Fica evidente que o transporte causou modificações iônicas nos matrinxãs, tal como esperado, e que os peixes exercitados não retornaram aos valores iniciais mais rapidamente devido ao fato de terem feito atividade moderada. Como as alterações iônicas se devem à mobilização de catecolaminas e cortisol, pode-se dizer que o exercício não atenuou as modificações desses hormônios, já que seus resultados com relação ao balanço iônico são semelhantes aos peixes não treinados.  Com relação às repostas plasmáticas, observou-se alterações nas concentrações de lactato plasmático somente para os grupos C4h e E4h, retornando em seguida para os valores basais em todos os grupos (Tabela 1). A glicose plasmática aumentou nos grupos C4h e E4h e retornou aos valores iniciais em E6h e C24h (Figura 1). A concentração de amônia também aumentou nos dois grupos expostos ao transporte (C4h e E4h), retornando em seguida aos valores basais (Tabela 1). A concentração de proteína plasmática aumentou após o transporte e no período de recuperação permaneceu alta (Tabela 1).   Esses resultados mostram que matrinxã exposto ao transporte aumenta as concentrações de lactato, glicose e amônia, que são alterações comuns em processos de estresse, já que peixes estressados iniciam a produção de catecolaminas, que estimulam a liberação de glicocorticóides, em especial o cortisol (Iwama et al., 1997; Mommsem et al., 1999; Urbinati & Carneiro, 2001; Inoue et al., 2004; Inoue et al., 2005). Sob efeito do cortisol, o metabolismo do peixe começa a alterar-se, aumentando a glicose plasmática para mobilizar energia para os tecidos do corpo, assim como a mobilização de aminoácidos para o plasma através do catabolismo de proteínas no fígado, liberando amônia para o plasma. O lactato plasmático aumentado provavelmente é originado no músculo branco, também resultado de uma cortisolemia (Mommsen et al., 1999).  Os peixes exercitados também apresentaram a diminuição na concentração de glicose, após o transporte, muito mais rápida do que os peixes sedentários, assim como a amônia, ficando evidente que o exercício atenuou as respostas plasmáticas do estresse, como observado para outras espécies (Davison, 1997; Lackner et al., 1988).   0 hora 4 horas 6 horas 24 horas 48 horas 120 horas050100150200250aaaaaaabbatransporte e recuperaçãoabmg/dL controle exercício Figura 1. Glicose plasmática de matrinxãs exercitados expostos ao transporte. Letras indicam diferenças significativas (P<0,05).  Observou-se que peixes exercitados e sedentários apresentaram o mesmo padrão de respostas de estresse ao transporte, o que poderia sugerir que os níveis de catecolaminas circulantes são os mesmos, independente da realização do exercício. Entretanto, fica claro que o exercício desempenha um papel atenuador das respostas secundárias ao estresse, ao permitir o retorno mais rápido aos valores basais da maioria dos índices avaliados.  Conclusão  Os matrinxãs apresentaram as respostas clássicas de estresse após o transporte de 4 horas, porém, o retorno aos valores basais foi mais rápido que nos peixes não exercitados. A prática de exercício moderado pode contribuir com a criação intensiva de matrinxãs ao diminuir os índices de estresse e, consequentemente, favorecer o crescimento.  Referências   CARUSO, G.; GENOVESE, L.; MARICCHIOLO, G.; MODICA, A. 2005. Haematological, biochemical and immunological parameters as stress indicators in Dicentrarchus labrax and  Sparus aurata farmed in off-shore cages. Aquaculture international. 13: 67-73.  DAVISON, W. 1997. The effects of exercise training on Teleost Fish, a review of recent literature. Comp. Biochemistry Physiology. 117: 67-75.   HACKBARTH, A. & MORAES, G. 2006. 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Respostas hematológicas e plasmáticas de matrinxãs Brycon amazonicus exercitados e submetidos ao transporte.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/681398/1/FISIO11.pdf

Respostas hematológicas e plasmáticas de matrinxãs Brycon amazonicus exercitados e submetidos ao transporte.

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