GARCIA, R. A.

GROSSI DE SA, M. F.

MACEDO, L. L. P.

NASCIMENTO, D. C.

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Identificação e caracterização de nucleases intestinais dobicudo-do-algodoeiro: um desafio para o sucesso do RNAi nocontrole de insetos-pragaRayssa A. Garcia1; Danila C. Nascimento2; Leonardo L. P. Macedo3; Maria F.Grossi-de-Sá41 Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular. Universidade de Brasília, Campus DarcyRibeiro, 70910-900 Brasília, DF, Brasil. Email: rayssaagc@gmail.com. 2 Programa dePós-Graduação em Ciências Genômicas. Universidade Católica de Brasília,  Campus AvançadoAsa Norte, 70790-160 Brasília, DF, Brasil. 3 Analista A, Embrapa Recursos Genéticos eBiotecnologia Cenargen, 70770-917, Brasília, DF, Brasil. 4 Pesquisadora A, Embrapa RecursosGenéticos e Biotecnologia Cenargen, 70770-917, Brasília, DF, Brasil.O algodão é a fibra natural mais importante do mundo, sendo produzido em maisde 60 países e o Brasil é um dos maiores produtores e exportadores do mundo.Entre os insetos-pragas que devastam as plantações de algodão, o coleópteroAnthonomus grandis (bicudo-do-algodoeiro) é o mais destrutivo. Devido ao seuhábito endofítico e capacidade reprodutiva, o uso de inseticidas é ineficiente,ambientalmente prejudicial e possui altos custos. O desenvolvimento de novasestratégias para o controle do bicudo-do-algodoeiro tornou-se uma necessidade.O uso de RNA fita dupla (dsRNA) para silenciar expressão gênica é, atualmente,uma abordagem muito explorada para gerar plantas geneticamente modificadasresistentes a patógenos e insetos. Apesar do sucesso reportado por essaestratégia para algumas espécies de insetos-praga, a ação de ribonucleases nointestino médio do inseto continua sendo um desafio. Este trabalho tem comoobjetivo contribuir com o desenvolvimento de estratégias moleculares capazes deaumentar a estabilidade de dsRNAs, a fim de este ser refratário à ação deribonucleases de A. grandis. Três nucleases foram identificadas no transcritomade A. grandis e validadas por silenciamento via microinjecao de dsRNA em insetosadultos. A expressão das nucleases foi analisada por RT-qPCR em diferentestecidos e após o silenciamento. Ensaios para verificar a estabilidade do dsRNAforam realizados com homogenato intestinal do intestino médio anterior de A.grandis. O número de transcritos diminuiu consideravelmente 48 e 148 horas apósa microinjeção em insetos adultos. A atividade nucleásica, capacidade dedegradar tanto dsRNA quanto dsDNA, foi identificada no intestino de A. grandis,mostrando redução significativa 48 horas após a microinjeção. O desenvolvimentode estratégias capazes de inibir RNases e, assim, aumentar a biodisponibilidadedo dsRNA são promissoras para a aplicabilidade do RNAi em eventos de algodãoGM para o controle do bicudo-do-algodoeiro.

Identificação e caracterização de nucleases intestinais do bicudo-do-algodoeiro: um desafio para o sucesso do RNAi no controle de insetos-praga.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/1006951/1/resumo1312.pdf

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