FIM JÚNIOR, G. A.

LOPES, N. S. dos S.

MANIERI, F. Z.

PILON, L. E.

SANTANA, R. C. M.

ZAFALON, L. F.

A mastite, processo inflamatório da glândula mamária é responsável por grandes prejuízos aos produtores. O presente trabalho teve como objetivo investigar e identificar as espécies de Staphylococcus coagulase-negativos (SCN) isolados no pré e pós-parto da glândula mamária de ovelhas portadoras de mastite subclínica. Foram utilizadas 68 ovelhas das raças Santa Inês e Morada Nova pertencentes a Embrapa Pecuária Sudeste, localizada no município de São Carlos-SP. As amostras de leite foram coletadas 15 dias antes do desmame, no 15° e 30° dia pósparto (estação de monta seguinte). Os resultados mostraram que os SCN prevaleceram em todas as coletas de leite realizadas, (48,1%, 53,6% e 57,1% respectivamente). Dentre as espécies de SCN identificados, Staphylococcus xylosus foram os de maior ocorrência (30,0%, 35,5% e 27,6% respectivamente)

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  34  Revista Brasileira de Higiene e Sanidade Animal Print version ISSN 1981 – 2965   Revista Brasileira de Higiene e Sanidade Animal, 2014 Setembro; 8 (5 Supl 1): 34-39 http://dx.doi.org/10.5935/1981-2965.20140038  003. Espécies de Staphylococcus coagulase-negativos isoladas da glândula mamária de ovelhas com mastite subclínica1 Coagulase-negative Staphylococcus species isolated from the mammary gland of sheep with subclinical mastitis1   Lucas Eduardo Pilon 2, Luiz Francisco Zafalon 3, Raul Costa Mascarenhas Santana 4, Guilherme Aparecido Fim Júnior 5, Fernanda Zani Manieri 6, Nahryda Samara dos Santos Lopes 6 _______________________________________________________________________________ Resumo: A mastite, processo inflamatório da glândula mamária é responsável por grandes prejuízos aos produtores. O presente trabalho teve como objetivo investigar e identificar as espécies de Staphylococcus coagulase-negativos (SCN) isolados no pré e pós-parto da glândula mamária de ovelhas portadoras de mastite subclínica. Foram utilizadas 68 ovelhas das raças Santa Inês e Morada Nova pertencentes a Embrapa Pecuária Sudeste, localizada no município de São Carlos-SP. As amostras de leite foram coletadas 15 dias antes do desmame, no 15° e 30° dia pós-parto (estação de monta seguinte). Os resultados mostraram que os SCN prevaleceram em todas as coletas de leite realizadas, (48,1%, 53,6% e 57,1% respectivamente). Dentre as espécies de SCN identificados, Staphylococcus xylosus foram os de maior ocorrência (30,0%, 35,5% e 27,6% respectivamente). Termos de indexação: microrganismos, ovinos, sanidade animal, leite.  Abstract: Mastitis, inflammation of the mammary gland is responsible for major losses to producers. The present study aimed to investigate and identify the species of coagulase-negative Staphylococci (CNS) isolated pre and pos-calving mammary gland of sheep suffering from subclinical mastitis. We used 68 ewes Santa Inês and Morada Nova belonging to Embrapa Cattle Southeast, located in São Carlos-SP. Milk samples were collected 15 days before to weaning at 15° and 30 days pos-calving (next station mounts). The results showed that CNS prevailed in all samples of milk head (48.1%, 53.6% and 57.1%, respectively). Among the species identified CNS, Staphylococci xylosus were the most frequent (30.0%, 35.5% and 27.6%, respectively).  Index terms: microorganisms, sheep, animal health, milk. ____________________________  1   Parte da tese de Doutorado do primeiro autor. 2  Médico Veterinário e aluno de doutorado da Universidade Estadual Paulista – UNESP. *lucaseduardopilon@yahoo.com.br 3   Médico Veterinário, orientador e Pesquisador Cientifico da Embrapa Pecuária Sudeste. 4   Médico Veterinário, mestre e analista da Embrapa Pecuária Sudeste. 5   Médico Veterinário e aluno de mestrado da Universidade Estadual Paulista – UNESP. 6   Graduando em Ciências Biomédicas         35  Introdução  A mastite é definida como a inflamação da glândula mamária, responsável por causar alterações físico-químicas no leite e microbiológicas no tecido glandular mamário LANGONI  et al. (1998). A mastite ovina pode ser classificada em subclínica e clínica. Na síndrome subclínica não são observadas alterações na glândula mamária MAROGNA et al. (2010). De acordo com ZAFALON et al. (2010) os SCN predominam nos casos de mastite ovina.    O presente trabalho teve como objetivo investigar e identificar as espécies de SCN isolados no pré e pós-parto da glândula mamária de ovelhas portadoras de mastite subclínica. Materiais e Métodos O trabalho foi desenvolvido com 68 ovelhas, das raças Santa Inês e Morada Nova, pertencentes à Embrapa Pecuária Sudeste, localizada no município de São Carlos - SP.  As amostras de leite foram coletadas aos 15 dias antes do desmame e no 15° e 30° dia pós-parto (estação de monta seguinte), após lavagem das mãos do ordenhador com água e sabão, antissepsia dos esfíncteres dos tetos com álcool isopropilico 70%. Foi coletado um volume de aproximadamente 5 mL de leite de cada glândula mamária. Alíquotas de 100 µL de leite foram semeadas em ágar-sangue ovino desfibrinado a 5%, incubadas a 37°C e mantidas por até 72 horas, com leituras a cada 24 horas. Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase-positivos foram identificados de acordo com HOLT et al. (1994), Streptococcus spp. foram identificados de acordo com HARMON et al. (1990), Corynebacteryum spp. foram identificados de acordo com COLLINS & CUMMINIS (1986). As estirpes que apresentaram gêmula “brotamento” foram consideradas leveduras. Foram utilizados o teste de oxidase e a prova de resistência à furazolidona para diferenciar os gêneros Staphylococcus de Micrococcus. BAKER (1984). Para identificar as espécies de SCN, seguiu-se o esquema proposto por KLOOS & SCHLEIFER (1975), o qual   36  consiste de provas bioquímicas com os seguintes açúcares: xilose, arabinose, sacarose, trealose, manitol, maltose, lactose, xilitol, ribose e frutose, caracterização de hemolisinas e prova de redução de nitrato.    Resultados e Discussão   Do total de 136 amostras de leite de ovino coletadas 15 dias antes do desmame, 79 (58,1%) apresentaram isolamento microbiológico. As ocorrências dos agentes etiológicos isolados das glândulas mamárias com mastite subclínica encontram-se descritos na Tabela 1. Tabela 1. Etiologia infecciosa da mastite subclínica ovina durante o período pré e pós-parto. Microrganismos Coletas pré-parto     15dias                   pós-parto 30 dias         pós-parto    N      % N % N % Staphylococcus coagulase-negativos 38 48,1 30 53,6 28 57,1 Bacilos Gram negativos 17 21,5 7 12,5 6 12,2 Streptococcus spp 9 11,4 7 12,5 6 12,2 Staphylococcus aureus 5 6,3 8 14,3 5 10,2 Micrococcus spp 5 6,3 1 1,8 1 2,0 Corynebacterium spp 3 3,8 ---- ---- ---- ---- SCN + Streptococcus spp  2 2,5 1 1,8 ---- ---- SCN + Levedura ---- ---- ---- ---- 1 2,0 Levedura ---- ---- 1 1,8 1 2,0 Staphylococcus coagulase-positivo ---- ---- 1 1,8 ---- ---- Streptococcus spp + Bacilos G - ---- ---- ---- ---- 1 2,0 Total 79 100,0 56 100,0 49 100,0 SCN: Staphylococcus coagulase-negativos; Bacilos G -: Bacilos Gram negativos.        37  Dentre as amostras bacteriologicamente positivas, SCN isolados em cultura pura no pré-parto apresentaram maior frequência de isolamentos (38/48,1%). Este resultado corrobora com os achados de SANTANA et al. (2013) que, ao investigarem a etiologia da mastite subclínica em ovelhas das raças Santa Inês e Morada Nova encontraram como patógeno de maior ocorrência SCN (46% e 56,7%, respectivamente). Staphylococcus coagulase negativos foram isolados em cultura pura e em associação com outros microrganismos aos 15 e 30 dias pós-parto, (55,4% e 59,1% respectivamente), valores inferiores aos encontrados BOLSANELLO et al. (2009) que encontraram 61,1% de SCN em amostras de leite de ovelhas submetidas diariamente a ordenha mecânica. De acordo com SCOTT & MURPHY (1997), SCN podem ser isolados da superfície cutânea do teto de animais sadios, ou seja, esse microrganismo pode ser disseminado no rebanho através dos equipamentos de ordenha. Na Tabela 2 a seguir estão apresentadas as ocorrências das espécies de SCN identificados durante o pré e pós-parto dos animais. Dentre as espécies de SCN identificados, os S. xylosus prevaleceram em todas as coletas. Este resultado condiz com RADOSTITS et al. (2002), cujos achados demonstram que  S. xylosus, S. chromogenes e S. simulans são as espécies mais frequentemente isoladas a partir de casos de mastite subclínica em ovelhas.            38  Tabela 2. Espécies de Staphylococcus coagulase-negativos identificadas em ovelhas com mastite subclínica. Espécies de Staphylococcus  coagulase-negativos Coletas 15 dias antes   do desmame 15 dias  pós-parto 30 dias  pós-parto N    % N    % N    % Staphylococcus xylosus 12 32,4 11 35,5 8 27,6 Staphylococcus warneri 6 16,2 3 9,7 4 13,8 Staphylococcus simulans 1 2,7 3 9,7 4 13,8 Staphylococcus cohnii 3 8,1 1 3,2 ---- ---- Staphylococcus saprophyticus 1 2,7 ---- ---- 1 3,4 Staphylococcus epidermidis 1 2,7 ---- ---- ---- ---- Staphylococcus hominis 1 2,7 ---- ---- ---- ---- Staphylococcus capitis ---- ---- ---- ---- 2 6,9 Não identificados* 12 32,4 13 41,9 10 34,5 Total 37 100,0 31 100,0 29 100,0 * Não foi possível identificar as espécies de Staphylococcus coagulase-negativos por meio dos testes bioquímicos.  Conclusão   Staphylococcus coagulase-negativos são os principais agentes envolvidos na mastite subclínica de ovelhas, e dentre as espécies de maior ocorrência destaca-se Staphylococcus xylosus. Agradecimentos   À Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), pelo apoio financeiro (Processo Fapesp n° 2012/23044-0). Referências Bibliográficas BAKER, J.S. Comparison of various methods for differentiation of Staphylococci and Micrococci. Journal of Clinical Microbiology, v.19, n.6, p.875 - 879, 1984. BOLSANELLO, R.X.; HARTMAN, M.; DOMINGUES, P.F.; JÚNIOR, A.S.M.; LANGONI, H. Etiologia da mastite em ovelhas bergamácia submetidas á ordenha mecânica,   39  criadas em propriedades de Botucatu, SP. Veterinária e Zootecnia. v.16, n.1, p.221 - 227, 2009. HARMON, R.J.; EBERHART, R.J.; JASPER, D.E.; LANGLOIS, B.E.; WILSON, R.A. Microbiological Procedures for the Diagnosis of Bovine Udder Infections, 3ª ed. Arlington, VA, National Mastitis Council, 1990. HOLT, J.G.; KRIEG, N.R.; SNEATH, P.H.A.; STALEY, J.T.; WILLIAMS, S.T. Gram-positive cocci: In: Bergey‟s manual of determinative bacteriology. 9ª. ed. Baltimore: Willians & Wilkins. 1994, 544p. KLOOS, W. E.; SCHLEIFER, K. H. Simplified scheme for routine identification of human Staphylococcus species. Journal of Clinical Microbiology. v.1, n.1, p.82 - 88, 1975. LANGONI, H.; DA SILVA, A. V.; CABRAL, K. G.; DOMINGUES, P. F. Etiologic aspects of bovine mastitis: aerobics bacterial flora. In: CONGRESSO PANAMERICANO DE CONTROL DE MASTITIS E CALIDAD DE LA LECHE, 1998, México. p.25-29. 1998. MAROGNA, G.; ROSELU, S.; LOLLAI, S.; TOLA, S.; LEORI, G. Clinical findings in sheep farms affected by recurrent bacterial mastitis. Small Ruminant Research, v.88, n.2-3, p.119 - 125, 2010. RADOSTITS, O. M.; GAY, C. C.; BLOOD, D. C; HINCHCLIFF, K. W. Clínica veterinária: um tratado de doenças dos bovinos, ovinos, suínos, caprinos e eqüinos. 9.ed. Rio de Janeiro, p.1737, 2002.  SANTANA, R.C.M.; ZAFALON, L.F.; ESTEVES, S.N.; TANAKA, E.V.; PILON, L.E.; MASSA, R. Occurrence of etiologic agents causing subclinical mastitis in Morada Nova and Santa Inês ewes. Ars Veterinária. v.29, n.3, p.148-152, 2013.  SCOTT, P. R.; MURPHY, S. Outbreak of Staphylococcal dermatitis in housed lactating Suffolk ewes. Veterinary Record, v.140, n.24, p.631 - 632, 1997. ZAFALON, L.F.; MARITNS, K.B.; DIAS, W.A.F.; VERISSÍMO, C.J.; ESTEVES, S. N. Etiologia infecciosa da mastite subclinica ovina em rebanhos destinados à produção de carne, Veterinária e Zootecnia, v.17, n.4, p.568 - 576, 2010. 

Espécies de Staphylococcus coagulase-negativos isoladas da glândula mamária de ovelhas com mastite subclínica.

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Espécies de Staphylococcus coagulase-negativos isoladas da glândula mamária de ovelhas com mastite subclínica.

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