GANZER, E.

HELM, C. V.

NUNES, H. C. A.

TAVARES, L. B. B.

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RESPOSTA DAS CELULASES PRODUZIDAS POR MACROFUNGOS AO MÉTODO DE CONCENTRAÇÃO ENZIMÁTICAHayssa Carolini Alamar Nunes; Lorena Benathar Ballod Tavares; Elis Ganzer; Cristiane Vieira HelmResíduos lignocelulósicos são matérias-primas usuais da produção de etanol de segunda geração, desde que seja efetuada uma etapa de hidrólise para a liberação de glicose, empregando-se enzimas comerciais.  Muitas dessas enzimas são produzidas por fungos, e para aumentar sua eficiência estudos de otimização da produção, da concentração e da purificação das enzimas, tem sido elaborados. Baseado nesse contexto, este estudo propõe uma metodologia de concentração de extratos fúngicos obtidos do cultivo de Trichoderma sp, Ganoderma lucidum isoladamente e em cultura mista, em resíduo triturado de pupunha. O processo de concentração das enzimas foi composto por quatro etapas intercaladas por um período de repouso de 1 hora a -20ºC com posterior centrifugação a 6000 rpm. A 1ª etapa foi constituída da adição de tampão 0,1M de acetato de amônio em metanol no extrato (40 mL de tampão para 10 mL de extrato). Na 2ª etapa foi realizada a retirada do tampão e adição de 40 mL de metanol 80% junto ao precipitado. Na 3ª etapa houve a retirada do metanol e adição de 40 mL de acetona 80% no precipitado e retirada da acetona. Por fim na 4ª etapa o precipitado permaneceu com sílica por dois dias na geladeira para posterior ressuspensão com tampão fosfato pH 7,5. Foram quantificadas as celulases, Endoglucanase (CMCase) e Exoglucanase (Avicelase) pelo método de DNS e as proteínas totais pelo método de Bradford antes e depois da concentração. Observou-se o aumento de proteínas depois da concentração, principalmente para os extratos de Trichoderma sp, onde o melhor resultado foi de 4,16 mg/L para 276,22 mg/L, aumentando 66 vezes. Quanto às celulases, houve queda da atividade, principalmente para no G. lucidum. A maior queda de atividade enzimática para esse fungo foi de 0,51 UmL-1 para 0,07 UmL-1, diminuindo 86% para a CMCase e de 0,62 UmL-1 para 0,22 UmL-1, diminuindo 65% para a Avicelase. Os resultados indicam que o método de concentração usado não foi eficiente para aumentar a atividade das celulases, todavia, pode ser empregado para a concentração de demais proteínas.   

Resposta das celulases produzidas por macrofungos ao método de concentração enzimática.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/1000407/1/2014CrisHMIPEResposta.pdf

Resposta das celulases produzidas por macrofungos ao método de concentração enzimática.

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