Determinou-se o período de sobrevivência de conídios de Mycosphaerella fijiensis sobre diversos materiais como: madeira, plástico, tecido de algodão, papelão, pneu, ferro (carcaça de automóvel), folhas e frutos de bananeira (Musa sp.), materiais possíveis de transportar e disseminar o patógeno a longas distâncias. Concomitantemente, avaliou-se a sobrevivência de M. fijiensis associada a folhas de bananeira com mais de 50% da área foliar lesionada

GASPAROTTO, L.

HANADA, R. E.

PEREIRA, J. C. R.

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SOBREVIVÊNCIA DE CONÍDIOS DE Mycosphaerella fijiensisEM DIFERENTES MATERIAISROGÉRIO E. HANADA1, LUADIR GASPAROTTO2 & J. CLÉRIO R. PEREIRA21Coordenação de Pesquisas de Produtos Florestais - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia,Cx. Postal 478, CEP 69011-970, Manaus, AM, Fax: (92) 643-3096, e-mail: rhanada@inpa.gov.br;2Embrapa Amazônia Ocidental, Cx. Postal 319, CEP 69011-970, Manaus, AM(Aceito para publicação em 02/04/2002)Autor para correspondência: Rogério Eiji HanadaHANADA, R.E., GASPAROTTO, L. & PEREIRA, J.C.R. Sobrevivência de conídios de Mycosphaerella fijiensis em diferentes materiais.Fitopatologia Brasileira 27:408-411. 2002.RESUMODeterminou-se o período de sobrevivência de conídios deMycosphaerella fijiensis sobre diversos materiais como: madeira,plástico, tecido de algodão, papelão, pneu, ferro (carcaça deautomóvel), folhas e frutos de bananeira (Musa sp.), materiaispossíveis de transportar e disseminar o patógeno a longas distâncias.Concomitantemente, avaliou-se a sobrevivência de M. fijiensisassociada a folhas de bananeira com mais de 50% da área foliarlesionada. Os materiais foram infestados com conídios de M. fijiensis,em locais predeterminados, produzidos em meio de BDA. Osmateriais, as folhas e os frutos infestados e as folhas com sintomas dadoença, foram mantidos em sala com condicionador de ar (17,8 -20,1 oC e 40 - 50% U.R.), em sala com temperatura ambiente (23,6 -29,8 0C e 55 - 75% U.R.) e também em um galpão em condições deABSTRACTConidium survival of Mycosphaerella fijiensis on different materialsAn experiment was conducted with the objective todetermine the survival period of Mycosphaerella fijiensis on commonlong distance dispersal materials: iron, wood, plastic, cotton textiles,fruits and leaves of banana (Musa sp.), rubber (tires) and cardboardpacking. Conidia of M. fijiensis produced on PDA were atomizedonto materials. The infested materials were placed in rooms withand without air conditioning systems and in a shed. Conidiumsurvival was evaluated zero, one, three, five, seven, ten, 13, 18, 23,campo (22,2 - 30,9 oC e 60 - 92% U.R.). As avaliações foram feitasimediatamente após a infestação e com um, três, cinco, sete, dez, 13,18, 23, 30 e 60 dias, removendo-se os conídios e semeando-os emplacas de Petri contendo ágar-água, mantidas em incubadora a 25 oC+ 2 oC, no escuro. Após 24 h, avaliou-se, sob microscópio ótico, agerminação dos conídios. O comportamento da sobrevivência dosconídios nos diferentes materiais e associados nas folhas doentes, foisemelhante nos três ambientes testados. Os conídios de M. fijiensispermaneceram viáveis até a última avaliação (60 dias) em folhas debananeira e tecido de algodão; até 30 dias em papelão, madeira,plástico e pneu; até 18 dias em frutos e até dez dias em ferro.Palavras-chave adicionais: sobrevivência, Sigatoka negra,bananeira.30 and 60 days after infestation by collecting conidia, plating themand incubating at 25 oC. Conidium germination was quantified bymicroscope 24 h after incubation. The results showed that the conidiaremained viable on leaves and cotton textiles until the last evaluation.The viability of M. fijiensis on cardboard, wood, plastic and tiressurfaces was detected up to 30 days after infestation. On fruits andiron, conidia remained viable until 18 days and ten days afterinfestation, respectively.Em 1998, a Sigatoka negra da bananeira (Musa sp.)causada por Mycosphaerella fijiensis Moleret foi registradano Brasil, nos municípios de Tabatinga e Benjamim Constant,estado do Amazonas (Pereira et al., 1998). Atualmente, opatógeno encontra-se disseminado por todo o estado doAmazonas, Rondônia, Acre, parte de Mato Grosso (região deCárceres) e mais recentemente foi constatado nos municípiosde Tartarugalzinho - Amapá, Caruebe - Roraima e Almerim -Pará (Gasparotto et al., 2001). Nos demais estados produtoresde banana do país, há uma preocupação generalizada quanto àintrodução desse patógeno. Diante desse fato, as autoridadesde vários estados livres da doença estão emitindo, ou jáemitiram, portarias impedindo a entrada de mudas e frutasde bananeira oriundas dos estados atingidos pela doença.A disseminação de propágulos férteis do patógeno é oprocesso responsável pelo incremento da doença (Amorim,1995). Mycosphaerella fijiensis produz quantidadesignificativa de propágulos que são dispersos pelo vento. Osascosporos desenvolvidos em grande quantidade no interiordos peritécios têm sido considerados o principal propágulode disseminação de M. fijiensis em bananais (Gonzáles, 1999;Stover, 1980). Entretanto, conídios também podem serconsiderados estruturas de disseminação do patógeno (Jacome& Schuh, 1993a, 1993b; Gonzáles, 1999).Apesar de o vento ser considerado um dos principaismeios de disseminação dos esporos do fungo, as mudasdoentes e as folhas infetadas, que são colocadas entre os cachospara evitar o ferimento dos frutos durante o transporte,408 Fitopatol. bras. 27(4), jul - ago 2002Sobrevivência de conídios de Mycosphaerella fijiensis em diferentes materiais409Fitopatol. bras. 27(4), jul - ago 2002também podem se constituir um meio eficiente e rápido paraa disseminação do patógeno a longas distâncias. Além disso,os esporos quando aderidos nas embalagens, principalmentecaixas, nos próprios frutos, nas roupas dos operários e nosveículos, dependendo do seu período de sobrevivência, podemser transportados para áreas livres da doença. Diante dessefato, objetivou-se neste trabalho avaliar a sobrevivência deconídios de M. fijiensis aderidos a diferentes materiais eassociados a lesões em folhas doentes destacadas.O trabalho foi conduzido no Laboratório deFitopatologia da Embrapa Amazônia Ocidental e noLaboratório de Patologia de Madeira, da Coordenação dePesquisas de Produtos Florestais, Instituto Nacional dePesquisas da Amazônia (INPA), em Manaus, AM.A sobrevivência dos conídios do patógeno foi avaliadaem amostras de folhas de bananeira, cascas de bananas verdesaté ao amadurecimento, pedaços de madeira, papelão, plástico,tecido de algodão, ferro (carcaça de veículos) e pneu, comdimensões aproximadas de 10 x 15 cm.Os esporos foram produzidos a partir do isolado LPM472, em meio de cultura BDA (Hanada et al., 2002). Emseguida, foram coletados em água destilada, centrifugadospor 2 min a 3.000 rpm, descartando-se o sobrenadante, e doprecipitado preparou-se uma suspensão de 9,6 x 106 conídios/ml. Foram distribuídos cerca de 0,04 ml da suspensão sobreos materiais, com auxílio de um pincel, em círculos deaproximadamente 0,5 cm de diâmetro e em locais pré-determinados.Os materiais contendo os conídios de M. fijiensis foramcolocados em bandejas  e distribuídos em sala comcondicionador de ar (17,8 - 20,1 oC e 40 - 50% U.R.), em salacom temperatura ambiente (23,6 - 29,8 oC e 55 - 75% U.R.)e, também, em um galpão em condições de campo (22,2 -30,9 oC e 60 - 92% U.R.). Em cada ambiente foram colocadosquatro repetições de cada material contendo conídios dopatógeno.Avaliou-se a germinação dos conídios aos zero, um,dois, três, cinco, sete, 10, 13, 18, 23, 30 e 60 dias, após a suadeposição em cada material. Os conídios foram transferidos,por meio de raspagem com um estilete flambado, para placasde Petri contendo ágar-água 2%, mantidas em incubadora a25 oC + 2 oC, no escuro 24 h. Após esse período, foramobservadas presença ou ausência de tubo germinativo de 100conídios de cada parcela, perfazendo um total de 400 conídiospor tratamento, sob microscópio óptico.Também se avaliou a sobrevivência de M. fijiensisassociada às lesões em folhas doentes destacadas. Para tanto,foram coletadas na área experimental da Embrapa AmazôniaOcidental, folhas doentes da cultivar Prata Anã, apresentandomais de 50% da área foliar lesionada. Quinze amostras de 20cm x 30 cm foram distribuídas em locais semelhantes aosdos materiais em teste e a viabilidade do patógeno nasamostras foi avaliada nos mesmos intervalos de tempo. Sobmicroscópio estereoscópico, conídios foram transferidos comestilete de ponta fina para placas de Petri contendo meio deBDA, que foram mantidas à temperatura de 25 oC + 2 oC.Diariamente, observou-se a formação de colônias no meio decultura.A sobrevivência dos conídios nos diferentes materiaisfoi semelhante nas três condições de ambientes testados (salacom condicionador de ar, sala com temperatura ambiente egalpão em condições de campo). Os conídios permaneceramviáveis até à última avaliação (60 dias) em folhas de bananeirae tecido de algodão; até 30 dias em papelão, madeira, plásticoe pneu; até 18 dias nos frutos, devido ao seu apodrecimento,e até dez dias no ferro, provavelmente devido à oxidação domaterial (Tabela 1). Pelo fato de não haver diferenças degerminação de conídios de M. fijiensis independentementedos efeitos ambientais, utilizaram-se os valores médios, nostrês ambientes testados, para determinar a curva desobrevivência dos conídios (Figura 1).Portanto, os conídios aderidos à superfície de caixasde papelão, plástico ou madeira, tecidos das roupas dos ope-rários; carrocerias, cabine e pneus de veículos que transitamem bananais afetados por Sigatoka negra, podem ser umagente de disseminação a longa distância, independentementede transportar o fruto. Estes resultados sobre a longevidadedos conídios de M. fijiensis, na ausência do hospedeiro, sãoinformações valiosas do ponto de vista epidemiológico, comimplicações diretas na disseminação do patógeno.Todavia, os conídios associados às lesões das folhascoletadas no campo permaneceram viáveis até à últimaavaliação (60 dias) nos três ambientes testados. Krans et al.(1982) citam que conídios de M. musicola e M. fijiensis, emcondições naturais, podem sobreviver de três a quatro semanasassociados às folhas doentes e ascosporos oito semanas nointerior de peritécios. Os mesmos períodos de sobrevivênciados ascosporos associados em folhas de bananeiras caídas nochão foram relatados por Stover (1980). Esses dados reforçamos resultados obtidos neste trabalho, uma vez que, os conídiosde M. fijiensis sobreviveram em folhas destacadas até 60 dias.Alguns fungos produzem esporos que apresentamcertas características que mantêm a sua viabilidade por umdeterminado período. Segundo Sussman & Halvarson(1966), esses esporos possuem alta pressão osmótica, o queos permite absorver água do ar e manter sua viabilidade porum longo período. É provável que conídios de M. fijiensissejam um desses esporos cujas características permitem umamaior longevidade, explicando os dados registrados nessetrabalho.Pode existir alguma desidratação dos conídios sob ascondições de ar-condicionado o que mostra que esporos deM. fijiensis podem sobreviver mesmo quando expostos aalgum grau de desidratação. Esse comportamento de esporosfoi, também, constatado para alguns fungos como Drechsleraspp. (Dhingra & Sinclair, 1995), Erysiphe graminis DC. f.sp. hordei Em. Marchal., (Moseman & Powers, 1957) eferrugem em folhas de trigo (Triticum aestivum L.) (Young& Wadsworth, 1953).A presença e a sobrevivência de conídios de M. fijiensisem folhas doentes reforçam a recomendação de que folhas debananeira não devem ser utilizadas na proteção dos frutos410 Fitopatol. bras. 27(4), jul - ago 2002R.E. Hanada et al.durante o transporte, pois servem de fonte de inóculo paradisseminação do fungo a longas distâncias.Uma das formas de retardar a disseminação de M.fijiensis é impedir o transporte de mudas infetadas e o usodas folhas para proteger os frutos de ferimentos durante otransporte e, ao mesmo tempo, utilizar produtos químicospara desinfestação das embalagens e dos veículos nas áreascontaminadas antes de saírem em direção às áreas livres dadoença (Stover, 1977).Avaliação (dias) Material Condição 0 1 5 10 18 30 60 Com Ar 87* 78,5 58,2 45,2 30,5 13,7 5,7 Sem Ar 87 76,0 59,5 48,2 30,5 13,5 3,7 Folha de bananeira Campo 87 77,5 58,2 45,2 30,7 18,0 8,0 Com Ar 87 79,5 67,7 60,5 43,5 26,5 5,2 Sem Ar 87 79,2 61,2 40,0 33,7 12,5 1,0 Tecido Campo 87 77,5 59,2 45,0 33,0 17,5 1,7 Com Ar 87 75,0 36,0 24,5 13,5 2,7 0,0 Sem Ar 87 76,5 36,8 31,5 16,2 2,2 0,0 Papelão Campo 87 76,5 57,0 31,2 15,0 2,5 0,0 Com Ar 87 75,5 55,5 38,0 17,5 0,5 0,0 Sem Ar 87 74,5 55,2 37,7 18,2 0,7 0,0 Pneu Campo 87 74,2 55,0 38,2 14,7 0,7 0,0 Com Ar 87 76,2 42,5 23,2 10,7 0,5 0,0 Sem Ar 87 77,7 43,5 27,0 11,7 0,5 0,0 Plástico Campo 87 75,0 45,5 28,2 11.0 1,0 0,0 Com Ar 87 74,2 53,0 39,7 28,0 5,0 0,0 Sem Ar 87 74,5 56,5 40,0 29,5 5,5 0,0 Madeira Campo 87 77,5 51,2 38,7 29,0 3,2 0,0 Com Ar 87 79,0 53,0 27,5 10,7 0,0 0,0 Sem Ar 87 78,2 61,0 26,5 10,2 0,0 0,0 Fruto  Campo 87 80,2 59,2 24,7 10,5 0,0 0,0 Com Ar 87 71,5 19,2 0,5 0,0 0,0 0,0 Sem Ar 87 73,5 20,2 0,2 0,0 0,0 0,0 Ferro Campo 87 72,7 22,2 0,2 0,0 0,0 0,0  TABELA 1 - Percentagem de germinação de conídios de Mycosphaerella fijiensis* Média de quatro repetições.Calvo & Romero (1998) encontraram ascósporos deM. fijiensis até uma distância de 50 Km, a partir de umaúnica fonte de inóculo. Enquanto, Stover (1980) observouque os conídios facilmente se desprendem com o vento dosconidióforos e são levados a longas distâncias pela correntede ar. A facilidade de disseminação dos esporos de M. fijiensisassociada à longevidade destes, quando aderidos aos diferentesmateriais usados na confecção de caixas para transporte defrutas, aos veículos, às roupas dos operários e às folhas ecascas dos frutos da bananeira, implica em dificuldades noestabelecimento de barreiras efetivas que impeçam suadisseminação para o restante do país. Dessa forma, todos osesforços das autoridades na emissão de portarias e noestabelecimento de barreiras fitossanitárias, provavelmente,apenas retardarão a entrada do patógeno em áreas indenes.01020304050607080901000 5 7 10 13 18 23 30 60DiasPercentagemFolha debananeiraTecidoPapelãoPneuPlásticoMadeiraFrutoFerroFIG. 1 - Sobrevivência de conídios de Mycosphaerellafijiensis em diferentes materiais.REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASAMORIM, L. Disseminação. 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Sobrevivência de conídios de Mycosphaerella fijiensis em diferentes materiais.

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