ANDRADE, F. P. de

EGITO, A. S. do

FEITOSA, T. S.

POMPEU, R. C. F. F.

RAMOS, M. V.

SALLES, H. O.

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VI Congresso Brasileiro de Mamona III Simpósio Internacional de Oleaginosas Energéticas, Fortaleza, CE. 2014CONGRESSO BRASILEIRO DE MAMONA, 6.; SIMPÓSIO INTERNACIONAL DE OLEAGINOSAS ENERGÉTICAS, 3., 2014, Fortaleza. Anais... Campina Grande: Embrapa Algodão, 2014. p. 20HIDRÓLISE DE PROTEÍNAS TÓXICAS DE SEMENTES DE MAMONA UTILIZANDO LÁTEX VEGETAL COMO FONTE PROTEOLÍTICAAntonio Silvio do Egito1, Roberto Cláudio Fernandes Franco Pompeu, Francisco Pereira de Andrade, Tibério Sousa Feitosa, Márcio Viana Ramos, Hévila Oliveira Salles1. Médico-veterinário, Doutor em Aspects Moleculaires Et Cellulaire pela Universite Henri Poincare, pesquisador da Embrapa - antoniosilvio.egito@embrapa.br RESUMO - Sementes de mamona (Ricinus communis L.) têm sido utilizadas para matéria-prima na obtenção de óleo destinado à indústria do biocombustível. O resíduo da extração, denominado torta ou farelo de mamona, tem potencial para utilização na alimentação animal como fonte de proteínas. No entanto, para que este resíduo seja ofertado a animais, é necessário sua destoxificação em decorrência da presença de ricina, uma toxina letal para Eucariontes. Inúmeros métodos têm sido testados utilizando, principalmente, agentes químicos para realizar essa destoxificação. No entanto, há a possibilidade de se utilizar proteases vegetais. Objetivou-se com este estudo hidrolisar a ricina, presente em extratos obtidos de sementes de mamona variedade BRS-Energia, com extratos proteolíticos vegetais de origem laticífera. Para extração das proteínas das sementes de mamona, 10 g de sementes sem casca de BRS-Energia foram trituradas e o macerado ressuspendido em 100 mL de uma solução aquosa contendo 1% (p/v) de NaCl e 0,02% (p/v) de azida sódica. A mistura foi agitada por 4 horas a 4 °C e centrifugada a 10.000 x g por 30 minutos a 4 °C. O pellet obtido foi descartado e o sobrenadante submetido à liofilização e congelação a -20 °C. O extrato proteolítico do látex de Calotropis procera foi obtido após extração com água destilada na proporção de 1:1, seguindo centrifugação, liofilização e congelação nas mesmas condições das sementes de mamona. Definiu-se como uma unidade de atividade (1U) de protease a quantidade em miligramas do extrato proteolítico liofilizado capaz de coagular 1 mL de leite em pó desnatado e reconstituído em 1 minutos a 37 °C. Para realização da hidrólise, 10 mg do liofilizado de sementes foram dissolvidos em 1 mL de água destilada, seguido da adição de 0,25 mg (2U) do liofilizado contendo as proteases, sendo a mistura incubada por 30 minutos, 1 hora, 3 horas e 6 horas. A ação das proteases do látex sobre as proteínas das sementes de mamona foi avaliada por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) a 15%. A cada 100 µL da reação de hidrólise foram adicionados 300 µL de tampão de amostra, seguido do aquecimento a 100 °C por 3 minutos. Alíquotas de 70 µL de cada amostra foram submetidas à eletroforese e revelados com nitrato de prata. Após revelação observaram-se resíduos de ricina nas amostras submetidas à hidrólise por 30 minutos, 1 hora e 3 horas; e após 6 horas de hidrólise, observou-se total desaparecimento de todas as proteínas quando comparados com o controle (extrato liofilizado das sementes sem hidrólise). Os resultados mostraram que o extrato proteolítico de látex foi capaz de hidrolisar todas as proteínas presentes no extrato liofilizado de sementes de mamona da variedade BRS-Energia, sendo mais uma alternativa de destoxificação da torta de mamona.Palavras chave: biotecnologia de proteases, biorremediação, digestibilidade.Apoio: Funcap, CNPq.

Hidrólise de proteínas tóxicas de sementes de mamona utilizando látex vegetal como fonte proteolítica.

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