ALVES, M. de C.

CARNEIRO, A. A.

GONÇALVES, L. C. de S.

MACIEL, L. S.

SOUZA, F. A. de

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XXI ALAM Resumo:1605-1Poster (Painel)1605-1 Seleção de estirpes Agrobacterium rhizogenes para obtenção de raízes Ri T-DNA de milho(Zea mays) transformadas.Autores: Laiane Silva Maciel (EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária) ; Meire deCassia Alves (EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária) ; Livia Cristina deSouza Gonçalves (EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária) ; AndréaAlmeida Carneiro (EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária) ; FranciscoAdriano de Souza (EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária)ResumoAgrobacterium  rhizogenes  infecta  plantas,  notadamente  dicotiledôneas,  provocando  um  crescimento  anormal  de  raízes,  umapatogênese denominada “hairy roots”. A infecção por A. rhizogenes ocorre através da transferência de um segmento do plasmídeoRi, denominado T-DNA para o genoma vegetal. Raízes transformadas via A. rhizogenes têm inúmeras aplicações biotecnológicas,tais como produção de fármacos, crescimento de microrganismos biotróficos e também estudo de genes expressos em raízes. Noentanto, as agrobactérias apresentam baixa eficiência de transformação em gramíneas. Esse estudo teve por objetivo desenvolver umprotocolo de transformação de milho (Hi II) por A. rhizogenes. Inicialmente, foi avaliada a diversidade genética de 16 estirpes de A.rhizogenes [(1) R1601; (2) 2659; (3) 8196; (4) A4; (5) CCT4821-1; (6) CCT4832-3; (7) CCT4842-4; (8) CCT4842-5; (9) A4-B; (10)8196-B; (11) LBA; (12) A4-C; (13) 2659-B; (14) 15836; (15) 9402; (16) 1601-B] por REP-PCR, sendo selecionadas 4 estirpes queapresentavam maior distância filogenética. Embriões de milho foram tratados com acetosseringona e inoculados com A. rhizogenes.O plasmídeo pCambia 3301 contendo o gene repórter β-glucuronidase (gus) e fosfinotricina acetiltransferase (bar) foi utilizado paraa seleção de transformantes. Após testes iniciais, foi selecionada a estirpe A. rhizogenes 8196 + pCambia 3301 e foram testadas trêsconcentrações bacterianas (OD 550= 0,1; 0,3 e 0,9) e tempo (3 e 7 dias) de permanência em meio Co-cultivo (CcM). A taxa decrescimento das raízes foi quantificada aos 4, 11 e 21 dias após repicagem. Raízes com taxas de crescimento mais elevadas foramselecionadas para confirmação da transformação. Raízes com melhor desenvolvimento foram obtidas com 3 dias de incubação e OD550 = 0,1. A expressão do gene gus foi transiente nos embriões e não foi detectada nas raízes. A confirmação por PCR dos genes bar,rol  B,  rol  C e  virD1 no genoma vegetal  está em andamento.  As raízes Ri T-DNA são facilmente cultivadas in vitro podendocontribuir para o entendimento da relação funcional de genes expressos nas raízes e a associação entre parasito-hospedeiro.Palavras-chave:  biotecnologia, hairy roots, transformação genéticaXXI ALAM http://www.sbmicrobiologia.org.br/cdlatino/resumos/R1605-1.html1 de 1 19/08/2014 16:18

Seleção de estirpes Agrobacterium rhizogenes para obtenção de raízes Ri T-DNA de milho (Zea mays) transformadas.

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