BOARI, A. de J.

OLIVEIRA, A. C. S. de

PANTOJA, K. de F. C.

PRADO, E.

SOUSA, C. M. de

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Ferrisia virgat; ...2010 SP-PP-6425//11///11///11///11///1/111/11/111/11//111////1/11//11///111/11111/111/111/BOARI AJ; OLlVEIRAACS; PRADO E.; PANTOJA KFC; SOUZA CM. Fyellaw mattle vírus da pimenteira do reino. 2010. Horticultura Brasileira CPATU- 43913-1Ferrisia virgata (Cockerell): vetora do Piper yellow mottle virus da pimenteira doreino. ~~~Alessandra de Jesus Boarí": Ana Carolina Sonsim de Ollvelra": Emesto prad02; Késsiade Fátima Cunha Pantoja3; Cristiane Meio de Sousa31 Embrapa Amazônia Oriental - Trav. Enéas Pinheiros s/n, Marco, 66095-100 8elém-PA,ajboari@cpatu.embrapa.br, 2 EPAMIG - Campus da UFLA, CP 37, 37200-000, Lavras-MG -epradoster@gmail.com-,-3UFRA-AvenidaPerimetral,250, 18elém - PA, 66077-830,carolsonsim@hotmail.com; cris.ufra@hotmail.com; kessiapantoja@yahoo.com.br;RESUMOA pimenteira-do-reino (Pipernigrum L.)pode ser infectada pelos vírus Cucumbermosaic virus (CMV), Piper yellow mottle virus(PYMoV), e podem causar grandes perdasna produção. Os sintomas causados porestes vírus são clorose, mosqueado,mosaico, clareamento de nervuras,deformação foliar, nanismo e redução daprodução de frutos. O CMV é transmitido porpulgões enquanto que o PYMoV porcochonilhas. Há relato da associação daespécie de cochonilha Pseudococcus elísaecom pimenteira do reino com sintomas deviroses no estado do Pará, mas não hácomprovação de que é vetor do PYMoV. Aidentificação da espécie transmissora éimportante para a elaboração de estratégiasde controle, além de auxiliar nos estudosreferentes à interação vírus-vetor. O objetivodeste trabalho foi identificar as espéciesvetoras do PYMoV associadas à cultura dapimenta do reino, além de estudarhospedeiras multiplicadoras de cochonilhas.Foram identificadas as cochonilhas Ferrisiavirgata (Cockerell) e Planococcus minorMaskell em pimenteiras do reino. A batatainglesa, batata doce e inhame propiciaram acriação de P.minor, enquanto que a palmeiraChamaedorea elegans, rebenta pedra(Phyllanthus niruri L.) e gladíolo (Gladiolussp.) o de F. virgata. O PYMoV foi detectado,Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010por meio de PCR, em especrrne dascochonilhas F. virgata e P. minor que sealimentaram anteriormente em plantasinfectadas, entretanto observou-se atransmissão do vírus apenas pela F. virgata.Palavras-chave: Ferrisia virgata L., PCR,poda.ABSTRACTFerrisia virgata (Cockerell): vector ofPiper yellow mottle virus on blackpepper.Black pepper plants (Piper nigrum L.)can be infected by Cucumber mosaic virus(CMV) and Piperyellow mottle virus (PYMoV)et#tef causing major yield losses. Symptomscaused by those viruses are chlorosis,mottling, mosaic, vein discoloration, leafdistortion, stunting and reduced numbers ofberries per spike. CMV is transmiUed byaphids and PYMoV by mealybugs. There arereports of a mealybug, Peseudococcus elisaeassociated to black pepper plants showingsymptoms of viral diseases in the State ofPara, but there is no evidence wheather it isPYMoV virus vector or not. Speciesidentification is important for establishingstrategies for the control of diseases and tostudy the virus-vector interactions. The maingoal of this study was to identify the vectorspecies associated to PYMoV on blackS 957Ferrísía vírgata (Cockerell): vetora do Píper yellow mottle vírus da pimenteira do reino.pepper. Mealybus, Ferrisia virgata andPlenococcus minor were identified asPYMoV virus-vector in black pepper.Potatoes, sweet potatoes and yams enabledthe establishment of P. minor, while the palmChamaedorea e/egans, stone bust(Phy/lanthus niruri L.) and gladiolus leaves(Gladiolus sp.) are colonized by F virgata.PYMoV was detected by PCR in individuaismealybugs of F. virgata and P. minorpreviously fed on infected plants. However,virus transmission from pepper to pepperwas obtained only through F virgata.Keywords:Ferrisia virgata L., PCR,transmissionA pimenta-do-reino (Piper nigrum L.) é uma especiaria condimentar de grandeimportância para o comércio agrícola internacional, sendo o Vietnã o maior produtor eexportador, seguido da índia, Indonésia e Brasil. A produção brasileira de pimenta do reino,prevista para a safra 2009/2010, é de 35 mil toneladas, 90% produzidas no Pará, onde osmaiores polos produtores são Castanhal, Tomé-Açu e Baião. o setor gera cerca de 25 milempregos diretos e 100 mil indiretos. Durante a colheita, que dura de três a quatro meses,são mobilizadas 50 mil pessoas. Na última safra, a cultura gerou ao estado do Pará umareceita de US$ 90 milhões. De 1999 a 2008 foram US$ 783 milhões (Sampaio, 2009). Osestados do Espírito Santo, Bahia, Minas Gerais, Maranhão, Ceará e Paraíba são responsáveispor cerca de 10% da produção brasileira. A produtividade média, que já foi de 3 a 3,5 ton/ha,hoje é de 2,5 ton/ha devido, principalmente às doenças e dentre elas as viroses.No Brasil, já foram relatados os vírus Cucumber mosaic virus (CMV), Piper yellowmottle virus (PYMoV) e um isométrico ainda não identificado, sendo os dois primeirosverificados no estado do Pará. O CMV, pertencente ao gênero Cucumovirus, é transmitidopor mais de 60 espécies de pulgões de maneira não circulativa. Foi relatado causandodoenças em mais de 1.000 espécies de plantas, dentre elas, a pimenteira-do-reino, ondecausa sintomas de mosaico, deformação foliar, clorose de nervuras, definhamento da plantae dano na produção. Na década de 90 foram detectadas partículas baciliformes em plantasde pimenta-do-reino no Pará, causando os sintomas de deformação foliar, mosqueado,clareamento das nervuras, manchas cloróticas e redução da produção de frutos (Albuquerqueet aI., 1999). Posteriormente, foi diagnosticado como sendo de Piper yellow mottle virus(Brioso et ai., 2000). Há relatos de plantas com sintomas de viroses nas principais áreasprodutoras do Pará, Tomé-Açu, Santa Izabel do Pará, Acará, Mocajuba, São Francisco doPará, Peixe Boi, Altamira, Abaetetuba e Baião, agravando as perdas de produção da cultura.Na índia, Silva et aI. (2002) verificaram que este vírus é transmitido pela cochonilhaPlanacoccus citri e pelo percevejo de renda Coryfhucha ciliata e, segundo Bhat et aI.(2003), pela cochonilha Ferrísia virgata, por enxertia e mecanicamente. Já, no Brasil, Duarteet aI. (2000) verificaram que a cochonilha Pseudococcus elísae se encontrava associada àsplantas com sintomas de mosqueado. Mas nenhum teste de transmissão foi realizado paraconfirmá-Ia como vetora do PYMoV.Desse modo, o objetivo deste trabalho foi identificar as espécies vetoras do PYMoVassociadas à cultura da pimenta do reino.Os resultados obtidos darão subsídios à elaboração de estratégias de controle davirose de pimenta do reino bem como permitir estudos referentes à interação vírus-vetor.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 S 958Ferrisie vírgata (Cockerell): vetora do Píper yellaw mattle vírus da pimenteira do reino.MATERIAL E MÉTODOSCochonilhas foram coletadas do Banco Ativo de Germoplasma (BAG) e de lavourasde pimenta do reino no estado do Pará. Essas foram multiplicadas a partir de um espécimede cochonilha. Após colonização essas foram identificadas por taxonomista. Foramidentificadas as cochonilhas Ferrisia virgata (Cockerell) e Planoccocus minor Maskell. Pararealização do teste de transmissão do vírus foi preciso inicialmente estudar hospedeiraspromissoras para multiplicação das cochonilhas. Foram testadas diferentes hospedeiraspara a criação das cochonilhas. Para P. minor testou-se mudas de pimenta do reino emcasca de arroz queimada, mudas de helicônia, folhas destacadas de pimenta do reino ehelicônia, raiz de batata doce, inhame e tubérculo de batata inglesa; para F. virgata testou-sea multiplicação em tubérculo de batata, pimenta do reino, muda de palmeira, rebenta pedrae gladíolo. Após multiplicação das cochonilhas P.minor e F. virgata, essas foram colocadaspara alimentar (aquisição do vírus) em folha infectada destacada e em mudas infectadaspelo PYMoV, respectivamente, por 24 horas. Em seguida, dez espécimes de cochonilhasforam transferídas para cada muda de pimenta do reino das cultivares Apra e Kuthiravally decerca de um mês de idade e mantidas por 24 horas para permitir a transmissão do vírus.Para P. minor foram testadas a transmissão em 35 mudas e para F. vigata 8 mudas. Trêsmeses após foi feita a avaliação da transmissão por meio da sintomatologia e por teste dePCR utilizando primers específicos. Para o teste de PCR fez-se a extração de ácido nucléicoa partir de folhas novas, segundo o protocolo de Gibbs & Mackenzie (1997), modificado. Emseguida, fez-se o teste de PCR e para isso foram utilizados 3 11do ácido nucléico, 3 uL dotampão de reação 10X, 1,5 ~L de MgCI (25 mM), 0,25 ~L de dNTP (10 mM), 0,15 uL da TaqDNA Polimerase, 0,2511dos primers específicos para PYMoV e 16,6 uL de água ultra-pura. Areação consistirá de 30 ciclos de 94°C, 49,5 DCe 72 DC,com duração de um minuto além deuma extensão de 72°C por 10minutos. Fragmentos de DNA foram observados e fotografadossob luz UV após a corrida eletroforética em gel de agarose (1,0%) e coloração em GelRed.Foi feito o teste de PCR para PYMoV das cochonilhas F. virgata e P.minor da criaçãopara comprovação de estarem isentas do vírus. Também foi feito o teste de PCR a partir decochonilhas que se alimentaram por cerca de 24 horas em folha infectada pelo PYMoV paracomprovação da aquisição do PYMoV. O teste de PCR foi feito a partir de um espécime decochonilha.RESULTADOS E DISCUSSÃOPara P.minor a melhor hospedeira de criação testada foi a batata inglesa brotada eem seguida, o inhame e batata doce. A criação de P.minore F. virgata em mudas de pimentado reino é viável apenas nos períodos chuvosos nas condições de estufa em Belém-PAquando a temperatura é mais amena. No período do ano mais quente a população épraticamente eliminada nas condições de estufa. As plantas palmeira, quebra pedra e ogladíolo são ótimas multiplicadora da cochonilha F. virgata desde que condicionadas emambientes livre de sol direto e chuva.Não foi detectada a presença do PYMoV em cochonilhas da criação por meio doPCR, mas este foi detectado tanto em um espécime de F. virgata como P. minor apósalimentação por 24 horas em planta infectada, comprovando aquisição do vírus pelasHortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 S 959Ferrisia virgata (Cockerell): vetara do Piper yellow mattle virus da pimenteira do reino.cochonilhas e a alta sensibilidade da técnica para detecção. Entretanto, só foi comprovada atransmissão do PYMoV para mudas de pimenta do reino quando se testou a espécie F.virgata (Figura 1). Das oito tentativas de transmissão três foram positivas por PCR (Figura2). Em nenhuma das plantas inoculadas e mesmo nas positivas no PCR observou-se sintomasapós três meses de inoculação. Provavelmente, o aparecimento dos sintomas ocorre com odesenvolvimento das plantas e/ou nas suas progênies, pois sabe-se que os sintomas seagravam a medida que se multiplicam plantas de propagação vegetativa infectadas por vírus.Bhat et aI. (2003), também relataram a cochonilha Ferrisie virgata como transmissora doPYMoV na índia.Talvez a não transmissão do PYMoV pelo P. minor se deva ao fato do seu aparelhosugador ser cerca de 3 vezes maior que o seu comprimento. A manipulação pode estragar oestilete. Além, o tempo de inoculação, 24 horas, pode ser curto demais para a cochonilhaatingir o f1oema.Tem sido observado estas podem demorar mais tempo para atingir a fasefloemática. Os testes da transmissão continua, pois a P. minor parece ser a espéciepredominante na cultura de pimenta do reino.P.minor é uma praga importante de mais de 250 culturas pertencentes a cerca de 80famílias cultivadas na África, Austrália, Ásia e regiões Neárticas, Neotropicais e Orientais(Venette & Davis 2004). Entre as culturas atacadas e de maior expressão econômica pode-se citar a banana, os citros, o cacau, o café, o milho, a uva, a manga, a batata, a berinjela,algodão e a soja (Reddy & Seetharama 1997, Ut Jr. et aI. 1998, Reddy et aI. 1999, Santa-Cecília et aI. 2002, Venette & Davis 2004, Bastos et aI. 2007). E por isso merece ser maisestudada com relação a transmissão do PYMoV.AGRADECIM ENTOSAo CNPq e FINEP pelo apoio financeiro e bolsas.REFERÊNCIASALBUQUERQUE FC; TRINDADE DR; POLTRONIERI LS; DUARTE, ML R; BRIOSO PST;REZENDE JAM; KITAJIMA EW. 1999. Evidências preliminares da ocorrência do vírus domosqueado da pimenteira-do-reino (Piper yellow mottle virus - PYMoV) no Brasil. Anais ... In:CONGRESSO PAULISTADE FITOPATOLOGIA, XXII, 36. Anais ... Jaboticabal: UNESP. P.36.BASTOS CS;ALMEIDARP; VIDAL NETO FC;ARAÚJO GP.2007. Ocorrência de PlanococcusminorMaskell (Hemiptera: Pseudococcidae) em algodoeiro no Nordeste do Brasil. Neotropicalentomotoçie 36: 625-628.BHAT AI; DEVASAHAYAM S; SARMA YR; PANT RP 2003. Association of a Badnavirus inblack pepper (Piper nigrum L.) transmitted by mealbug. Current Science, 84, n.12, p.1547-1550,.BRIOSO PST; POZZER L; SILVA S; KITAJIMA EW; POLTRONIERI, LS; DUARTE MLR.2000. Amplificação de fragmento específico do PYMoV a partir de pimenta do reino. In:XXXIII Congresso Brasileiro de Fitopatologia, Anais ... Belém - PA. SBF: p. 438.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 S 960Ferrisia virgata (Cockerell): vetora do Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino.DUARTE MLR; ALBURQUEQUE FC, POLTRONIERI LS; TRINDADE DR; KITAJIMA EW;BRIOSO PST.Mosqueado amarelo da pimenta-do-reino. Belém: Embrapa Amazônia Oriental,2000, 20 p. (Embrapa Amazônia Oriental, Documentos, 62).GIBBS A; MACKENZIE A. 1997.A primer pair for amplifying part of the genome of ali potyviridsby RT-PCR. Journal ofvirology methods 63: 9-16.LlT JR IL, LlT CM; CALlLUNG VJ. 1998. The mealybugs (Pseudococcidae, Coccoidea,Hemiptera) in the Philippines. Philippine Entomology 12: 29-41.REDDY KB; SEETHARAMA HG. 1997. Integrated management of mealybugs in coffee. IndianCoffee 61: 26-28.REDDY KB; BHAT PK; NAIDU R.1999. Suppression of mealybugs and green scale infestingcoffee with natural enemies in Karnataka. Pest Management and Economic Zoology 5: 119-121.SAMPAIO L. Comunidade Internacional debaterá a produção de pimenta do reino. Disponívelem http://www.sagrLpa.gov.brl?q=node/292. acessado em 03 de maio de 2010.SANTA-CECíLIA, LVC, REIS PR; JC. 2002. Souza. Sobre a nomenclatura das espécies decochonilhas-farinhentas do cafeeiro nos estados de Minas Gerais e Espírito Santo. NeotropicalEntomology 31: 333-334.SILVA DPP DE; JONES P; SHAW MW. 2002. Identification and transmission of Piper yellowmottle virus and Cucumber mosaic virus infecting black pepper (Piper nigrum) in Sri Lanka,Plant Pathology 51: 537-545.VENNETE RC; DAVIS EE. 2004. Mini risk assessment passionvine mealybug: Planococcusminor (Malkell) [Pseudococcidae: Hemiptera]. Saint Paul, University of Minnesota, 30p.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CD Rom), julho 2010 S 961Ferrísía vírgata (Cockerell): vetara do Píper yellow mottle vírus da pimenteira do reino.Figura 1. Ferrisia virgata (Cockerell), vetora de Piper yellow mottle virus em pimentaira do reino. (Ferrisiavirgata (Cockerell), vector of Piper yellow mottle virus on black pepper).M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11Figura 2. Produtos do PCR de PYMoV. M. Marcador plus 1 kb ladder; 1 e 10. Controle positivo PYMoV; 2.Controle sadio; 3-9 e 11. Transmissão com Ferrisia virgata. (PCR products of PYMoV. M. Plus 1kb ladder; 1and 10. Positive control, Negative contrai, 3-9 and 11. Transmission with Ferrisia virgata.). Belém-PA EmbrapaAmazônia Oriental, 2010.Hortic. bras., v. 28, n. 2 (Suplemento - CO Rom), julho 2010 S 962

Ferrisia virgata (Cockerell): vetora do Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino.

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Ferrisia virgata (Cockerell): vetora do Piper yellow mottle virus da pimenteira do reino.

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