CORDEIRO, I. M. C. C.

LAMEIRA, O. A.

LOPES, S. da C.

REIS, I. N. R. de S.

REIS, L. R. S.

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EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DE CINETINA PARA OBTENÇÃO DEBROTAÇÕES EM SEGMENTOS NODAIS DE PARICÁ(Schizolobiumamazonicum Huber Ex Ducke)"Iracema Maria Castro Coimbra Cordeiro", Osmar Alves Lamelra", Sebastião da Cunhat.opes", Lana Roberla Sousa Reis5, lulla Naiff Rabelo de Souza Reis5Palavras-chave:Micropropagação, Cinetina, Regulador de Crescimento, Cultura de TecidosINTRODUÇÃOA cultura de tecidos além de ser utilizada para a propagação massal de plantas, apresenta-se como uma ferramenta biotecnológica no auxilio do melhoramento florestal via engenhariagenética. O sucesso deste programa depende das técnicas de cultura de células, tecidos ouórgãos (Ferreira et ai., 1998), todavia é necessário estabelecer um protocolo para oestabelecimento da cultura.Grande parte do sucesso da micropropagação depende dos meios nutritivos utilizados nacultura. Estes meios baseiam-se nas exigências das plantas quanto aos nutrientes minerais,com algumas modificações que fornecem as substâncias essenciais, e controlam em grandeparte o padrão de desenvolvimento in vitro.As citocininas, são reguladores que participam de um grande número de processosfisiológicos que promovem a maturação dos cloroplastos, retardam a senescência dasfolhas e anulam a dominância apical, porém, deve-se fornecer concentrações variáveisdependendo da necessidade da espécie que se deseja multiplicar(Garttapaglia e Machado,1998). Dentre estas a cinetina (KIN) tem sido eficiente na promoção de proliferação departes aéreas quando utilizada isoladamente ou em interação com uma auxina.Este trabalho objetivou avaliar o efeito de diferentes concentrações de cinetina na induçãode brotações de paricá a partir de explantes obtidos de plântulas assépticas germinadas invitro, com a finalidade de micropropagar a espécie.'Parte da Dissertação de Mestrado do primeiro autor, financiada com recursos da Tramontina SelémS.A./Embrapa Amazônia Oriental.2Engenheira Florestal, MsC. cordeiro@canaI13.com.br3Engenheiro Agrônomo, Dr. Pesquisador da Embrapa Amazônia Oriental, Caixa Postal 48 - CEP 66017- 970-Selém (PA). osmar@cpalu.embrapa.br4Engenheiro Agrônomo, MSc, Bolsista do CNPq5Graduanda Agronomia, Universidade Federal Rural da AmazôniaMATERIAL E MÉTODOSO trabalho foi desenvolvido no Laboratório de Recursos Genéticos e Biotecnologia daEmbrapa Amazônia Oriental. Foram utilizados como fonte de explante segmentos nodais deplântulas produzidas in vitro.Os explantes foram cultivados em meio de cultura MS (Murashige e Skoog, 1962) com aconcentração de nitrato de amônia reduzido a Y4, solidificado com ágar a 6 mg/I esuplementado com O; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0 mg/L de KIN (cinetina), acrescido de 30g/Lsacarose e 0,1% de ácido cítrico. O pH dos meios de cultura foram ajustados para 5,8.Tubos de ensaio de 20 x 150 mm contendo 15ml de meio de cultura foram autoclavados à121°C por 15 minutos. Em seguida, os explantes medindo 10mm de comprimento foraminoculados em câmara de fluxo laminar, em condições assépticas. A cultura foi mantida emsala de crescimento, sob condições 26°C ~ 2°C, fotoperíodo de 16 h de luz e irradiância de25 urnol.rn".s -1 .O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado com seis tratamentos equatro repetições sendo cada unidade experimental constituída de cinco tubos com umexplante em cada.A coleta dos dados foi efetuada no décimo quinto dia do cultivo com a contagem de númeroe comprimento de brotações. A análise estatística foi feita através da análise de variação eteste de regressão. Para variável número de brotos os dados foram transformados para,JO,5 + x e os dados comprimento dos brotos não sofreram transformação.RESULTADOS E DISCUSSÃOA análise de variância do número e comprimento de brotações, encontra-se na Tabela 1.Os resultados mostram haver diferenças significativas ao nivel de 5% de probabilidade, paraas duas variáveis em relação às concentrações de cinetina utilizadas no experimento.Embora tenha ocorrido diferença significativa no número de brotos formados, o tratamentomais eficiente (2 mq.L") apresentou apenas uma média de 1,18 broto por explante.Tabela 1 - Resumo da análise de variância para o número e comprimento de brotações deparicá em função do efeito de concentrações de KIN. Embrapa AmazôniaOriental, Belém - PA. 2002.G.L Quadrados Médios FCausas da N° Comp. N° Comp. N° Comp.Variação De brotos de brotos de brotos" de brotos de brotos de brotos(mg)----------, ..Conc. KIN 5 5 0,23677734 0,63135914 1,85* 4,52**Resíduo 114 99 0,12777902 0,15219505CV(%) 31,63 51,93Média 1,13 0,62* e ** Significativos a 5 e 1% de probabilidade, respectivamente, pelo teste F."Dados transformados em ,10,5 + xA linha de regressão mostrou tendência linear crescente com o aumento da concentraçãode KIN no meio de cultura, indicando que provavelmente em concentrações maiores poderiaapresentar melhores resultados. Porém, verifica-se alta amplitude de variação no número debrotos por explante. Este fato muito provavelmente está relacionado a fatores genéticos,uma vez que cada explante apresenta características únicas e as necessidades para cultivoin vitro também tendem a ser únicas (Figura 1). Deve-se ressaltar que a capacidade deregeneração e crescimento in vitro parece estar associada não apenas ao genótipo mastambém a atividade fisiológica na planta matriz, sob o controle de diversos fatoresendógenos e ambientais (Izquierdo e Lopez ,1991).1,2 ,-------s iiIi 1,0 r~ °8j-~----- -------~ ' .e 0,61 ..----~ 0,4 t--- +~ 0,2 t---- .~ 0,0 +1 ----,-------r---.---,----,------,------,0,0 0,5++ +y - o 1498x + o 5373R2 = ° 4374•1,0 1,5 2,0 2,5 3,0Concentração de KIN (mg.L·1)Figura 1 - Efeito de diferentes concentrações (mq.L") de KIN no número médio debrotações de paricá induzidos em meio MS. Embrapa Amazônia Oriental,Belém - PA. 2002.Barve e Mehta (1993) trabalhando com este mesmo regulador em Commiphora wightii(mirra) relataram que em concentrações acima (18 ~M) altos índices de brotações foramobtidos. Lameira (1997) em seu estudo com Cordia verbenácea L. (erva-baleeira), arbustoperene, verificou que a KIN a 5 urnol associado com ü.üturnol de ANA foi mais favorável amultiplicação in vitro quanto ao número de brotações.De acordo com Pierik (1990) altas concentrações de citocininas (1 a 10 mg L-1) no meio decultura podem induzir a formação de brotos adventícios, porém normalmente oenraizamento é inibido.A curva de regressão para comprimento das brotações em relação às concentraçõestestadas, encontra-se na Figura 2. Nota-se que a curva indica um comportamentoascendente até o ponto máximo atingido com a concentração de 2,0 rnq.L". Pode-seobservar ainda, que o menor tamanho das brotações ocorre no tratamento com 1,0 rnq.L"deste regulador de crescimento. Usando 5 ~M de KIN no meio WPM, Oltramari et aI (2002)obtiveram melhor média de comprimento das brotações com a espécie Acca sellowiana(Berg) (goiabeira serrana).0,8,----------------------Ê 0,7 +!------------~.~06~o ' iÕ 0.5-1-1---~ 0,4 +-- ------"C 03 +' -----_C. ' +E 0,2 r-----------..<3 0,1+1---0,0-~-------,----~0,0• • •y -0,04 14x' + 0,2146x + 0,T97õR? tl,33550,5 1,0 1,5 2,0Cone. do regulador (mg)2,5 3,0Figura 2 - Efeito de diferentes concentrações (rnq.L") de KIN no comprimento de brotos deparicá induzidos em meio MS modificado. Embrapa Amazônia Oriental, Belém -PA.2002.O aparecimento das brotações ocorreu após 6 dias do inicio do cultivo. Com vinte dias decultivo, 86 % dos explantes apresentavam brotações. Durante o período de três semanas decultivo foi observada a presença de calos friáveis, de lenticelas e o início de oxidação nosexplantes (Figura 3A e 3B), sendo necessário à transferência dos brotos para novo meio decultura.Figura 3 - Brotações de paricá a partir de segmentos nodais em meio MS modificadosuplementado com KIN. A - brotação com presença de calo e lenticelas; B -brotação com a presença de calos e início de oxidação na base do explante.Embrapa Amazônia Oriental, Belém - PA. 2002.CONCLUSÕESa) A concentração de 2 mç.L' do regulador de crescimento de KIN é a mais eficiente namultiplicação de brotos de paricá.b) O comprimento médio de brotos de paricá apresenta comportamento ascendenteatingindo seu ponto máximo com a concentração de 2 rnq.L" de KIN.REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASBARVE, D.M. e MEHTA, A.R. Clonal propagation of nature elite tree of Commiphora wightii.Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Dordrecht, v. 35, p.237-244. 1993.FERRE IRA, M. E., CALDAS, L. S., PEREIRA, E. A Aplicações da cultura de tecidos nomelhoramento de plantas. In: TORRES, A.C., CALDAS, L.N., BUSO, J. A (Eds.). Cultura deTecidos e transformação Genética de Plantas, Brasília: Embrapa-SPI/Embrapa-CNPH,1998. p.21-43.GRATTAPAGLlA, D., MACHADO, M. A Micropropagação, In : TORRES, A C., CALDAS,BUSO. J. A (Eds). Cultura de Tecidos e Transformação Genética de Plantas, Brasília:EMBRAPA-SPI/Embrapa_CNPH, 1998. p183-260.IZQUIERDO, J. A, LOPEZ F., Y. Análisis e interpretación estadística de Ia experimentaciónin vitro In: Roca, W. M.; Mroginski, L. A. Cultivo de Tejidos en Ia Agricultura:Fundamentos e Aplicaciones. Cali: CIAT. p. 375-399, 1991.LAMEIRA, O. A. Propagação in vitro e in vivo, dinâmica de crescimento de células,nutrição e identificação de flavonóides em erva-baleeira (Cordia verbenácea L.).Lavras:UFLA, 1997. 88p. (Tese de Doutorado em Fitotecnia).MURASHIGE, T. SKOOG, F. A. A revised medium for rapid growth and bioassays withtabaco tissue cultures. Physiologia Plantarum, v.15, p.473-497, 1962.OLTRAMARI, A.C., DAL VESCO, L.L., PEDROTTI E.L., DUCROQUET, J.P.H.J., NODARI,R.O., GUERRA, M.P., Protocolo de micropropagação da goiabeira serrana (Accasellowiana (Berg) Burret). UFSC - Departamento de Fitotecnia/Centro de ciênciasagrárias(CCA).. Florianópolis-SC2002.p..61-68. (Resumo internet)PIERIK, R.L.M. Cultivo in vitro de Ias plantas superiores. Tradução por Luis AyerbeMateo-Sagasta. 3a ed. Madrid: EDICIONES Mundi-Prensa, 1990. 326p. Capo12, Traduçãode: In vitro culture of higer plants.

Efeito da concentração de cinetina para obtenção de brotações em segmentos nodais de paricá (Schizolobium amazonicum Huber Ex Ducke).

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