BROWN, G. G.

BUSCH, E. F.

SCHUHLI, G. S. e

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Comparação entre os métodos “salting out” e CTAB na extração de DNA de minhocas Eliza Fabíola Busch Mestranda em Ciência do Solo, Universidade Federal do Paraná George Gardner Brown Engenheiro-agrônomo, Doutor, Pesquisador da Embrapa Florestas  george.brown@embrapa.br Guilherme Schnell e Schühli  Biólogo, Doutor, Pesquisador da Embrapa Florestas, guilherme.schuhli@embrapa.br Diversas técnicas de biologia molecular estão disponíveis para a avaliação da diversidade genética. A caracterização dessa diversidade pode ser feita por meio de técnicas moleculares que envolvem a avaliação de diferentes níveis de polimorfismos no DNA. Esta avaliação depende do processo de extração de DNA. No processo de extração considera-se importante não só a obtenção eficiente da maior quantidade de DNA, mas também a obtenção da maior avaliar qualidade de DNA genômico. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo dois protocolos de extração, “salting out” (MILLER et al., 1988) e CTAB, brometo de cetil-trimetilamônio (DOYLE & DOYLE, 1990) considerando sua eficiência na extração de DNA de minhocas. Para isto foram selecionados quatro exemplares de Amynthas spp. Destes exemplares foram extraídos pedaços de seu tecido muscular medindo aproximadamente 0,4 cm x 0,4 cm. Estas amostras foram submetidas a ambos os protocolos de extração e posteriormente a uma PCR com os primers HCO2198 e LCO1490 para amplificação de um fragmento de cerca de 640 pb como prova de conceito. A concentração do DNA foi avaliada por espectrofotômetro e a integridade das bandas amplificadas foi avaliada em gel de agarose a 1,5 %. A concentração média de DNA pelo protocolo “salting out” foi de 187,5 ng/ul, e com CTAB 584 ng/ul. Isto nos sugere maior eficiência em quantidade de DNA do protocolo CTAB. Quando estas amostras foram submetidas ao PCR, o protocolo CTAB sobressaiu-se na qualidade dos produtos amplificados. Temos como conclusões que, em relação ao processo de “salting out”, o protocolo de CTAB é mais conveniente para imediata extração de DNA de minhocas. Palavras-chave: CTAB; oligochaetas; PCR. Apoio/financiamento: CAPES, CNPq.  Anais do   Evento deIniciação Científica da Embrapa FlorestasXIIEvinci 26 e 30 de julho de 2013Colombo, PR, Brasil Documentos 253ISSN 1980-3958

Comparação entre os métodos "salting out" e CTAB na extração de DNA de minhocas.

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