CARON, L.

KLEIN, C. S.

MORES, M. A. Z.

MORES, N.

OLIVEIRA FILHO, J. X. de

REBELATTO, R.

SEVERLIN, E. C.

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   21  7ª Jornada de Iniciação Científica - JINC 24 de outubro de 2013  Concórdia,SC MYCOPLASMA HYORHINIS – DETECÇÃO POR PCR EM PULMÕES DE SUÍNOS COM DOENÇA RESPIRATÓRIA  Emanueli C. Severlin1*; Luizinho Caron2; Nelson Mores2; Raquel Rebelatto2;  Marcos A. Z. Mores2; João X. de Oliveira Filho3 e Cátia S. Klein2 ¹Graduanda em Ciências Biológicas pela Universidade do Contestado, Campus Concórdia, estagiária da Embrapa Suínos e Aves, Bolsista CNPQ/PIBIC, e-mail: manu.servelin@hotmail.com ²Embrapa Suínos e Aves 3PPG Ciências Veterinárias, Universidade Federal do Rio Grande do Sul  Palavras-chave: Mycoplasma hyorhinis, PCR, suíno.  INTRODUÇÃO O Brasil se destaca atualmente como quinto maior produtor mundial de suínos. Porém, a industrialização da suinocultura propiciou o aumento da incidência das doenças da produção, a exemplo das doenças respiratórias. Estas estão entre as mais prevalentes na suinocultura industrial e apresentam etiologia multifatorial resultante da interação de dois ou mais agentes infecciosos, além da influência de fatores ambientais e de manejo (5). Agentes virais e micoplasmas normalmente atuam como agentes primários, baixando os mecanismos de defesa do hospedeiro para os invasores secundários, geralmente bactérias oportunistas (7). Entre os agentes bacterianos, o Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) e a Pasteurella multocida (P. multocida) são os mais comumente encontrados em lesões pulmonares (4), embora outras bactérias também possam ser isoladas, dentre elas, o Mycoplasma hyorhinis (M. hyorhinis) (2). O M. hyorhinis faz parte da microbiota normal do trato respiratório superior de suínos e, em algumas condições, pode causar doença sistêmica ou subclínica. Porém, pouco se sabe sobre a epidemiologia, o papel nas doenças respiratórias e o mecanismo utilizado por este agente para causar a doença (6). O objetivo deste trabalho foi a detecção do M. hyorhinis, por PCR, em pulmões de suínos com doença respiratória.  MATERIAIS E MÉTODOS Foram analisados 181 fragmentos de pulmão de suínos de terminação com doença respiratória. Os fragmentos foram obtidos entre 2011 e 2012, em granjas (G) e frigoríficos (F) de seis estados brasileiros: RS (21G/22F), SC (13G/18F), PR (10G/16F), MT (13G/20F), MS (11G/14F) e GO (5G/18F). Os animais das granjas foram eutanasiados por eletrocussão e necropsiados para colheita dos fragmentos. Nos frigoríficos as amostras foram colhidas na sala de evisceração. Amostras das lesões foram colhidas em formol e encaminhadas para análise de imunohistoquímica para M. hyopneumoniae. Amostras refrigeradas foram encaminhadas para análises laboratoriais de isolamento de P. multocida, conforme Quinn et al. (3) e para extração de DNA e PCR para detecção de M. hyorhinis. O DNA foi extraído utilizando Kit comercial DNeasy® Blood & Tissue (Qiagen).O PCR foi realizado conforme descrito por Stakenborg et al. (8), mas sem a utilização dos primers para detecção de M. hyopneumoniae e M.flocculare, ou seja, utilizando somente o primer para detecção de M. hyorhinis (GenBank acesso nº M24658) e o primer reverse (região conservada do gene 16S rRNA), resultando em uma amplificação de 1129pb.  RESULTADOS E DISCUSSÕES Das 181 amostras de DNA analisadas, 26,5% (48) foram positivas (P) para M. hyorhinis. A distribuição das amostras positivas, nos diferentes estados, podes ser observada na tabela 1. O M. hyorhinis já foi isolado do trato respiratório de suínos saudáveis e doentes, entretanto, as maiores taxas de isolamento foram encontradas em animais doentes (6,7). Estudos mais recentes têm utilizado PCR para detectar M.hyorhinis em amostras de campo com resultados semelhantes aos encontrados no teste de isolamento. Em uma pesquisa de M.hyorhinis por PCR em pulmões de suínos de abate, Caron et al. (1) encontraram 13% e 2% de positividade para suínos com e sem lesões,  respectivamente. Neste estudo testamos apenas pulmões com lesão e encontramos 26,5% positivos por PCR, o que se assemelha aos estudos citados.  Das amostras analisadas, 41,1% (75/181) tiveram isolamento positivo para P. multocida e 64% (116/181) tiveram imunohistoquímica positiva para M. hyopneumoniae. Ainda, 45,8% (22/48) das amostras positivas por PCR para M. hyorhinis, também tiveram isolamento positivo para P. multocida, sendo: RS (9/22), SC (6/22), PR (3/22), MT (1/22), MS (3/22) e GO (0/22) e 77% (37/48) tiveram imunohistoquímica positiva para M. hyopneumoniae, sendo: RS (11/37), SC (11/37), PR (5/37), MT (6/37), MS (4/37) e GO (0/37). Das 48 amostras positivas para o M. hyorhinis, 21 (43,8%) foram positivas para os três agentes    22  7ª Jornada de Iniciação Científica - JINC 24 de outubro de 2013  Concórdia,SC pesquisados (M.hyorhinis, M. hyopneumoniae e P. multocida), sendo: RS (8/181), SC (6/181), PR (3/181), MT (1/181), MS (3/181) e GO (0/181). Conforme Sorensen et al. (5) infecções com M. hyorhinis e outros patógenos respiratórios são comuns em casos de pneumonia em suíno, sendo que o M. hyorhinis normalmente atua como agente secundário. Existem evidências de que diferenças de virulência entre as diversas cepas de M.hyorhinis, a resposta imune do hospedeiro e outras infecções simultâneas participariam desse processo (6). Assim, estudos para melhor caracterizar a participação deste agente no complexo de doenças respiratórias de suínos (CDRS) são necessários.  CONCLUSÕES O M.hyorhinis foi detectado, por PCR, em 26,5% dos pulmões analisados, obtidos de suínos com doença respiratória e em 43,8% desses, também, havia a presença de M. hyopneumoniae e P. multocida. Porém, até o momento, ainda não temos como avaliar se o M. hyorhinis tem algum envolvimento com as lesões pulmonares e com o quadro respiratório dos suínos doentes.  REFERÊNCIAS 1. Caron, L.F., Joineau, M.E.G., Santin, E., Richartz, R.R.T.B., Patricio, M. A. C., Soccol, V.T. Seroprevalence of H3N2 influenza A virus in pigs from Paraná (South Brazil): Interference of the animal management and climatic conditions. Virus Reviews and research, v.15, p.63-73.2010. 2. Hansen, M.S., Pors, S.E., Jensen, H.E., Bille-Hansen, V., Bisgaard, M., Flachs, E.M., Nielsen, O.L. An investigation of the pathology and pathogens associated with porcine respiratory disease complex in Denmark.Journal of Comparative Pathology, v.143, p.120-131, 2010. 3. Quinn P.J. et al.Clinical Veterinary Microbiology. Mosby-Year Book, 648 p. 1998. 4. Morés M.A.Z. Anatomopatologia e bacteriologia de lesões pulmonares responsáveis por condenações de carcaças de suínos nos matadouros. 77f. Curitiba, PR. Dissertação (Mestrado em Ciências Veterinárias) – Programa de Pós-graduação em CiênciasVeterinárias, Universidade Federal do Paraná. 2006. 5. Sorensen V., Jorsal S.E. &Mousing. Diseases of the Respiratory System. In: Straw B., Zimmerman J., Allaire S. & Taylor D.Diseases of Swine. 9 ed. Ames: Blackwell Publishing, p.149-177. 2006. 6. Rovira, A., Clavifo, M.J., Oliveira, S. Infecção por Mycoplasmahyorhinis em suínos. Acta ScientiaeVeterinariae, v.38, supl. 1, p.9-15, 2010. 7. Thacker, E.L. Mycoplasmal diseases. In: Straw, B.E. et al. Diseases of Swine. 9. Ed. Australia: Blackewll Publishing Ltda. 2006. Cap 42. P. 701-218, 2006. 8. Stakenborg T, Vicca J, et al. A multiplex PCR to identify porcine mycoplasmas present in broth cultures. Veterinary Research Communications, v.30 (3), p. 239-47, 2006.  Tabela 1. Distribuição de positivos por PCR para M.hyorhinis Estados Amostras Positivas (%) Nº Positivos Estado / Nº Fragmentos Estados RS 28 12 /43 SC 38,7 12 / 31 PR 19,2 5 / 26 MT 30,3 10 /33 MS 20,0 5 / 25 GO 17,4 4 / 23               

Mycoplasma hyorhinis: detecção por PCR em pulmões de suínos com doença respiratória.

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