CARVALHO, J. O.

CUNHA, A. M.

DIÓGENES, M. N.

DODE, M. A. N.

MARQUES SILVA, B. D.

MARTINS, C. F.

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33)3 soS 4:J-~ .A osmolaridade do diluidor modifica a porcentagem de éilc:r::a·E;~~~~iliIil.~.IIII.Ii.jjii~~--::"':......J-""""-lResumos. XXVII Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Praia do Forte, 2013 ."SBTE 003 Fisiologia da Reprodução do Macho e Tecnologia do SêmenrA.F.C. de Andradel; M. Andrade Torres'; G.M. Ra\"a::-';:3...:~>nn;;;-:"'<:"'itjj"'~~~é!~~~!!~~~ ~":"..:.....JSanttanna1JIorettl';r.D.~ap(h~J.A~J.l>eHaquá-;·M.À.-Âvarenga; .I . rIFaculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Pirassununga, SP, Brasil; ?Faculdadede Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP, Brasil.Palavras-chave: Osmolaridade; hiperativação; esperrnatozoidesA hiperativação deve ter seu início em lugar e momento apropriado para que o espermatozoide consiga realizar a fertilização. Sabe-seque o padrão de movimento de um espermatozoide hiperativo é representado pelo aumento do ALH (amplitude do deslocamentolateral da cabeça) e do VCL (velocidade curvilinear). As alterações de osmolaridade afetam em maior proporção a motilidade,quando comparada a outros parâmetros de qualidade e viabilidade esperrnática (Yest et al., 2010, Anim Reprod Sei, 119,265-74).Assim, o presente experimento objetivou verificar se diferentes condições de osmolaridade alteram o percentual de espermatozoideshiperativos. Foram realizadas três coletas de sêmen de três cachaços (n=9). As amostras foram diluídas em meios com osmolaridadesdiferentes, a saber; 360 e 404 mOsm (Botupharma", Botucatu-SP, Brasil), que diferiram entre si alterando-se a diluição, 1,1 L e 1 Lde água ultrapura, respectivamente. O sêmen in natura foi misturado aos dilui dores até a obtenção da concentração de 30 x 106sptzJmL. As análises foram realizadas aos 90 minutos, 24 e 48 horas após a diluição. Avaliaram-se alíquotas de 5 J.1Lsob lâmina elamínula, pelo sistema de análise computadorizada do sêmen (SCA-Microptic®, Microptic S.L., Barcelona, Espanha) com o ajuste daferramenta EditlSort para os valores de ALH > 3,5 J.1me VCL > 97 um/s (Schimidt, 2004, Reproduction, 128, 171-79), para assimavaliar a porcentagem de espermatozoides hiperativos. O delineamento experimental foi em blocos casualizados adicionado do fatormedidas repetidas no tempo. Os dados foram analisados pelo programa SAS (SAS Institute Inc., 2010), submetidos à análise devariância e as interações determinadas pelo teste de Greenhouse-Geisser. Não houve interação tempo x tratamento (p>0,05) para avariável analisada. Entretanto, houve um efeito (p=0,0582) de tratamento sob a hiperativação espermática, com percentuais de 16,66± 2,44 e 24,79 ± 3,46 para os tratamentos 360 e 404 mOsm , respectivamente. Esses resultados nos levam a acreditar que diluentescom osmolaridade de 404 mOsm tendem a resultar em maior porcentagem de espermatozoides hiperativos, no entanto, experimentosfuturos com maior número de animais e repetições são necessários para confirmar essa hipótese.Agradecimentos: À FAPESP processo 2011/23484-8 e a Botupharma"SBTE 004 Fisiologia da Reprodução do Macho e Tecnologia do SêmenEfeito da refrigeração e criopreservação na viabilidade de espermatozoides do ejaculado e do epidídimo detouros GirA.M. Cunhal; J.O. Carvalho"; M.N. Diógenes'; C.F. Martins': B.D. Marques Silva"; M.A.N. Dode4JUniversidade de Brasilia, Brasllia, DF, Brasil; 2Universidade de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil; 3EMBRAPACerrados/CTZL, Brasilia, DF, Brasil; 4EMBRAPA Cenargen, Brasília, DF, Brasil.Palavras-chave: Bovino; epidídimo; esperrnatozoideA utilização de espermatozoides epididimários em diferentes biotécnicas reprodutivas é uma ferramenta importante para amultiplicação de material genético de animais que morrem subitamente e/ou com incapacidade reprodutiva adquirida. Entretanto,para que se possam estabelecer procedimentos mais adequados para utilizar espermatozoides do epidídimo, é necessário conhecê-Iosquanto ao seu comportamento e viabilidade após situações de estresse como a refrigeração e criopreservação. Para avaliar e compararas caracteristicas de viabilidade espermática de espermatozoides epididimários e do ejaculado, foram utilizados sete touros Gir. Osêmen do ejaculado (EJ) foi coletado através de eletroestimulação. Após a coleta do ejaculado, os animais foram castrados e ostestículos mantidos por duas horas a 5°C, simulando o transporte até o laboratório. Posteriormente, os espermatozoides da cauda doepidídimo foram coletados pelo método de extravasamento (EP). Em ambos os grupos os espermatozoides foram diluídos em meiotris-gema, envasados e refrigerados por quatro horas a 5°C e, então criopreservados. Após a refrigeração e a descongelação, foramretiradas amostras para avaliação da motilidade total e progressiva em sistema computadorizado (CASA), integridade de membranaplasmática, avaliada com iodeto de propídeo (IP) e diacetato de 6-carboxifluoresceína (C-FDA) e a integridade acrossomal pelatécnica Peanut agglutinin (pNA conjugada ao FITC). Os dados foram analisados por ANOV A e teste de Tukey (P<0,05). Após arefrigeração os espermatozoides do epidídimo apresentaram maior motilidade total, motilidade progressiva e integridade acrossomaldo que os do ejaculado sendo 58,9±21,2% e 79,5±5,9%; 29,6±13,9% e 46,1±7,2%; 48,9±20,6% e 69,4±7,3%, respectivamente.Entretanto, a percentagem de células com membrana plasmática íntegra foi semelhante entre os dois grupos (EJ=56,4±16,6% e EP=69,7±8,8%). Após a descongelação, não foi encontrada diferença, em nenhuma das caracteristicas estudadas, motilidade total,motilidade progressiva, integridade acrossomal e integridade de membrana plasmática, sendo 48,4±9,8% e 54,2±1O,7%, 26,3±8,8% eJ5,4±ll,3%, 41,3±12,9% e 46,8±7,6% e 41,6±11,9% e 50,8±9,0%, para o EJ e EP, respectivamente. Os resultados indicam queespermatozoides epididimários são mais resistentes à refrigeração do que os do EJ, mas se comportam de maneira semelhante quandosubmetidos à criopreservação. Entretanto, mais estudos são necessários para avaliar outras caracteristicas, tais como longevidade,capacitação, resposta aos processos de seleção espermática para a FIV, capacidade de ligação à zona pelúcida, entre outros.251

Efeito da refrigeração e criopreservação na viabilidade de espermatozoides do ejaculado e do epidídimo de touros Gir.

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