DONINI, L. P.

DUTRA, L. F.

MAYER, K. C. de A.

OLIVEIRA, R. J. P. de

SILVA, S. D. dos A. e

ZACARIAS, F. M.

OLIVEIRA, R. J. P. de.

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Comportamento in vitro durante a multiplicação de variedades de cana-de-açúcar de ciclo precoce e médio-tardio.

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COMPORTAMENTO IN VITRO DURANTE A MULTIPLICAÇÃO DE VARIEDADES DE CANA-DE-AÇÚCAR DE CICLO PRECOCE E MÉDIO-TARDIO Lorena Pastorini Donini1, Kerlley Cristina de Assis Mayer 2, Fernanda Medeiros Zacarias3; Rérinton Joabél Pires de Oliveira4; Sérgio Delmar dos Anjos e Silva5; Leonardo Ferreira Dutra6INTRODUÇÃOA cultura da cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.) tem grande importância econômica na  agricultura  no  Brasil  e  agora  mais  ainda  com  a  utilização  do  etanol  em  escala  mundial (OLIVEIRA et al., 2010), sendo o Brasil o maior produtor mundial (HSIE et al., 2008). A crescente preocupação  com as  mudanças  climáticas  e  o  aumento  da  demanda  por  açúcar,  combustíveis renováveis (etanol) e seus derivados, como o plástico verde, proporcionou aumento considerável na produção de cana-de-açúcar (VERÍSSIMO, 2012).A  propagação  convencional  desta  espécie  acontece  a  partir  de  segmentos  de  colmos provenientes de plantas do campo, após o 1° ou 2° ano de plantio. Porém, novas variedades estão continuamente  sendo  desenvolvidas  e  sua  disponibilização  pode  ser  acelerada  por  meio  da biotecnologia, via micropropagação (OLIVEIRA et al., 2010).Para a cultura da cana-de-açúcar, o explante inicial  a ser micropropagado é o meristema apical,  que depois de isolado e inoculado em meio de cultura apropriado,  desenvolve-se dando origem as plântulas que serão multiplicadas, enraizadas e aclimatizadas. Esta técnica de propagação é  considerada  uma  alternativa  vantajosa  para  a  multiplicação  de  diversas  variedades,  devido  à economia de tempo em relação às técnicas convencionais, além da obtenção de mudas de excelente qualidade fitossanitária e geneticamente idênticas ao material de origem (LEE, 1987; SARWAR & SIDDIQUI, 2004; VIEIRA et al., 2009).Este trabalho teve como objetivo avaliar o comportamento de variedades de ciclo precoce e médio-tardio indicadas para o Rio Grande do Sul durante a multiplicação in vitro.1 Drª. Bolsista de Desenvolvimento Tecnológico Industrial do CNPq - Nível 1. E-mail: lorenadonini@yahoo.com.br2 Msc. Bolsista de Desenvolvimento Tecnológico Industrial do CNPq - Nível 3. E-mail: kerlleyca@hotmail.com3 Acadêmica do Curso de Gestão Ambiental/ UFPel. E-mail: fernanda_zacarias@hotmail.com4 Eng. Agr. Msc., Doutorando PPGSPAF/FAEM/UFPel. E-mail: rerinton@yahoo.com.br5 Eng. Agr. Dr. Pesquisador Embrapa Clima Temperado. E-mail: sergio.anjos@cpact.embrapa.br 6 Eng. Agr. Dr. Pesquisador Embrapa Clima Temperado. E-mail: Leonardo.dutra@cpact.embrapa.br MATERIAL E MÉTODOSComo fonte de explantes foram utilizadas plantas de cana-de-açúcar de variedades de ciclo precoce e médio-tardio pré-estabelecidas in vitro a partir de meristema apicais (Tabela 1). Tabela 1.  Variedades  de ciclo precoce e  médio-tardio de cana-de-açúcar  multiplicadas  in vitro. Embrapa Clima Temperado, Pelotas, RS, 2012.Variedades precoces Variedades médio-tardiosRB855156 RB857515RB925345 RB925268RB966928 RB935744RB935581 RB008347RB965911 RB987935RB975944 RB987932RB996961Os explantes foram inoculados em meio de cultura para multiplicação de cana-de-açúcar (Donini et al., 2011), o pH foi ajustado para 6,2 após a adição do ágar  (0,75%) e autoclavado a 121ºC e 1,5 atm por 20 minutos.Os explantes foram mantidos em sala de crescimento a 25±2°C, fotoperíodo de 16 horas e densidade de fluxo de fótons de 27 µmol m-2 s-1.  O material foi avaliado a cada 30 dias e realizada a contagem do número de brotações, obtendo-se assim, a taxa de multiplicação e número médio de explantes obtidos após as repicagens. RESULTADOS E DISCUSSÃOA partir dos meristemas estabelecidos, pode-se observar que para algumas variedades, além do desenvolvimento do meristema apical, houve desenvolvimento de brotações oriundas de gemas do disco.  A taxa de multiplicação variou entre variedades e entre os dois tipos de explantes obtidos  (meristema apical e brotações da gema do disco) durante as repicagens realizadas (Tabela 2). Na primeira repicagem (30 dias), o material obido de meristema proporcionou em média, uma brotação por explante inicial, já na segunda repicagem (60 dias), as maiores taxas chegaram a 6,00 e 5,37 brotações por explante para as variedades RB855156 e RB925345, respectivamente.  Na terceira repicagem (90 dias), os materiais das variedades de ciclo precoce apresentaram as maiores taxas de multiplicação, com taxas de 8,50 a 8,35 brotações por explante, para as variedades RB935581 e RB925345 (Tabela 2). Já para as brotações obtidas a partir da gema do disco, as médias da taxa de multiplicação  na  primeira  repicagem variaram de  uma brotação  por  explante  a  6,95 brotações, sendo a variedade RB975944 a que apresentou as maiores taxas. Na segunda repicagem, as médias de taxa de multiplicação também variaram de uma brotação por explante até 8,95 brotações na variedade RB855156. Na terceira repicagem, as médias variaram de 3,00 a 9,63 brotações, o que comprova que as variedades apresentaram comportamento distintos in vitro (Tabela 2).Tabela 2. Taxa de multiplicação de variedades de ciclo precoce e médio-tardio de cana-de-açúcar durante as repicagens. Embrapa Clima Temperado, Pelotas, RS, 2012.Variedades 1ª repicagem (30 dias) 2ª repicagem (60 dias) 3ª repicagem (90 dias)MeristemaapicalGema do discoMeristemaapicalGema do discoMeristemaapicalGema do discoPrecoce RB855156 1,00 2,37 6,00 8,95 6,00 7,54RB925345 1,00 3,00 5,37 6,75 8,35 6,80RB966928 1,00 2,13 4,00 5,46 7,37 8,11RB935581 1,00 3,70 2,00 4,49 8,50 6,47RB965911 - 1,13 - 1,13 - 5,00RB975944 1,34 6,95 4,66 5,99 6,92 9,63RB996961 1,00 1,53 - 3,50 - 7,45Médio-tardio RB857515 - 2,00 - 1,00 - 3,00RB925268 - 1,00 - 2,75 - -RB935744 1,08 1,27 2,90 5,21 4,75 4,75RB008347 1,00 3,33 2,10 3,37 3,40 8,25RB987935 1,00 3,31 1,50 4,23 - -RB987932 1,00 4,80 1,00 4,90 - -A partir das taxas de multiplicação, foi estimado o número médio de plantas obtidas a cada 30 dias. Aos 60 dias, dependendo da variedade, foi obtido, em média, de uma a 6,24 plantas a partir  de um único meristema, já aos 90 dias, este número cresceu exponencialmente para 7,10 a 44,83 plantas,  dependendo da variedade,  e assim sucessivamente com o decorrer das repicagens.  Para brotações da gema do disco, aos 30 dias, foram obtidas de uma a 6,95 plantas, culminando em até 41,33 aos 60 dias e 398 plantas aos 90 dias, dependendo da variedade (Tabela 3). Tabela 3. Número médio de plantas de variedades de ciclo precoce e médio-tardio de cana-de-açúcar obtido aos 30, 60 e 90 dias de cultivo. Embrapa Clima Temperado, Pelotas, RS, 2012.Variedades 1ª repicagem (30 dias) 2ª repicagem (60 dias) 3ª repicagem (90 dias)MeristemaapicalGema do discoMeristemaapicalGema do discoMeristemaapicalGema do discoPrecoce RB855156 1,00 2,37 6,00 21,21 36,00 160,00RB925345 1,00 3,00 5,37 20,25 44,83 138,00RB966928 1,00 2,13 4,00 11,62 29,48 94,00RB935581 1,00 3,70 2,00 16,61 17,00 107,00RB965911 - 1,13 - 1,13 - 6,00RB975944 1,34 6,95 6,24 41,33 43,18 398,00RB996961 1,00 1,53 - 5,35 - 40,00Médio-tardio RB857515 - 2,00 - 2,00 - 6,00RB925268 - 1,00 - 2,75 - -RB935744 1,08 1,27 3,13 5,21 14,86 25,00RB008347 1,00 3,33 2,10 11,22 7,10 93,00RB987935 1,00 3,31 1,50 14,00 - -RB987932 1,00 4,80 1,00 23,52 - -Pode-se comprovar que, a partir dos resultados obtidos até a terceira repicagem, a utilização do protocolo já estabelecido para a variedade RB855156 (Donini et al., 2011) é aplicável também para a  maioria  das variedades  testadas,  devendo ser feitos  apenas alguns ajustes durante outras etapas da micropropagação. Cabe-se ressaltar que o material ainda está em fase avaliação, sendo realizadas demais repicagens no intervalo de 30 dias, até completar a sexta repicagem, após isso, as mudas serão enraizadas, aclimatizadas e conduzidas para o plantio no campo. Além disso, serão feitas análises para comparar o material obtido de meristema e das brotações da gema do disco.CONCLUSÕESPode-se concluir que as variedades apresentam respostas diferentes durante as repicagens, assim como os tipos de explante. AGRADECIMENTOSA FINEP e CNPq pelo financiamento da pesquisa.REFERÊNCIAS DONINI,  L.P.;  DUTRA,  L.F.;  SILVA,  S.D.A.;  SILVA,  N.D.G.;  THIEL,  F.B.  Protocolo  de micropropagação  de  cana-de-açúcar.  In:  Congresso  Brasileiro  de  Cultura  de  Tecidos,  2011, Joinville.  ANAIS  DO CONGRESSO BRASILEIRO DE CULTURA DE TECIDOS.  Itajaí: Epagri, 2011.HSIE, B.S.; SOUZA, R.B.; OLIVEIRA, L.M.S.; BRITO, J.Z.; SILVA, M.V.; DONATO, V.M.T.S. Variação somaclonal em plantas de cana-de-açúcar micropropagadas. In: 54° Congresso Brasileiro de Genética, 2088, Salvador.  ANAIS DO 54° CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA. Salvador: SOCIEDADE BRASILEIRA DE GENÉTICA, 2008.LEE, T.S.G.  Micropropagation os  sugarcane  (Saccharum  spp.).  Plant Cell,  Tissue and Organ Culture, v.10, p. 47-55, 1987.OLIVEIRA, A.L.B.; FERREIRA, L.T.; HERCULANO, L.; OLIVEIRA, R.A.; PEREIRA, J.A.F.; CAMARA, T.R. Ação do hipoclorito na assepsia de explantes de cana-de-açúcar para embriogênese somática. In: X Jornada de Ensino, Pesquisa e Extensão da UFRPE - JEPEX, 2010, Recife. ANAIS DA X JEPEX. RECIFE : EDITORA DA UFRPE, 2010. SARWAR, M,; SIDDIQUI, S.U. In vitro conservation of sugarcane (Saccharum officinarum L.) germplasm. Pak. Journal Botanic, v.36, n.3, p549-556, 2004.VERÍSSIMO, M.A.A.  Desempenho agronômico de genótipos de cana-de-açúcar no estado do Rio Grande do Sul. 2012. 79p. Dissertação de Mestrado, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas.VIEIRA, R.A.; SILVA, C.M.; SOUTO, E.R.; HATA, F.T.; MACHADO, M.F.P.S.; MARCUZ, F.S. Diferentes  concentrações  de  6-Benzilaminopurina  e  cinetina  na  micropropagação  in  vitro  de variedades RB867515 e RB855156 de cana-de-açúcar. Campo Digital, v.4, n.1, p.122-126, 2009.

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