BAMPI, G. B.

POZZA, J. dos S.

RECH, D. V.

VAZ, C. S. L.

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   27  7ª Jornada de Iniciação Científica - JINC 24 de outubro de 2013  Concórdia,SC ANÁLISE DA PRESENÇA DE Campylobacter spp. EM CARNE DE FRANGO COMERCIALIZADA EM SUPERMERCADOS  Jenifer dos Santos Pozza¹*; Daiane Voss-Rech²; Clarissa Silveira Luiz Vaz² e  Gabriel Bonetto Bampi3 ¹Graduanda em Ciências Biológicas pela Universidade do Contestado, Campus Concórdia. Estagiária da Embrapa Suínos e Aves. *E-mail: jenifer.pozza@hotmail.com ²Embrapa Suínos e Aves 3Universidade do Contestado, Campus Concórdia.  Palavras-chave: Campylobacter, carne de frango, segurança dos alimentos.  INTRODUÇÃO O Brasil é o principal produtor e exportador de proteína de origem animal, destacando-se mundialmente na produção e industrialização de alimentos, sendo o setor de carnes uma das áreas do agronegócio brasileiro com maior dinâmica tecnológica e de conhecimento, ocupando posição de destaque na diferenciação e segmentação de mercados (6). A busca pela melhoria dos parâmetros sanitários foi fundamental para o crescimento da avicultura no Brasil, assim como para a ampliação do mercado externo (7), porém há patógenos que necessitam de constantes e mais detalhados estudos, principalmente os causadores de doenças transmitidas por alimentos. Um dos principais fatores de risco para as infecções alimentares inclui o consumo ou a manipulação de carnes mal cozidas ou cruas, leite cru ou água não tratada (3). Bactérias do gênero Campylobacter (C.) estão entre as principais causas de gastroenterite de origem alimentar em humanos em países desenvolvidos, sendo a carne de frango o principal meio de contaminação (5, 7). Entretanto, há poucas informações sobre a ocorrência de Campylobacter em carne de aves in natura no Brasil. Neste trabalho, estudou-se a presença de Campylobacter spp. em carne de frango disponível no varejo no município de Concórdia (SC) utilizando variações no protocolo de isolamento bacteriológico.  MATERIAIS E MÉTODOS Foram realizadas 6 coletas de cortes de carne de frango resfriada, sem adição de temperos, em três supermercados de Concórdia (SC), totalizando 37 amostras dos seguintes cortes: meio da asa (4), sobrecoxa (10), coxa (6), coxinha da asa (4) e coxa com sobrecoxa (13). Foi utilizado o protocolo de isolamento de Campylobacter descrito na norma ISO 10272-1:2006 (4), com modificações no tempo de incubação a 41,5°C do caldo seletivo. A suspensão inicial foi preparada pela rinsagem da carne em 150mL de água peptonada. Para a análise qualitativa, foram retirados 10mL da rinsagem de cada amostra e transferidos para 90mL de Caldo Bolton (CB) acrescido de 5% de sangue equino lisado e antimicrobianos para enriquecimento seletivo. Os caldos foram incubados em microaerofilia a 37ºC por 4h, seguido de incubação a 41,5ºC por 24h e 48h. Após cada tempo de incubação a 41,5ºC, o caldo foi semeado em placas de Ágar CCD modificado (mCCDA) e Ágar Preston (AP) contendo antimicrobianos, que foram incubadas a 41,5ºC por 24 a 28h. Após o tempo de incubação foi selecionado ao menos uma colônia típica de cada placa para confirmação pelas provas de morfologia, catalase, oxidase e crescimento microaeróbio a 25ºC por 44h +/-4h. As amostras confirmadas como Campylobacter spp. foram submetidas às provas bioquímicas de hidrólise do hipurato de sódio e do acetato de indoxil, para diferenciação das espécies. Foram consideradas positivas as amostras de carne de frango das quais foi isolado Campylobacter em ao menos um dos meios seletivos utilizados (mCCDA e AP).  RESULTADOS E DISCUSSÃO O enriquecimento em CB por 24h apresentou maior frequência de isolamento de Campylobacter (51,3%) do que por 48h (32,4%) (Tabela 1). Outros trabalhos realizados no Brasil também mostraram a presença de Campylobacter em carne de frango disponível para o consumo. Medeiros et al., (2012) confirmaram Campylobacter spp. em 71% das amostras de carne de frango coletadas (5). Entretanto, a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) não estabelece limites para a presença de Campylobacter em alimentos (2). O enriquecimento em caldo em dois tempos de incubação avaliados no presente trabalho aumentou a sensibilidade do método de detecção, uma vez que sete amostras foram positivas apenas no enriquecimento em CB por 24h, duas amostras apenas no enriquecimento em CB por 48h e 12 amostras foram isoladas em ambos os tempos de incubação do caldo Bolton. O meio seletivo AP demonstrou ser mais eficiente que o mCCDA para isolamento de Campylobacter (Tabela 2). Neste trabalho foram identificadas somente as espécies de C. jejuni e C. coli. Durante as análises qualitativas notou-se a presença de uma bactéria contaminante de crescimento difuso que impedia a identificação das colônias de Campylobacter nas placas de mCCDA, principalmente nas amostras que foram submetidas ao    28  7ª Jornada de Iniciação Científica - JINC 24 de outubro de 2013  Concórdia,SC enriquecimento em caldo Bolton por 48h. A proliferação de contaminantes no cultivo de Campylobacter tem sido descrita (1) e dificulta o isolamento da bactéria. De acordo com a caracterização bioquímica, todas as cepas contaminantes foram compatíveis com Proteus mirabilis, que é uma bactéria frequentemente isolada de amostras ambientais e que também pode estar presente no trato intestinal de animais e humanos.  CONCLUSÕES Considerando a frequência de isolamento de Campylobacter a partir do enriquecimento em caldo Bolton por 24h, foi identificada a prevalência de 51,3% nas amostras de carne de frango analisadas. A incubação do caldo seletivo por 24h foi mais efetiva que a incubação por 48h, assim como inibiu a proliferação de Proteus mirabilis. O maior número de amostras positivas foi identificado no isolamento em AP. C. jejuni e C. coli foram as espécies isoladas. Segundo os parâmetros da ANVISA, a presença de Campylobacter na carne de frango não compromete a qualidade microbiológica do alimento. Entretanto, o resultado desse trabalho reforça a necessidade de correto manuseio e cozimento da carne de frango pelos consumidores para evitar a infecção alimentar por Campylobacter.  REFERÊNCIAS 1. ALVES, L.; VOSS-RECH, D.; SILVA, V.S.; POZZA, J.S.; GASPARETTO, A.; VAZ, C.S.L. Study of thermophilic Campylobacter contamination of a broiler batch at slaughter. Acta Scientiae Veterinariae, v.40, n.3, p. 1-8. 2012. 2. BRASIL (2001). Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RDC n° 12, de 2 de janeiro de 2001. Aprova o regulamento técnico sobre padrões microbiológicos para alimentos. 2001. 3. FORTUNA, J.L. & FRANCO, R.M. Pequeno dossiê epidemiológico da Salmonella como causadora de infecções alimentares. Higiene Alimentar, v. 9, p.33-44. 2005. 4. International Organization for Standardization (ISO). 2006. Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for detection and enumeration of thermotolerant Campylobacter spp. – Part 1: detection method. (ISO 10272-1:2006 [E]). 16p. 5. MEDEIROS, V.M.; BRICIO, S.M.L.; FILGUEIRAS, A.L.L.; CLEMENTINO, M.B.M. Utilização de caldo Bolton no enriquecimento seletivo em comparação ao plaqueamento direto na pesquisa de Campylobacter spp. em carcaças resfriadas de frango. Revista do Instituto Adolfo Lutz, v.71, p. 456-461. 2012. 6. União Brasileira de Avicultura (UBABEF). Relatório Anual 2010/2011. Disponível em <www.ubabef.com.br>]. Acesso em 18 Set 2013. 7. VAZ, C.S.L. Campylobacter na segurança dos alimentos e na avicultura. Avicultura Industrial, v. 99, n. 1165, p. 15-19. 2008.   Tabela 1. Isolamento de Campylobacter spp. em carne de frango após diferentes tempos de incubação das amostras em caldo seletivo.  Tempo de incubação em caldo 24 h 48 h 19a/37b (51,3%) 12a/37b (32,4%) aNúmero de amostras positivas para Campylobacter spp. bNúmero de amostras analisadas   Tabela 2. Isolamento de Campylobacter spp. em carne de frango em função do tempo de incubação em caldo seletivo e do meio sólido seletivo.  Tempo de incubação em caldo Meio seletivo para isolamento APa mCCDAb 24h 19/37 0/37 48h 12*/37 1*/37 aAP= Ágar Preston bmCCDA= Ágar CCD modificado *Uma amostra foi positiva nos dois meios seletivos utilizados (AP e mCCDA)    

Análise da presença de campylobacter spp em carne de frango comercializada em supermercados

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