BASTOS, R.

CARVALHO, C. E. G.

FORNER, O.

FRAGOSO, S. P.

ROSINHA, G. M. S.

SOARES, C. O.

Portuguese

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IDENTIFICAÇÃO DE GENES IMUNODOMINANTES POR IMUNOVARREDURA DE BIBLIOTECA DE EXPRESSÃO GÊNICA DE Corynebacterium PseudotuberculosisCleber Eduardo Galvão Carvalho1, Stenio Perdigão Fragoso2, Odinéia Forner3, Renata Bastos1, Cleber Oliveira Soares4, Grácia Maria Soares Rosinha41 Alunos de doutorado do programa de pós-graduação em Ciência Animal da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul  (UFMS), 2 Pesquisador do Instituto de Biologia Molecular do Paraná (IBMP), 3 Aluna de doutorado do programa de pós-graduação em Biologia Celular e Molecular da Universidade Federal do Paraná (UFPR), 4 Pesquisadores da Embrapa Gado de Corte – Sanidade Animal – Laboratório de Engenharia Genética Animal. E-mail: galvao.vet.ce@gmail.comObjetivou-se neste estudo construir uma biblioteca de expressão gênica de Corynebacterium pseudotuberculosis e identificar, por imunovarredura, genes que codificam possíveis proteínas imunogênicas quando em contato com soro de ovinos e caprinos positivos para linfadenite caseosa (LC). Uma cepa selvagem de C. pseudotuberculosis foi utilizada para a extração e digestão parcial do DNA genômico. Sequências entre 1.000 e 5.000 pares de bases foram cortadas do gel, purificadas e os fragmentos obtidos do DNA digerido foram ligados no vetor bacteriófago ZAP Express, empacotados em fagos e transfectados em Escherichia coli. Para a imunovarredura utilizou-se um pool de soros de ovinos e caprinos positivos e um pool de soros negativos para linfadenite caseosa, os quais foram limpos para anticorpos específicos contra E. coli em membranas de nitrocelulose. Para finalizar a limpeza, estes soros foram passados em coluna de sepharose, adsorvida com antígeno de E. coli. Estes foram testados por Western blot, quanto ao reconhecimento inespecífico e específico contra E. coli e C. pseudotuberculosis, respectivamente. Na imunovarredura, foram identificados 10 clones que reagiram fortemente ao pool de soros. Apenas quatro foram confirmados, após a realização da PCR e sequenciamento para comparação genômica de C. pseudotuberculosis no GenBank. Esses quatro genes foram identificados com identidade entre 98% e 100% como codificadores de proteínas de membrana. Proteínas desse tipo podem ser antigênicas, podendo favorecer o desenvolvimento de testes sorológicos para diagnóstico, bem como o desenvolvimento de vacinas contra LC.  O uso de imunovarredura de biblioteca de expressão gênica apresenta-se como uma técnica sensível e eficiente na identificação de prováveis genes imunodominantes.Palavras chave: Corynebacterium pseudotuberculosis, linfadenite caseosa, biblioteca de expressão gênica.Clara Maria Silva1, Janice Correia Cardoso2 , Jayra Pereira Silva3, Carine Correia Pires1, Priscila Ferreira Silva3.1Residente do Hospital de Medicina Veterinária da UFBA, 2 aluno de Iniciação Científica EMVZ; 3 Mestranda do Programa de Pós-graduação em Ciência Animal nos Trópicos; Profa. Departamento de Anatomia Patologia e Clínicas Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Profa. Centro de Ciências Agrárias. E-mail:A nonnonononon non nonon nononnon é nonononono nono o nonononono de nononononononon em nono e o nononon nnon nononon foi nonon os nonon de nononononon de nonon nononono no nononon de nononono nononononon da Universidade Federal da Bahia. Nonononon nonononon nononononon de nonononon de 62 gatos, incluindo-se animais nonono e nononon, nonon 72,6% (45/62) SRD, 14,5% (9/62) nonono, 9,7% (6/62), Persa e 3,2% (2/62) nonon nonon. Nonon os nononn nononn nononnnononn a nononn nononn e em nononn foi nononn o nononn nononn e o nononn ononnnononn de nonon. Os nononn de nononn foram nononnon pela nononn de nononnononn nononn em non. Com o nononn de nononnon da nononn das nononn foi nononn uma nononn nononn de nononnon de nonono nonono nas nononon de non com nononnononn Hb-AS. No nonononon dos nono de nononnnonon foram nonon por nononn. Nono 62 nonon nonono foram nononnonon duas nonon de nonon, as nonon estão nononnonon nos nonon HoN e HoO com non nononon de nono nononono, Ho-NN e Ho-NO e Ho-OO. Os nononon nonononon nonononon nos nonononon nonononon non nonon nonon que nonon nononono n Ho-NN com non nonon de nononon nononn; Ho-OO com n nonon de nononon nonon e n Ho-NO com nonon nonon de nonon. nononon n nonon de nonon do non HoO, que nononno a nonono de nonon β nn nonon de nonon nlcnlinn em non (pH 9,5 – Celmgel) nononn 4 nononon pontos de nononon nonon nonon nonon. Onon nonon já nonon nononon oosenvndn pon outnos, nonono nonononom, nonln nononon de HPLC, nonono um nonon pnnn n glooinn de nonon α e nononn pnnn n nonon β. As nonon nononon de nonononon nononon nonon nonon, nononm: Ho-NN 33,8% (21/62); Ho-NO 54,8% (34/62) e Ho-OO 11,3% (7/62). Non fonnm nonononon nonon nonon o nonononon dn nononon em nonon com o ononon de nononon os nonon com ns nononn dos nononos. Non nonon de nonono nonon nonono estão nonon sendo nelncionndos com n pnesençn de conpúsculos de Heinz, umn vez que nonon estão nonononon à nonon nonononn. Os ononono que nonononon o nononon Ho-OO nononon nonon mnion nononon de nononon de nonon. O nononon Ho-NO e o nonon de nononon Ho-N foi o nonon nononon nn nmostnngem onononn. Nonon soone n nonono dos nonon de nononon deve non nononon nos nonon pnnn que o nonon de nononononon em Nononon Nononon nonon nonononon e nononon nn nononn de nononon nnimnis.Pnlnvrns chnve: nnemins, nononon, hemntologin.

Identificação de genes imunodominantes por imunovarredura de biblioteca de expressão gênica de Corynebacterium Pseudotuberculosis.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/980915/1/RESUMOCLEBER.doc

Identificação de genes imunodominantes por imunovarredura de biblioteca de expressão gênica de Corynebacterium Pseudotuberculosis.

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