HALFELD-VIEIRA, B. de A.

LIMA, H. E. de

NECHET, K. de L.

OLIVEIRA, F. de L.

QUEIROZ, E. de S.

SCHURT, D. A.

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  Área: Fitossanidade  INFLUÊNCIA DO PERÍODO DE MOLHAMENTO FOLIAR NA SEVERIDADE DA MANCHA-BACTERIANA DO FEIJÃO-CAUPI  Hyanameyka Evangelista de Lima1; Kátia de Lima Nechet2, Bernardo de Almeida Halfeld-Vieira2, Francidalva de Lima Oliveira3, Ezequiel de Souza Queiroz3, Daniel Augusto Schurt1.  1Engº Agr., DSc. Fitopatologia, Pesquisador, Embrapa Roraima, Rodovia BR-174, Km 8, Boa Vista, RR. e-mail: hyanameyka.lima@embrapa.br 2Engº Agr., DSc. Fitopatologia, Pesquisador, Embrapa Meio Ambiente, Rodovia SP 340 Km 127,5 - Jaguariúna, 13820-000, Jaguariúna, SP.  3Acadêmico do curso de Agronomia, Universidade Estadual de Roraima, Av. João XXIII S/N, Alto Alegre, RR.   Resumo – Avaliou-se a severidade da mancha bacteriana em feijão-caupi (Vigna unguiculata) em diferentes intervalos de molhamento foliar (0, 4, 8, 12, 16, 20 e 24 h) após a inoculação. O experimento foi realizado em casa-de-vegetação, onde plantas de feijão-caupi BRS Bragança com 20 dias foram pulverizadas com suspensão de Xanthomonas axonopodis pv. vignicola (Xav) na concentração de 107 UFC mL-1, sendo posteriormente submetidas aos diferentes períodos de molhamento foliar (PMF), determinando-se o período de incubação (PI), a taxa de progresso da doença (TPD) e a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). Dos modelos matemáticos testados, os que apresentaram melhores ajustes para duração do PMF foi o exponencial negativo para PI e o linear para AACPD. O período de incubação variou de 4,0 a 5,4 dias e foi maior em plantas sem PMF. A AACPD aumentou com a elevação do PMF. Mesmo na ausência de molhamento foliar ocorreram sintomas da mancha bacteriana com valores de AACPD de 216,45, sendo este o menor valor, enquanto que o maior valor (573,86) da AACPD foi obtido com 24h de PMF. Houve aumento da TPD com o incremento do PMF até 20h. Houve influência do PMF na infecção de Xav, pois PMF acima de 12h diferiram (p≤0,05) do tratamento sem PMF (0h). Não houve diferença significativa da severidade entre períodos de 12, 16, 20 e 24 h de PMF, indicando que um período de molhamento foliar de 12h pode ser suficiente para avaliar resistência à mancha-bacteriana do feijão-caupi.    Palavras-chave: Xanthomonas axonopodis pv. vignicola, Vigna unguiculata, período de incubação, taxa de progresso da doença.  Introdução O Brasil é o terceiro maior produtor mundial de feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], com uma área cultivada estimada em cerca de 1.500 ha ano-1, sendo explorado principalmente nas regiões Norte e Nordeste (SANTOS et al., 2009; SINGH et al., 2002). A doença mancha-bacteriana, causada pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv. vignicola (Burkholder) Dye, é considerada uma doença limitante em algumas regiões produtoras de feijão-caupi, como na África, Ásia e nas Américas (Kishun, 1989). No Brasil, a doença já foi relatada nos estados de Goiás, Bahia, Maranhão, Pará, Piauí, Ceará e Roraima (Santos et al., 2000; Freire 1  Filho et al., 2005; Nechet et al., 2009). Os sintomas são observados primeiramente pela formação de manchas foliares, pustiliformes, necróticas, angulares com centro amarronzado, envolvido freqüentemente por um halo amarelado, de tecido encharcado de aspecto úmido (Freire Filho et al., 2005; Moretti et al., 2007). Podem surgir cancros bem característicos no caule e manchas irregulares de aspecto úmido nas vagens, por onde o patógeno infecta as sementes (Freire Filho et al., 2005). Dados oriundos de outros países indicam que a mancha bacteriana pode ocasionar epidemias severas (Moretti et al., 2007) e causar significativa redução na produção (Ekpo, 1978; Okechukwu et al., 2000) podendo atingir perdas de até 92% (Kishun, 1989). No entanto, não há dados precisos sobre o potencial de perdas ocasionado pela doença no Brasil (Freire Filho et al., 2005). Não existe um método eficiente para o controle da mancha-bacteriana do feijão-caupi, sendo recomendado o uso de cultivares resistentes, plantio em áreas livres do patógeno e uso de sementes sadias (Gitaitis, 1983; Sikirou & Wydra, 2004; Freire Filho et al., 2005). Entretanto, apesar da importância dessa doença para a cultura, estudos epidemiológicos sobre o patossistema Xanthomonas axonopodis pv. vignicola x feijão-caupi são escassos no Brasil. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar a influência da duração do período de molhamento foliar na severidade da mancha-bacteriana do feijão-caupi.  Material e Métodos O trabalho foi realizado na Embrapa Roraima, localizada na BR-174, município de Boa Vista/RR, utilizando-se as estruturas do laboratório e casa-de-vegetação, no período de abril a junho de 2011. O isolado de Xav utilizado nos ensaios pertence à coleção de microrganismos do laboratório de Fitopatologia da Embrapa Roraima, previamente identificado e caracterizado como Xav. Plantas de feijão-caupi cv. BRS Bragança, suscetível à mancha-bacteriana, foram cultivadas em vasos plásticos de 5L contendo uma mistura de solo e areia (proporção 2:1) desinfestados previamente com metam-sódico. O isolado de Xav foi semeado em placas de Petri contendo meio 523 (Kado & Heskett, 1970) e mantido em incubadora tipo BOD durante três dias a 25ºC ±2ºC. Após este período, as células bacterianas obtidas foram suspensas em água destilada esterilizada, ajustando a concentração de inóculo 107 UFC mL-1. Plantas de feijão-caupi cv. BRS Bragança no estádio de dois a três trifólios foram inoculadas com a suspensão de Xav até o ponto de escorrimento, com pulverizador costal manual. As plantas foram cobertas por saco plástico transparente previamente umedecido, após a inoculação, simulando câmara úmida, de forma a se obter os períodos de molhamento foliar de 0, 4, 8, 12, 16, 20 e 24 horas. Durante e após cada período as plantas foram mantidas em casa-de-vegetação com temperatura em torno de 28 ±2ºC. Como controle, plantas foram pulverizadas com água destilada esterilizada e submetidas aos mesmos períodos de molhamento foliar. No período em que as plantas foram mantidas em câmara úmida, a irrigação foi efetuada pela deposição de água nos vasos com auxílio de uma mangueira de irrigação, e após a retirada dos plásticos, a irrigação foi feita duas vezes por dia com sistema de aspersão. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com sete tratamentos e dez repetições, sendo cada repetição um vaso com uma planta. A avaliação do período de incubação (PI), calculado pelo número de dias entre a inoculação e o surgimento dos sintomas da doença foi feita, diariamente, após a inoculação. A severidade da mancha-bacteriana do feijão-caupi foi determinada por meio da avaliação visual da porcentagem de área foliar necrótica nos trifólios da planta, em intervalos de cinco dias, com auxílio de escala diagramática. O ensaio foi finalizado aos 30 dias após a inoculação, totalizando seis avaliações da severidade da doença. Com os dados de severidade, calculou-se a área abaixo da curva de progresso da doença, pela expressão: AACPD= {Σ [(yi + yi+1)/2].( ti+1- ti)}, onde yi e yi+1 são 2  os valores de severidade observados em duas avaliações consecutivas e ti+1- ti o intervalo entre avaliações. As taxas de progresso da doença (TPD) foram estimadas pelo parâmetro b da equação de regressão linear simples e comparada entre os diferentes PMF com base no intervalo de confiança entre as taxas médias de cada dois tratamentos (Campbell e Madden, 1990). Os dados de severidade foram submetidos ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk e de homogeneidade de variância de Bartlett, sendo então transformados em log devido a normalização e submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5% de significância, utilizando-se o software Statistical Analysis System versão 9.0 (SAS Institute, Inc., Cary, NC). Posteriormente, para os dados de PI e AACPD realizou-se a análise de regressão linear e não-linear, a fim de selecionar os modelos com melhores ajustes para duração do período de molhamento foliar, com base no coeficiente de determinação (R2), no quadrado médio do resíduo e na ausência de tendências indesejáveis no gráfico de resíduo.   Resultados e Discussão Não houve sintomas da mancha-bacteriana em plantas não inoculadas com Xav durante o período de avaliação. Os valores da severidade da mancha-bacteriana do feijão-caupi para plantas submetidas aos PMF de 0, 4, 8, 12, 16, 20 e 24 h, após a inoculação com Xav, foram de 8,82; 13,35; 14,67; 15,02; 18,38; 18,92; 23,20%, respectivamente. Houve diferença (p≤0,05) na severidade da doença entre as plantas submetidas a diferentes períodos de molhamento foliar (PMF). Os valores de severidade referentes a 4 e 8 h de PMF não diferiram (p>0,05) do tratamento sem PMF (0h). Entretanto, os PMF acima de 12h diferiram (p≤0,05) do tratamento sem PMF (0h). A ocorrência de sintomas da doença mesmo na ausência de molhamento foliar 24h após a inoculação indica que a infecção pode ocorrer em plantas de feijão-caupi. Esses resultados são corroboradas pelo relato de Silveira et al. (2003), que verificaram que após a chegada de Acidovorax avenae subsp. citrulli na superfície foliar de plantas de meloeiro, na ausência de molhamento foliar, a população bacteriana iniciou a infecção, com lesões incipientes e pouco visíveis,  distribuídas no limbo foliar, mas que com a elevação da umidade, a infecção tornou-se generalizada e as lesões progrediram, coalescendo e formando grandes áreas necrosadas. Conforme O’Brien & Martin (1999), sem molhamento foliar após a chegada do patógeno na planta, a infecção é retardada, aumentando o tempo para o patógeno causar lesões, o que consequentemente, aumenta o tempo para que este seja dispersado. Não houve diferença significativa da severidade entre períodos de 12, 16, 20 e 24 h de molhamento foliar, indicando que um período de molhamento foliar de 12h pode ser suficiente para avaliar resistência à mancha-bacteriana do feijão-caupi. Dos modelos matemáticos testados, o que proporcionou melhor ajuste para duração do período de molhamento foliar (PMF) foi o exponencial negativo para PI e o linear para AACPD (Figura 1). O PI da doença variou de 4,0 a 5,4 dias, sendo maior nas plantas sem molhamento foliar 24h após a inoculação (0h de PMF).  Nos períodos de 4 a 20 h, o PI manteve-se praticamente constante (4,2 dias) sendo o menor valor (4,0 dias) verificado nas plantas submetidas a molhamento foliar 24 h após inoculação. Na ausência de molhamento foliar (0h de PMF), verificaram-se sintomas da mancha-bacteriana com valores de AACPD de 216,45, que foi o menor valor, sendo o maior valor (573,86), obtido com 24h de PMF, havendo incremento da AACPD com o aumento da duração do PMF.  3   Figura 1. Período de incubação - PI (A) e Área abaixo da curva de progresso da mancha-bacteriana – AACPD (B) em feijão-caupi cv. BRS Bragança, inoculadas com Xanthomonas axonopodis pv.vignicola no estádio de 2 a 3 trifólios, em condições de casa-de-vegetação e submetidas a diferentes períodos de molhamento foliar.  Pontos pretos representam a média de 10 repetições e pontos brancos representam as repetições.  Os valores da TPD para plantas submetidas aos PMF de 0, 4, 8, 12, 16, 20 e 24 h, após a inoculação com Xav, foram de 0,0039; 0,0059; 0,0063; 0,0078; 0,0084; 0,0112 e 0,0112 unidades de infecção por dia, respectivamente. Entre os PMF aos quais as plantas foram submetidas após a inoculação, o de 20 e 24h, foram os que apresentaram os maiores valores de TPD, e o tratamento de 0h de PMF, apresentou o menor valor. Houve aumento da TPD com o incremento do período de molhamento foliar até 20h. Os PMF de 20 e 24h não apresentaram diferença significativa quando se comparou o valor da TPD. Tais resultados demonstram que a água livre é um fator que favorece o aumento da severidade da doença. Diversos trabalhos demonstram que períodos mais longos de molhamento foliar favorecem o aumento da severidade da doença (Vale et al., 1990; Zerh et al., 1996; Godoy et al., 1999; Silva et al., 2001; Silveira et al., 2003; Pria et al., 2006).    Conclusão Com o aumento do período de molhamento foliar após a inoculação de plantas de feijão-caupi com X. axonopodis pv. vignicola  o período de incubação da bactéria tende a ser menor e a severidade da doença tende a ser maior.   Referências CAMPBELL, C.L. & MADDEN, L.V. 1990. Crop loss assessment and modeling. In: Campbell, C.L. & Madden L.V. Introduction to plant disease epidemiology. New York, John Wiley & Sons, Cap. 14, p. 393-422. EKPO, E. J. A. Effect of Xanthomonas vignicola on the yield of cowpea (Vigna unguiculata). African Journal of Agricultural Sciences, v.5, p.67-69, 1978. FREIRE FILHO, F. R., LIMA, J. A. A., RIBEIRO, V. Q. (Eds.) Feijão-caupi: avanços tecnológicos. Brasília, DF: Embrapa Informação Tecnológica, 2005. 519 p. 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