ALVES, S. A. O.

CARDOSO, J. de N. O.

LEMOS, O. F. de

LOBATO, A. K. da S.

MAIA, P. S. P.

OLIVEIRA NETO, C. F. de

OLIVEIRA, H. S. de

REIS, I. N. R. de S.

Repository Open Access to Scientific Information from Embrapa

    ________________ 1. Graduanda do º semestre de Agronomia. Universidade Federal Rural da Amazônia. Av. Tancredo Neves, 2501, Terra Firme, Belém-PA,.E-mail:josi.card@ig.com.br  2. Mestre em Botânica Tropical pelo Museu Paraense Emilio Goeldi- MPEG.Av.Tancredo Neves,Terra Firme,Belém -PA 3. Mestrando em Agronomia pela Universidade Federal Rural da Amazônia. Av. Tancredo Neves,2501,Terra Firme, Belém-PA, CEP 66077-530 4  Pesquisador da EMBRAPA/ CPATU .Travessa Enéas Pinheiro S/N. Apoio financeiro: CNPq e EMBRAPA AMAZÔNIA ORIENTAL. Introdução  O dendezeiro (Elaeis guineensis, Jacq.) é uma planta originaria da África, provavelmente no golfo da Guiné, sendo uma planta monocotiledônea (embrião assimétrico, um cotilédone) pertencente à família Arecaceae (fruto simples, folhas penadas) e gênero Elaeis[1].O gênero Elaeis é composto de duas espécies de interesse genético: o caiaué, Elaeis oleífera (HBK) Cortez e o dendezeiro, Elaeis guineensis, jacq. [1,2]  Segundo [3] uns dos principais problemas da planta na região Norte do Brasil é uma doença conhecida como amarelecimento fatal que causa a morte da planta ,trazendo grandes perdas na biodiversidade da espécie. A cultura de tecidos surge como uma alternativa promissora para a propagação em larga escala de plantas de dendezeiro, selecionadas a partir das melhores progênies híbridas, dentro dos programas de melhoramento genético da cultura, sendo um desafio e uma esperança para os melhoristas do dendezeiro [2]  As técnicas in vitro  se constituem ferramentas valiosas dentro do campo genético, pois permitem a propagação rápida de plantas livres de patógenos e clonagem de material elite, regaste de embriões de cruzamentos intra e inter específicos, geração de variabilidade genética por mutações induzidas, seleção in vitro, produção de plantas trangênicas, dentre outras [4].  Dentre as alternativas de melhoramento genético, a obtenção de híbridos interespecíficos (caiaué x dendezeiro), apesar de apresentar produção de biomassa cerca de 20% menor que o dendezeiro, poderá se tornar a única forma de viabilizar a manutenção da espécie nas áreas afetadas por doenças como o amarelecimento fatal.  O objetivo do trabalho foi a Desenvolvimento de protocolos de resgate de embriões de sementes hibridas de dendê in vitro .  Material e Métodos  Os cachos de dendê foram trazidos diretamente do campo, onde foram despolpados para obtenção de sementes onde ficaram secando em temperatura ambiente. Após isso, as sementes foram trazidas para o laboratório as quais  passaram por processos de desinfestação. Em câmara de fluxo laminar os embriões foram imersos em álcool 70% por 60 segundos e solução de hipoclorito de sódio 1% por 20 minutos, sendo em seguida lavados cinco vezes em água destilada e autoclavada. Com o auxílio de pinça e bisturi foi realizada a excisão dos embriões. Foram avaliados também a porcentagem de contaminação e oxidação.  Os embriões foram cultivados em frascos de 300 ml contendo 30 ml de meio de cultura. O pH do meio foi ajustado para 5,8±0,1 antes da autoclavagem que foi realizada por 15 minutos a 121ºC e 1,3 atm. O agente gelificante utilizado foi o phytagel (0,2%). O tratamento foi constituído de 2 meios básicos (Y3 [5] e MS [6]) e suas variações, totalizando 6 tratamentos. T1-Y3 + 0,2% carvão ativado;  T2- Y3 sem carvão ativado; T3- MS+ 0,2% carvão ativado;  T4 – MS+ sem ativado; T5- ½MS + 0,2% carvão ativado e  T6- ½MS+ sem carvão ativado.  A avaliação foi feita atribuindo-se notas que variam de 0 (ruim) a 6 (ótimo ) conforme ilustra a Fig 1B.As  notas 6 foram contabilizadas e submetidas à análise de variância (ANOVA) e as médias foram comparadas utilizando-se o teste Tukey a 5% de probabilidade e os dados foram transformados para vx+0,5. O experimento foi avaliado durante o período de 90 dias.    Resultados  Não foi verificada nenhuma contaminação nos experimentos realizados, mostrando a eficácia da assepsia adotada. O processo de oxidação foi observado apenas nos meios em que não havia carvão ativado, nas seguintes proporções: T2(10%), T4(15%) e T6(15%).  Em relação ao desenvolvimento do embrião após 14 dias foi verificado o entumescimento do embrião Regeneração de Embriões in vitro de Híbridos de Dendezeiro Joseane de Nazaré Oliveira Cardoso1, Sérgio Augusto Oliveira Alves2, Hérica Santos de Oliveira1, Cândido Ferreira da Oliveira Neto 3,Allan Klinger da Silva Lobato1, Patrícia Surama Parise Maia  3,Iulla Naiff Rabelo de Souza Reis 3,Oriel Filgueira Lemos4    (Nota 1,Fig 1B). A partir de 21 dias já foi possível notar o início da curvatura do embrião sendo que no final de 28 dias o embrião já se encontrava totalmente curvo (Nota 4,Fig 1B). Depois de 56 dias, o embrião iniciou a emissão de radícula e no final da 63 dias já apresentava caulículo e radícula totalmente formados(Nota 6,). No final dos 84 dias, a planta já estava completamente formada (Fig.1A). Foi realizada análise de variância e teste de Tukey para todos os meios utilizados no experimento e pôde-se observar que o melhor tratamento foi o tratamento T3 (meio MS+0,2%Carvão ativado) para a obtenção de nota 6 onde o embrião formou caulículo e radícula em maior quantidade, sendo que os demais tratamentos seguidos de T4, T1, T2, T5 e T6 não diferiram significativamente entre si a nível de 5% de probabilidade (Tab1).    Discussão   É importante também analisar o efeito do carvão ativado, pois nos meios onde havia o carvão não foi verificado a presença do processo de oxidação e segundo [7] este resultado se deve a presença de cargas residuais  no carvão que faz com que essas substâncias impeçam ou atenuam o processo de oxidação atuando na adsorção de metabólitos produzidos pelo explante in vitro  como, por exemplo, os compostos fenólicos ou seus produtos da oxidação; as quinonas.  Em relação ao desenvolvimento do embrião, presença do meio MS completo suplementado com 0,2% carvão ativado foi fundamental para o desenvolvimento completo dos embriões. Esses resultados concordam com os obtidos por [7], que também obteve resultados semelhantes só que uma concentração menor de carvão ativado (0,1%). O meio MS propiciou o perfeito desenvolvimento do embrião até a planta adulta, já que obteve uma maior numero de plantas com nota máxima (6). Segundo [8], o meio MS é o mais utilizado para palmeiras, obtendo resultados excepcionais no resgate de embriões in vitro. Entretanto, os meios Y3 e ½ MS com ou sem carvão ativado não apresentaram o resultado esperado, visto que [4] obteve resultados bastante significativos no resgate de embriões em meio com metade da concentração (½ MS) e segundo [7] o meio Y3 com carvão ativado apresenta resultados superiores ao meio MS no resgate de embriões em palmeiras.    REFERÊNCIAS  [1] SURRE, C.; ZILLER, R.1969. La palmera de aceite. Editorial Blume. Coleccion Agricultura. 120p. [2]  VIÉGAS, I. de J.M; MÜLLER, A.A.2000,.  A cultura do  dendezeiro na Amazônia Brasileira Belém:  EMBRAPA/ CPATU. 374p [3]    DUARTE, M. de L. R. 1999. Doenças de plantas no trópico  úmido Brasileiro. I plantas industriais. Belém. Embrapa   Amazônia Oriental,. 269p. [4] LEMOS, O .F.P, 2003. Mutagênese e tecnologia in vitro no melhoramento genético de pimenta- do -reino (Piper nigrum L.). Piracicaba, 159p.Tese de doutorado. Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo. [ [5] EUWENS, C. J. 1978. Effects of organic nutrients and hormones on growth and delopment of tissue explants from coconut  (Cocos nucifera) and date (Phoenys dactylifera) palms cultured in vitro. Physiologia Plantarum, 42: 173-178..  [6]  MURASHIGE, T.; SKOOG, F. 1962. A revised  Medium for rapid growth and biossays with Tobacco tissue culture. Physiologia Plantarum, v.15, p. 473-497.,   [7]   TEIXEIRA, J.B.; SONDAHL, M.R.; KIRBY, E.G, 1993. Somatic embryogenesis from immaturezygotic embryos of oil palm. Plant Cell Tissue and Organ Culture, v.34, p. 227-233. [8] TISSERAT, B. Palms. In: BONGA, J. M.; DURZAN, D.J. Cell and tissue culture in forestry. Dordrecht: Martinus Nighoff, 1989. p.339-356    Tabela 1- Médias do número notas 6 em 90 dias em diferentes meios de cultura  Tratamentos Médias                                           T(3)                                                                                                 0,92 A                                           T(4)                                                                                                 0,87B                                           T(1)                                                                                                 0,70B                                           T(2)                                                                                                 0,70B                                           T(5)                                                                                                 0,70B                                           T(6)                                                                                                  0,70B  Medias seguidas da mesma letra não diferem estatisticamente entre si pelo teste de tukey (p < 0,05).             Figura 1-Desenvolvimento de plântulas de dendê (Elaeis guineensis Jacq).A) Formação da plântula de dendê in vitro  após 84 dias. B) Diferentes estádios de desenvolvimento de embriões zigóticos de dendê.              

Regeneração de embriões in vitro de híbridos de dendezeiro.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/927787/1/trabalho527.pdf

Regeneração de embriões in vitro de híbridos de dendezeiro.

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