CASARIN, T.

DODE, L. B.

FORMOSO, R. S.

MASIERO, D.

SILVA, S. D. dos A. e

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EFEITO DE DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE CITOCININA NA ORGANOGÊNESE DE COTILÉDONES DE PINHÃO-MANSOCASARIN, Tatiane¹; FORMOSO, Rafaela Silva¹; MASIERO, Daniele¹; DODE, Luciana Bicca2 e SILVA, Sérgio Delmar dos Anjos3 1 Universidade Federal de Pelotas, Graduação em Biotecnologia; 2Universidade Federal de Pelotas, Centro de Desenvolvimento Tecnológico.; 3 EMBRAPA/CPACT casarintatiane@gmail.com1 INTRODUÇÃOO pinhão-manso  (Jatropha curcas  L.) é uma euforbiácea que se apresenta como uma alternativa para atender a demanda de produção de biocombustíveis de forma sustentável. O óleo extraído da semente pode ser utilizado para a produção de biodiesel por apresentar características próximas ao óleo diesel fóssil (Deore, et al, 2008). A propagação assexuada é realizada tradicionalmente através de estacas, mas  alguns  problemas  no  desenvolvimento  das  plantas  têm  sido  relatados  e dificultam a utilização desse método de propagação (Deore, et al, 2008). Apesar de ser uma cultura resistente à seca, é  suscetível a pragas, doenças, déficit hídrico e solos com baixa fertilidade, tendo na cultura de tecidos vegetais e micropropagação importantes  ferramentas  para  a  produção  em  grande  escala  de  plantas geneticamente  uniformes  e  com  qualidade  sanitária  superior  (Nogueira  et  al, 2011;Gusmão,  2010).  Para  otimização  dos  protocolos  de  cultura  de  tecidos  é necessária  a  seleção  de  explantes,  estabelecimento  e  ajuste  de  condições  de cultivo, adequadas aos genótipos de interesse. Segundo Li et al (2007) e Nogueira et  al  (2011),  é  possível  promover  a  calogênese  em explantes  cotiledonares  de pinhão manso utilizando meio Murashige & Skoog (MS) suplementado com 3% (p/v) de sacarose, 1,5 mg.L-1 de benzilaminopuria (BAP) e 0,05 mg.L-1 de ácido indol-butírico (AIB).  Tendo em vista que a resposta aos meios de indução são bastante variáveis entre os diferentes genótipos da espécie, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de seis concentrações de BAP na indução da organogênese indireta em cotilédones de pinhão-manso  obtidos de sementes provenientes da Empresa Carnaúba Agricultura, cultivados in vitro. 2 MATERIAIS E MÉTODOSO estudo foi conduzido no Laboratório de Biotecnologia Vegetal, do Centro de Desenvolvimento Tecnológico da Universidade Federal  de Pelotas.  As sementes, cedidas  pela  Empresa  Carnaúba  Agricultura,  de  Piracuruca,  Piauí,  foram descascadas com o auxilio de um quebra-nozes, desinfestadas superficialmente em água destilada  estéril  e  sabão  por  10  minutos  sob agitação,  lavadas  com água destilada estéril e finalmente, imersas em solução de hipoclorito de sódio 1% (v/v) durante dois minutos, seguida de tríplice lavagem. As sementes foram distribuídas em frascos com 30 ml  de substrato  contendo água destilada e 6g de ágar.L-1  e incubadas no escuro 10 dias, a 25+-2°C. Aos 10 dias, foram retirados, com auxílio de pinça e bisturi, os cotilédones e transferidos com a face adaxial em contato com o meio para placas de petri  descartáveis contendo 20 mL de  meio   Murashige & Skoog (MS), acrescido de  3% (p/v) de sacarose, e  7g.L-1 de ágar. O pH do meio foi ajustado  para  5,8  antes  da  autoclavagem  e  da  adição  de  reguladores  de crescimento. Foram adicionados os reguladores de crescimento: ácido indolbutírico (AIB) na concentração de 0,05mg.L-1 e diferentes concentrações de BAP  1,5 mg.L-1, 3 mg.L-1,  4,5 mg.L-1,  6 mg.L-1,  7,5 mg.L-1, e  9 mg.L-1. Cada tratamento constou de dez repetições contendo dois explantes e foi  mantido nas mesmas condições de temperatura e fotoperíodo de 16h. Aos 35 dias, o material foi repicado para meio fresco. A presença de calos foi avaliada aos 7, 14, 21, 28, 35 e 42 dias; a presença de calos  organogênicos  foi  avaliada aos 28  dias  e o número  de  explantes  com brotos aos 28, 35 e 42 dias, considerando-se a porcentagem de explantes nessas condições por repetição. 3 RESULTADOS E DISCUSSÃOAtravés das avaliações pode-se observar que a partir de 14 dias de cultivo, com exceção do tratamento contendo 3 mg.L-1 de BAP (com 90% dos explantes com calos aos 14 dias e 95% a partir dos 21 dias) os demais  tratamentos apresentaram calos em todos os explantes avaliados. Após os 14, as repetições do tratamento contendo  7,5  mg.L-1de  BAP  +  0,05  mg.L-1  de  AIB  foram  perdidas  devido  à contaminações dos explantes. Sujakta & Mukta (1996) demonstraram que explantes cotiledonares de pinhão manso quando cultivados em meio MS com altas concentrações de BAP e de AIB mais  elevadas  induzem  a  formação  direta  de  brotações  adventícias,  mas  se  a concentração de BAP é mantida e a de AIB reduzida, têm-se regeneração indireta eficaz, o que pode ser observado nesse estudo, onde maiores concentrações de BAP combinadas  com concentrações  reduzidas  de  AIB  induziram a  calogênese eficientemente.Em relação  à  presença  de  calos  organogênicos  aos  28  dias  observou-se aumento percentual gradual com o aumento da concentração de citocininas até 4,5 mg.L-1 de BAP (45%, 65% e 75%, respectivamente), acompanhado de decréscimo para concentrações maiores (50% e 30%, respectivamente) (Fig. 1).Figura 1: Percentagem de explantes cotiledonares de pinhão-manso cultivados em meios contendo 0,05 mg.L-1 AIB e diferentes concentrações de BAP com calos organogênicos aos 28 dias de cultivo in vitro.Aos 28 dias foi observada a presença de brotos apenas para o tratamento contendo 4,5 mg.L-1 de BAP. Aos 42 dias 37,5% dos explantes deste tratamento apresentaram brotos, enquanto os demais apresentaram 15% dos explantes com calos para o tratamento usando 3 mg.L-1 de BAP,  33% para o tratamento com 6 mg.L-1 de BAP e 12,5% para o de 9 mg.L-1 de BAP. No tratamento contendo 1,5 mg.L-1 BAP não foi observada organogênese.  As citocininas são indispensáveis no cultivo  in  vitro  devido  à,  entre  outras  funções,  sua  capacidade  de  quebrar  a dominância apical e induzir a proliferação de gemas axilares (Hu & Wang, 1983), sendo que a benzilaminopuria tem sido muito eficaz para promover multiplicação em diversas espécies e parece ser a citocinina por excelência para multiplicação de partes  aéreas  e  indução  de  gemas  adventícias,  um dos  objetivos  deste  estudo (Airies et al, 2008).  Percebeu-se  que  todos  os  tratamentos  foram  eficientes  na  indução  de calogênese a partir dos 14 dias, porém a presença de estruturas organogênicas  e a formação de  brotos  foram mais expressivas quando  as concentrações  de BAP variaram de 3 mg.L-1 à 6mg.L-1, sendo  o tratamento contendo 4,5 mg.L-1 de BAP o que resultou em maior número de explantes com  brotos.4 CONCLUSÃOA partir dos resultados obtidos neste estudo é possível concluir que, para o genótipo  em  questão,  se  fazem  necessárias  concentrações  mais  elevadas  de benzilaminopuria  na  indução  de  organogênese  em  explantes  cotiledonares  de pinhão-manso. Apoio: EMBRAPA CPACT, FINEP.5 REFERÊNCIASAIRES, Priscila S. R.; CARVALHO, Julita M. F. C.; PIMENTEL, Nara W. e SILVA, Humberto.  Efeito da citocinina 6-bencilaminopurina na micropropagação  in vitro  da mamona utilizando o genótipo BRS nordestina. Revista de Biologia e Ciências da Terra Volume 8 - Número 2 - 2º Semestre 2008DEORE, Ajay C.; JOHNSON,T. Sudhakar.  High-frequency plant regeneration from leaf-disc  cultures  of  Jatropha  curcas L.:  an  important  biodiesel  plant.  Plant Biotechnol Rep 2008 2:7–11, 2008.FEITOSA, Luely S.  Efeito dos reguladores de crescimento no estabelecimento in vitro e indução de calos em pinhão-manso. 2011. Dissertação de Mestrado em Agroecossistemas. Progama de Pós-Graduação em Agroecossistemas, Pró-Reitoria de Pós-Graduação e Pesquisa,  Universidade Federal  do Sergipe. São Cristóvão, Sergipe, Brasil, 2011.GUSMÃO, Carlos A.  G.  Desempenho do Pinhão-manso (Jatropha curcas)  de segundo  ano  submetido  a  diferentes  doses  e  relações  de  NPK. 2010. Dissertação de Mestrado em Produção Vegetal.  Programa de Pós-Graduação de Produção Vegetal no Semiárido, Universidade Estadual de Montes Claros. Janaúba, Minas Gerais, Brasil, 2010.HU,  C.Y.;  WANG,  P.J.  Meristem,  shoot  tip  and  bud  culture.  In:  EVANS,  D.A.; SHARP,  W.R.;  AMMIRATO,  P.V.;  YAMADA,  Y.  (Ed.)  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Efeito de diferentes concentrações de citocinina na organogênese de cotilédones de pinhão manso.

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