ALMEIDA, A. M. R.

MITUTI, T.

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/68 	 Embrapa Soja. Documentos, 276 Tolerância ao Cowpea mild mottle virus e sua concentração relativa em soja Tatiana Mituti 1 ; Álvaro Manoel Rodrigues Almeida 2 . ' Graduanda de Biologia, Centro Universitário Filadélfia, Londrina, PR; 2Embrapa Soja, amra@cnpso.embrapa.br  Introdução Os organismos patogênicos associados à soja, tais cgmo fungos, bactérias e vírus, podem causar sérias perdas na produção dessa leguminosa. Nos últimos anos, surgiram vários organismos prejudiciais a esta cultura, den-tre eles a podridão parda da haste, o oídio e a necrose da haste da soja (Cowpea miId mott!e virus). Em março de 2003, em Palotina, PR, foram coletadas plantas da cv. CD 206 com intensos sintomas de necrose da haste, dos peciolos e dos brotos, redução do porte e até morte de plantas (Almeida et ai., 2002). Através de análises biológica e molecular, foi confirmada a presença de um carlavirus semelhante àquele identificado como Cowpea mlld mottle virus (CPMMV), que causa a doença denominada de Necrose da Haste da Soja (VNHS). O CPMMV tem se espalhado rapidamente para as diversas regiões produtoras de soja, no Brasil, e é transmitido por mosca branca (Bemi.sia tabaci). O trabalho teve como objetivo verificar o nível de sintoma da planta cor-respondente à concentração relativa do vírus, determinada através da técnica de ELISA indireto, e a influencia da temperatura no aumento da concentração virai. Material o Métodos Plantas de soja das cvs. BRSMT Pintado e BRS 133, consideradas resisten- tes, e CD 206 e BRS 136, consideradas suscetíveis, foram inoculadas com suspensão viral, obtida a partir da maceração de tecido foliar sintomático, 11 Jornada Académica da Embrapa Soja 	 169 na presença de tampão fosfato de potássio 0,01M, pH7, utilizando carvão vegetal finamente moido como abrasivo. Após a inoculação, as plantas foram lavadas e mantidas em casa-de-vegetação, em temperatura de 28°C. As avaliações, quanto ao nível de sintoma (1 a 4), foram feitas 20 dias após a inoculação. O mesmo experimento foi repetido em condições de baixa temperatura (média 20°C). As folhas do trifólio imediatamente acima das folhas primárias, inoculadas, e as folhas do terceiro trifólio foram utilizadas, isoladamente, para o teste de Elisa. O teste de ELISA indireto (Koenig, 1981) foi feito utilizando anti-soro obtido pela imunização de coelhos com preparações purificadas do CPMMV. A imunoglobulina G (lgG) foi obtida após purificação do anti-soro. A diluição da lgG foi de 1:300. O extrato vegetal foi utilizado na diluição de 1:2500. Amostras de folhas de soja sadia foram utilizadas como controle negativo. As placas foram submetidas à leitura de absorbáncia em 405 nm, após 40 minutos da aplicação do substrato (p-nitrofenilfostato). Em outro experimento, procurou-se avaliar a concentração viral da planta aos 8, 16 e 32 dias após inoculação. O folíolo central de todos os trifólios, de cada planta inoculada, foi coletado e utilizado na análise. Resultados e Discussão Através do teste de ELISA, o VNHS foi quantificado, e, nos primeiros tri-fólios obtiveram-se as absorbãncias de 0,425, 0,257, 0,092 e 0,142, nas cultivares BRSMT Pintado, BRS 133, CD 206 e BRS 136, respectivamente. Nos trifólios mais novos, a absorbáncia foi de 0,565, 0,454, 0,362 e 0,370, em BRSMT Pintado, BRS 133, CD 206 e BRS 136, respectivamente. As plantas assintomáticas das cvs. BRSMT Pintado e BRS 133 possuíam maior concentração de vírus do que as plantas das cvs. suscetíveis (CD 206 e BRS 136). Assim, essas cultivares foram denominadas como tole-rantes ao CPMMV. Também constatou-se que, em baixas temperaturas, o nível dos sintomas aumentou nas plantas suscetiveis e nas tolerantes. Outro fato importante observado foi a maior concentração relativa de vírus nos trifólios mais novos. 170 	 Embrapa Soja. Documentos, 276 No experimento de diferentes épocas de coleta das folhas, constatou-se o inicio do declínio da concentração relativa de vírus aos 16 dias após a inoculação das plantas. O vírus causador da necrose da haste da soja é transmitido pela mos-ca-branca (Bemisia tabacO; no entanto, o controle do vetor é inviável. A melhor alternativa de controle é através de cultivares resistentesltoleran-tes. Avaliações de campo mostraram que algumas cultivares são assinto-máticas, enquanto outras apresentam recuperação. Dentre as cultivares assintomáticas, verificou-se a tolerância de BRSMT Pintado e BRS 133: Cultivares assintomáticas não podem ser consideradas resistentes, ne-cessitando diagnose para confirmação da presença de vírus. A concen-tração viral tende a diminuir nas plantas infectadas. Plantas suscetíveis não apresentaram recuperação e, entre 350 genótipos do banco ativo de germoplasma testados, nenhum foi resistente ou imune ao CPMMV. Refe rô n c ias ALMEIDA, A. M. R.; VLIET, H. van der.; KITAJIMA, E. W.; PIUGA, F. E., MARIN, S. R. R.; BINNECK, E.; NEPOMUCENO, A. L. Necrose da haste uma nova virose da soja, no Brasil. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE SOJA, 2.; MERCOSOJA 2002, 2002, Foz do lguaçu. Perspectivas do agronegócio da soja: resumos. Londrina: Embrapa Soja, 2002. p. 42. (Embrapa Soja. Documentos, 181). Organizado por Odilon Ferreira Saraiva, Clara Beatriz Hoffmann-Campo. KOENIG, R. lndirect ELISA methods for the broad specificity detection of plant viruses. Journal of Geneneral Virology, v. 55, p. 53-62, 1981. 

Tolerância ao Cowpea mild mottle virus e sua concentração relativa em soja.

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Tolerância ao Cowpea mild mottle virus e sua concentração relativa em soja.

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