CARVALHO, C. R. de

CLARINDO, W. R.

NUNES, A. C. P.

OLIVEIRA, S. C. de

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Estabilidade do nível de ploidia de plântulas de Jatropha curcas L. 'GONÇALO' propagadas in vitro.

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V Congresso Brasileiro de Mamona / II Simpósio Internacional de Oleaginosas Energéticas & I Fórum Capixaba de Pinhão Manso, Guarapari (ES) – 2012 CONGRESSO BRASILEIRO DE MAMONA, 5 ; SIMPÓSIO INTERNACIONAL DE OLEAGINOSAS ENERGÉTICAS, 2 & I FÓRUM CAPIXABA DE PINHÃO MANSO, 2012, Guarapari. Desafios e Oportunidades: Anais... Campina grande: Embrapa Algodão, 2012. p. 33.    ESTABILIDADE DO NÍVEL DE PLOIDIA DE PLÂNTULAS DE Jatropha curcas L. ‘GONÇALO’ PROPAGADAS IN VITRO   Stéfanie Cristina de Oliveira.1; Andrei Caíque Pires Nunes.2; Carlos Roberto de Carvalho.3;  Wellington Ronildo Clarindo.4 1. Mestranda em Produção Vegetal, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Espírito Santo (UFES) – oliveirascbio@yahoo.com.br; 2. Estudante de Engenharia Florestal, Universidade Federal do Espírito Santo (UFES) – andreicaique@yahoo.com.br; 3. Pesquisador/professor do Departamento de Biologia Geral, Centro de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Viçosa (UFV) – ccarvalh@ufv.com. 4. Pesquisador/professor do Departamento de Biologia, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Espírito Santo (UFES) – wellington.clarindo@ufes.br.   RESUMO - A variação somaclonal é o termo empregado para designar alterações genéticas (herdáveis) e epigenéticas (transitórias) decorrentes das condições in vitro. Esse fenômeno tem recebido grande atenção, visto que gera plântulas com características distintas em relação à doadora de explantes. Com base nesse fato, a variação somaclonal é indesejada quando o propósito é a propagação clonal, ou desejada por prover variantes para estabelecimento de bancos de germoplasma. Dentre as mudanças genéticas, destacam-se as alterações de ploidia (euploidias e aneuploidias), que podem ser rapidamente detectadas por meio da citometria de fluxo. O presente trabalho objetiva verificar possíveis variações de ploidia ocasionadas pelas condições físicas e, ou químicas do meio de cultura em plântulas de Jatropha curcas L. ‘Gonçalo’. Sementes de J. curcas foram germinadas em meio basal MS acrescido de 30 gL-1 de sacarose e 7gl-1 de ágar, pH 5,7. Após 30 dias de cultura as plântulas tiveram seus ápices caulinares excisados. Os mesmos foram inoculados em frascos contendo meio MS, acrescido de 0,5 mgL-1 de AIA, 2,0 mgL-1 de BAP, 100,0 mgl-1 de glutamina, 25,0 mgL-1 de sulfato de adenina, 30gL-1 de sacarose, 7gL-1 de ágar e o pH ajustado para 5,7. A cultura foi mantida em sala de cultivo com temperatura de 25° C ± 2 e fotoperíodo de 16 horas. Após 30 dias, folhas jovens das plântulas in vitro foram retiradas para verificação do nível de ploidia. Fragmentos foliares, com aproximadamente 2 cm2, de plântulas cultivadas in vitro (amostra) e em casa de vegetação (controle, 2x = 22 cromossomos, 2C = 0.85 pg) foram retalhados separadamente em placas de Petri contendo tampão DNA Staining Solution Partec. As suspensões foram filtradas, incubadas no escuro por 15 minutos, e posteriormente, analisadas em citômetro de fluxo Partec PAS (Partec Gmbh). O pico representativo dos núcleos G0/G1 das plantas controle foi ajustado no canal 200. Comparando a posição do pico representativo dos núcleos G0/G1 da amostra e do controle, o nível de ploidia de DNA de cada plântula propagada in vitro foi determinado. A metodologia de extração e coloração nuclear gerou quantidades suficientes de núcleos intactos, isolados e estequiometricamente corados. Consequentemente, os histogramas apresentaram coeficientes de variação inferiores a 5%. As plântulas cultivadas in vitro exibiram histogramas com picos de núcleos G0/G1 no mesmo canal em relação às plantas controle, inferindo assim, que esse material possui o nível de ploidia de DNA nuclear característico de diploides (2C = 2X). Portanto, o presente trabalho certificou que o meio de cultura utilizado é recomendável para propagação e multiplicação clonal de J. curcas. Além disso, a citometria de fluxo foi uma ferramenta importante no monitoramento de variação somaclonal, mais especificamente em variações de ploidia que podem refletir no desenvolvimento e diferenciação das plantas cultivadas.   Palavras-chave: Citometria de fluxo, variação somaclonal, meio de cultura.  Apoio: Universidade Federal do Espírito Santo, CAPES – bolsa de mestrado, Universidade Federal de Viçosa.  

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/931157/1/BIT009O.142.pdf

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