ANDRIOLI, A. A.

ARAÚJO, J. F.

AZEVEDO, D. A. A. de

PINHEIRO, R. R.

SIDER, L. H.

SOUSA, A. L. M. de

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63II Encontro de Iniciação Científica da Embrapa Caprinos e OvinosPERFIL IMUNOGÊNICO BIDIMENSIONAL DEANTÍGENO DA ARTRITE ENCEFALITECAPRINA PRODUZIDO COM CEPA NATIVADO ESTADO DO CEARÁSousa, Ana Lídia Madeira de ¹; Azevedo, Dalva Alana Aragão de²; Araújo,Juscilânia Furtado³; Andrioli, Alice4; Sider, Lúcia Helena4; Pinheiro,Raymundo Rizaldo5.1 Aluna do curso de Biologia bacharelado da Universidade Estadual Vale do Acaraú – UVA,bolsista da Fundação Cearense de  Apoio à pesquisa - FUNCAP;2 Mestranda em Zootecnia, Programa de pós-graduação da Universidade Estadual Vale do Acaraú– UVA/Embrapa caprinos e ovinos ;3 Aluna do curso de Biologia bacharelado da UVA, bolsista PIBIC/CNPq - Embrapa caprinos eovinos;4 Pesquisadora Embrapa Caprinos e Ovinos.5Pesquisador da Embrapa Caprinos e Ovinos, Orientador.* Apresentador do pôster, e-mail: bio.analidia@gmail.comO Western Blot (WB) é um teste de imunodiagnóstico indireto, quepossui eficiência na detecção de anticorpo viral presente no sangue deanimais infectados por Lentiviroses de Pequenos Ruminantes (LVPR).Seu princípio consiste na separação das proteínas virais, através datécnica de eletroforese, transferência para membrana e realização dereação imunoenzimática. Este estudo avaliou o perfil imunogênico doantígeno da Artrite Encefalite Caprina (CAE), produzido com cepaoriunda do Estado do Ceará, utilizando a técnica do WB bidimensional(WB-2D). A produção de antígeno foi realizada através de cultivo decélulas de membrana sinovial caprina infectadas com o vírussupracitado. O sobrenadante produzido foi submetido à precipitaçãocom PEG 8000 e depois ultracentrifugado em colchão de sacarose.Reidratou-se as strips de 13 cm com faixa de pH de 3-10, com antígenopor 16 horas, seguida da focalização isoelétrica, por cerca de seishoras. Após a focalização, foram armazenadas em freezer a -80ºC.64 II Encontro de Iniciação Científica da Embrapa Caprinos e OvinosPosteriormente, as strips foram submetidas à eletroforese (SDS-PAGE)em gel de poliacrilamida a 12,5%. O gel foi então transferido por meiopassivo para membrana de nitrocelulose (MN).  A MN foi bloqueadacom PBS-Tween 0,3% por 60 minutos. O soro positivo do kit america-no (CAE/OPP Antibody Test Kit, Veterinary Diagnostic Technology, Inc?,USA) foi incubado por 30 minutos à 37°C. Lavou-se por 3 vezes durante5 minutos, cada. Colocou-se o conjugado (coelho anti cabra –peroxidase) diluído 1:12000, por 60 minutos. Lavou-se com PBS-Tween0,05% por 3 vezes e com PBS puro por 2 vezes, durante 5 minutos,cada. Revelou-se com a mistura de DAB (0,1% em PBS) a uma soluçãode 4-cloronaphtol (0,5%), metanol (20%) em PBS e mais a adição deH2O2 (0,04%), por 10 a 15 minutos. Após a revelação, foram observadosdiversos spots com resposta imunogênica, os quais variaram emvalores de massa molecular e pH, difundidos em caráter básico, neutroe ácido. Apresentaram-se reativos no WB-2D, spots que possivelmentereferir-se as proteínas imunogênicas do WD-1D: gp135, gp45, p28, p19 ep15. Cerca de 12 spots apresentaram reação imunogênica, a maioriadesses se encontram na mesma faixa de peso molecular da proteínap28, porém em valores de pH diferentes. O uso do WB-2D permitiu adeterminação do perfil de massa molecular e ponto isoelétrico dasproteínas imunogênicas do CAEV cepa nativa cearense.  O teste reve-lou que proteínas em mesma faixa de massa molecular podem apre-sentar PI diferentes o que provavelmente possa referir-se a diferentesepitopos do antígeno.Palavras-chave: Caprinos, lentivirose, imunodiagnostico, eletroforese2D.Suporte financeiro: Embrapa, CNPq, FUNCAP, Banco do Nordeste.

Perfil imunogênico bidimensional de antígeno da artrite encefalite caprina produzido com cepa nativa do estado do Ceará.

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