CARRÃO-PANIZZI, M. C.

CRANCIANINOV, W. S.

FREITAS, A. M.

MANDARINO, J. M. G.

SANTANA, A. C.

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Jornada académica da Embrapa So/a 	 169 Comparação entre dois métodos para a extração de isoflavonas em cultivares de soja Wladimir S. Crancianinov 1 ; Adriana M. Freitas 1 ; Andreia C. Santana 1 ; José Marcos Gontijo Mandarino 2 ; Mercedes Concórdia Carrão-Panizzi 2 . 1 UEL; 2 Embrapa Soja. Introdução As isoflavonas são compostos de baixo peso molecular, metabólitos se-cundários de plantas, pertencentes ao grupo do flavonõides e que pos-suem três anéis benzeno ligados (RHODES, 1996). Os diferentes radi-cais ligados a estes anéis dão origem a doze formas de isoflavonas, divididas em quatros grupos: as formas malonil, as formas acetil, os glicosídeos e as agliconas. As diferentes conformações desses radicais em cada grupo, originam as diversas formas das isoflavonas daidzina, genistina, glicitina e ainda as agliconas daidzeína, genisteína e gliciteina (PARK et ai., 2001). As formas malonil são as mais abundantes na soja in natura, quando os grãos são submetidos a processamentos com alta temperatura e pres-são, estas formas são convertidas nas formas acetil, e estas, nas formas glicosídicas (PARK et aL, 2001). Os processos fermentativos podem con-verter os glicosideos as formas agliconas, devido ao aumento na ativida-de da enzima b-glicosidades (CARRÁO-PANIZZI, MC.; BORDIGNON, J.R., 2000). As características genéticas da semente bem como as condi-ções climáticas (temperatura), influenciam no teor de isoflavonas nos grãos. Sua síntese ocorre por volta de 35 dias após o florescimento e, aos 50 dias, ocorre um aumento na síntese de genistina e malonil-genistina. En-tretanto, as formas daidzina e malonii-daidzina estão presentes em altas concentrações durante todo o período de maturação das sementes (CARRÁO-PAN1ZZ1, et ai. 1999). As isofiavonas concentram-se no hipocótilo da semente e não são encontradas no tegumento. As isoflavonas têm estrutura química semelhante à do hormônio estrógeno sendo, por- 170 	 Embrapa So/a. Documentos. 268 tanto, eficazes no alívio dos sintomas do climatério (menopausa) e na redução dos riscos de câncer hormônio dependentes, como os cânceres de mama, colo de útero e próstata (MESSINA et aL, 1994) O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos para a extração das isoflavonas presentes nas sementes de soja e sua subseqüente quantificação por cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE). Materiais e Métodos Para tanto foi utilizada a cultivar BRS 213 produzida nos campos expe-rimentais da Embrapa Soja em Londrina, PR. Foram comparados os métodos de extração com Metanol:DMSO (8:2) e Etanol com 0,1% de ácido acético. No procedimento de extração das isoflavonas foram rea-lizadas as seguintes variações: tempo de extração (uma hora e 17 ho-ras), natureza da amostra (integral e desengordurada).A separação e quantificação das isoflavonas foram realizadas em coluna de fase reversa do tipo ODS 018 (YMC Pack ODS-AM Columm) utilizando-se um cromatógrafo liquido da marca Waters, modelo 2690, com injetor auto-mático de amostras. Para a separação das isoflavonas foi utilizado o sistema de gradiente linear binário tendo-se como fases móveis metanol contendo 0,025% de ácido TFA (ácido trifluoroacético) (solvente A) e de H 2 0 destilada deionizada ultrapura contendo 0,025% ácido TFA (solvente 3). A condição inicial do gradiente foi de 20% para o solvente A, atingin-do-se 100% em 40 min e retornando à 20% novamente a 41 mm. o tempo total de corrida foi de 60 mm. O fluxo da fase móvel foi de 1 mL/ min e a temperatura durante a corrida foi de 25 ÚC. Para a detecção das isoflavonas foi utilizado o detector de arranjo de foto diodo da marca Waters, modelo 996, ajustado para o comprimento de onda de 260 nm. Para a identificação das isoflavonas foi utilizada uma mistura dos pa-drões de daidzina, daidzejna, genistina e genisteína da marca Sigma. Esta solução foi preparada em metanol contendo um mix dos glicosídeos nas seguintes concentrações: 0,00625 mg/mL; 0,0125 mg/mL; 0,0250 mg/mL; 0,0500 mglmL e 0,1000 mg/mL. A quantificação das isoflavonas por padronização externa (área dos picos) foi realizada utilizando os padrões como referência. Jornada académica da Embrapa Soja 	 771 Resultados e Discussão Na comparação entre os métodos, a modificação no tempo de extração de uma hora para 17 horas com o extrator de etanol 0,1% de ácido acético não mostrou diferença na extração das isoflavonas. Portanto, não se faz necessário aumentar o tempo de extração, quando este método é utiliza-do. Também não houve diferenças significativas quando foram utilizadas amostras desengordurada ou integral. Entretanto, durante a análise cromatográfica, o ruido de fundo foi menor quando se utilizou amostra desengordurada, causando portanto menos danos à coluna. Portando o método mais eficiente para extração das isoflavonas foi de Gões-Favoni et ai., 2001 com 1 hora de extração e amostra desengordurada.Entretanto, para que a análises seja realizada de maneira mais rápida e sem prejuízo na extração das isofiavonas pode ser utilizada amostra integral, com a ressalva de que este procedimento pode diminuir a vida útil da coluna. Referências Bibliográficas BERHOW, M. A. Modern analytical techniques for flavonoid determination. In: BUSLIG, B. S.; MANTHEY, J. A. (ed.). Flavonoids in the living ceil. NewYork: KlusherAcademic, 2002. p.61-76. (Adv. Exp. Méd. Biol. v. 505). CARRÃO-PANIZZI, MC.; BELÉIA, A. D. R; KITAMURA, K.; OLIVEIRA, M.C.N. Effects of genetics and environment on isoflavone content of soybean from different regions of BrazH.. Pesquisa Agropecuária Brasi-leira, Brasilia, v. 34, n. 10, p. 1787-1 795, 1999. CARRÁO-PANIZZI, MC.; BORDIGNON, J.R. Activity of beta-glucosidase and leveis of isoflavone glucosides in soybean cultivars affected by the environment. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasilia, v. 35, n.5, p. 873-878, 2000. GÓES-FAVONI, S.R; CARRÁO-PANIZZI, MC.; KIKUCHI, A. Isoflavonas da soja: extração e determinação. ln: SIMPÓSIO LATINO AMERICANO DE CIÊNCIA DE ALIMENTOS, 4., 2001, Campinas. Resumos... Campi-nas: SBCTA, 2001. p. 66. 172 	Embrapa Soja. Documentos, 268 MESSINA, M.; MESSINA, V.; SETCHELL, K. The simple soybean and your health. New York: Avery, 1994. 260 p. RHODES, M.J.C. Physiologically-active compounds in plant foods: an overview. Proceedings of The Nutrition Society, Cambridge, v.55, n. 113, p.371-384, 1996. PARK, Y.K.; AGUIAR, L.C.; ALENCAR, S.M.; MASCARENHAS, H.A.A.; SCAMPARINI, A.R.P. Avaliação do teor de isoflavonas em soja brasileira. Ciência e Tecnologia de Alimentos, Campinas, v.3, n.3, p. 156-1 60, 2001. 

Comparação entre dois métodos para a extração de isoflavonas em cultivares de soja.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/469405/1/ID26420.pdf

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