A cultura da banana tem uma elevada importância econômica e social em todo o mundo. Constitui o quarto produto alimentar mais produzido no planeta, precedido pelo arroz, trigo e milho, e em muitos países é a principal fonte de arrecadação e geradora de emprego e renda para uma parte expressiva da população (VIEIRA, 2009)

AMORIM, E. P.

AMORIM, T. B. do

FERREIRA, C. F.

LEDO, C. A. da S.

PEIXOUTO, Y. S.

ROQUE, R. de L.

RCAAP - Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal

Diversidade genética entre genótipos de bananera por meio de marcadores SSR.

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   1 Bióloga., estudante de pós-graduação, Universidade Federal do Recôncavo da Bahia-BA, e-mail: rafaella_roque@hotmail.com 2 Eng, Agr., estudante de graduação, Universidade Federal do Recôncavo da Bahia-BA, e-mail: tamyufrb@yahoo.com.br 3 Eng, Agr., pesquisador Embrapa Mandioca e Fruticultura-BA, e-mail: claudiaf@cnpmf.embrapa.br   DIVERSIDADE GENÉTICA ENTRE GENÓTIPOS DE BANANERA POR MEIO DE MARCADORES SSR. RAFAELLA DE LIMA ROQUE1; TAMYRES BARBOSA DO AMORIM2; YSLAI SILVA PEIXOUTO1; CLÁUDIA FORTES FERREIRA3; EDSON PERITO AMORIM3; CARLOS ALBERTO DA SILVA LEDO3 INTRODUÇÃO A cultura da banana tem uma elevada importância econômica e social em todo o mundo. Constitui o quarto produto alimentar mais produzido no planeta, precedido pelo arroz, trigo e milho, e em muitos países é a principal fonte de arrecadação e geradora de emprego e renda para uma parte expressiva da população (VIEIRA, 2009).  O uso de marcadores moleculares pode fornecer informações úteis para o melhorista de plantas, entre eles: escolha de genitores que produzam indivíduos com a combinação de alelos favoráveis, e a quantificação da variabilidade genética existente no germoplasma em uso pelo programa de melhoramento. Assim, essas técnicas cooperam significativamente para o conhecimento básico da cultura, do caráter estudado, e para a geração e desenvolvimento de genótipos melhorados (FERREIRA; GRATTAPAGLIA, 1998).  Dentre os marcadores existentes, os microssatélites têm sido considerados os ideais para a caracterização e avaliação da variabilidade genética em Musa, pois são co-dominates, multialélicos, reprodutíveis e amplificados via PCR (GRAPIN et al., 1998). Desta forma objetivou-se com esse trabalho estimar a variabilidade genética entre 22 genótipos de bananeira, por meio de marcadores moleculares microssatélites.  MATERIAL E MÉTODOS O trabalho foi conduzido no Laboratório de Biologia Molecular da Embrapa Mandioca e Fruticultura em Cruz das Almas – BA. Na avaliação de polimorfismo foram usados 22 genótipos de bananeira (Pacovan Ken, Pacovan, Tropical, Garantida, Enxerto, Japira, Bucaneiro, Princesa, Caipira, FHIA 17, YB4217, Preciosa, YB4203, YB4247, FHIA 23, Maravilha, PA9401, Calipso, Grande Naine, FHIA 18, Prata Anã, Maçã), empregando oito primers microssatélites (Simple Sequene Repeat - SSR). O DNA genômico foi extraído de folhas jovens, com uso do método CTAB (DOYLE; DOYLE, 1990). A avaliação da quantidade e da qualidade do DNA foi realizada pela 4676análise comparativa das amostras em gel de agarose 1%, corado com brometo de etídio, e as amostras foram diluídas em TE e padronizadas em 4 ng μL-1. As reações de amplificação via PCR foram completadas para o volume final de 15 µL, contendo: KCl 50 mM, Tris-HCl 10 mM (pH 8,3), MgCl2 2,5 mM, 100 µM de cada um dos dNTPs (dATP, dTTP, dGTP, dCTP), 0,2 µM de cada primer, 50 ng de DNA genômico e uma Unidade de Taq DNA polimerase (Pharmacia Biotech, EUA).  As amplificações foram conduzidas em termociclador Perkin Elmer, modelo 9700, utilizando-se  temperatura de anelamento específica para cada primer. A condição de amplificação incluiu um ciclo de desnaturação de 3min a 94°C, seguido de 30 ciclos de desnaturação de 40 s a 94°C,  40 s de anelamento com a temperatura específica de cada primer, 1 min de extensão a 72°C, finalizando com uma extensão final de 4 min a 72°C (Tabela 1). Tabela 1 - Locos microssatélites (SSR), iniciadores, tamanho esperado do alelo em pares de bases (pb), temperatura de  anelamento (TA) de todos os iniciadores utilizados no estudo, referência dos iniciadores.                     Após a amplificação, os produtos foram separados em gel de agarose ultrapura Invitrogem a 3%, corados com brometo de etídio (1,0 μg mL -1). Como padrão de peso molecular foi utilizado o marcador Ludwig 50pb (Ludwig Biotecnologia LTDA).  Para a estimativa das frequências alélicas, Conteúdo de Informação Polimórfica (PIC) e número de alelos por loco (A), utilizou-se o programa PowerMarker versão 3.25 (LIU; MUSE, 2005). A genotipagem foi  realizada com base no número de pares de base do fragmento. RESULTADOS E DISCUSSÃO Na análise de microssatélites, todos os primers utilizados no estudo apresentaram polimorfismo, sendo que o número de alelos obtidos foram  19, com média de 2,4 por primer. Como observado na Tabela 2, o maior número de alelos foi identificado nos primers  Ma 1/24 e MaOCEN 1, apresentando 4 e 3 alelos respectivamente, o restante dos primers apresentaram 2 LOCO SSR Primer 5’- 3’ ALELOS (PB) TA Referência CNPMF5 F: CCCTGACAGATCCTTTGTGG 250 56° Amorim et al. (2012)  R: GGAGACTTCCACCTTTTCCG    MASR166 F: CGAGTCCGAAGTCGCTTCTA 138 56° Sem referência  R: TTGAGCTTGTGCCTCCTTTT    MASR 160 F: ATAAGGGGAGAGAGAAGCCG 327 56° Sem referência  R: TAGCAAAATCATTGCTTGCG    MaOCEN 1 F: TCTCAGGAAGGGCAACAATC 244 59° Creste et al. (2006)  R: GGACCAAAGGGAAAGAAACC    MASR 149 F: TCGTCAGGTCTGTATGCGAG 143 59° Sem referência  R: GGACCAAAGGGAAAGAAACC    Ma 1/24 F: GAGCCCATTAAGCTGAACA 172 60° Crouch et al. (1998)  R: CCGACAGTCAACATACAATACA    AGMI 101/102 F: TGCAGTTGACAAACCCCACACA 189 54° Lagoda et al. (1998)  TTGGGAAGGAAAATAAGAAGATAGA    AGMI 103/104 F: ACAGAATCGCTAACCCTAATCCTCA 181 59° Lagoda et al (1998)  R: CCCTTTGCGTGCCCCTAA    4677 Maçã Caipira Maravilha Prata Anã Pacovan Garantida Enxerto Japira PacovanKen Preciosa Tropical YB4217 YB4247 Princesa YB4203 Fhia17 PA9401 Fhia18 GrandeNaine Bucaneiro Calipso Fhia230.000.020.040.060.080.100.12alelos. O conteúdo de informação de polimorfismo (PIC) variou de 0,23 (MASR 160) a 0,55 (MaOCEN 1).  Tabela 2. Locos microssatélites SSR, frequência alélica, número de alelos e conteúdo de informação de polimorfismo (PIC).        O dendrograma das similaridades genéticas baseada em SSR, obtido pelo método UPGMA, encontra-se abaixo na Figura 1.          Figura 1 - Similaridade genética entre 21 genótipos de bananeira, obtida a partir do método UPGMA pelo índice de diversidade de Nei 1973.   A partir do dendrograma foi possível observar o agrupamento dos genótipos tipo prata, como: Maravilha, Prata Anã, Pacovan, Garantida, Enxerto, Japira, Pacovan Ken, Preciosa com exceção, da FHIA 18 e PA9401 que se agruparam separadamente. As variedades com código YB, Tropical e Princesa são oriundos de Yangambi Km 5 e possuem os mesmos parentais (Yangambi n°2 e o diploide M53), fato que justifica a união no dendrograma. LOCO SSR FREQ. ALÉLICA N° DE ALELOS PIC CNPMF5 0,6590 2 0,3484 MASR166 0,5454 2 0,3729 MASR 160 0,8409 2 0,2317 MaOCEN 1 0,4090 3 0,5540 MASR 149 0,6818 2 0,3397 Ma 1/24 0,6363 4 0,4319 AGMI 101/102 0,5454 2 0,3729 AGMI 103/104 0,6818 2 0,33975 Mean 0,625 2,375 0,37394 4678Os tetraploides Bucaneiro e Calipso estabeleceram o último agrupamento estes, se agruparam em virtude do seu alto grau de parentesco, uma vez que são híbridos com o mesmo parental feminino (Highgate), junto a esse grupo encontra-se FHIA 23, esse fato se justifica uma vez que todas integram o subgrupo Gros Michel.  Os resultados apontaram um alto polimorfismo, a existência dessa variabilidade genética poderá ser explorada na escolha de genitores em cruzamentos visando à obtenção de variedades cada vez mais resistentes a doenças. CONCLUSÃO Os marcadores SSR são eficientes para agrupar genótipos de acordo com sua genealogia. Além disso, existe variabilidade genética entre os genótipos avaliados, fato que permite o melhoramento genético e o desenvolvimento de novas cultivares por meio da hibridação com diploides.  REFERÊNCIAS AMORIM, E.P.; SILVA, P.H.; FERREIRA, C.F. New microsatellite markers for bananas (Musa spp). Genetics and Molecular Research, v. 11, n.2, p. 1093-1098, 2012.  CRESTE, S.; BENATTI, T.; ORSI, M.R.; RISTERUCCI, A.M.; FIGUEIRA, A. Isolation and characterization of microsatellite loci from a commercial cultivar of Musa acuminata. Molecular Ecology Notes, Oxford, v. 6, n.2, p.303-306, 2006.   CROUCH, H.K.; CROUCH, J.H.; JARRET, R.L. et al.  Segregation at microsatellite loci in haploid and diploid gametes of Musa.  Crop Science, Madison, v.38, n.1, p.211-217, 1998. DOYLE, J.J.; DOYLE, J.L. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus, v.12, p.13-15, 1990. FERREIRA, M.E.; GRATTAPAGLIA, D. Introdução ao uso de marcadores moleculares em análise genética. 2. ed. 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Diversidade genética entre genótipos de bananeira por meio de marcadores SSR.

Diversidade genética entre genótipos de bananera por meio de marcadores SSR.

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