ANDRIOLI, A.

ARAÚJO, J. F.

AZEVEDO, D. A. A. de

PINHEIRO, R. R.

SOUSA, A. L. M. de

SOUZA, T. S. de

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55I Encontro de Iniciação Científica da Embrapa Caprinos e OvinosTITULAÇÃO DE LENTIVÍRUS DE PEQUENOSRUMINANTES ATRAVÉS DO CULTIVO DECÉLULAS DE MEMBRANA NICTITANTE CAPRINASousa, Ana Lídia Madeira de¹*; Araújo, Juscilânia Furtado²; Azevedo,Dalva Alana Aragão de³; Souza, Tiago Sampaio de4; Andrioli, Alice5;Pinheiro, Raymundo Rizaldo61Discente do curso de Biologia bacharelado da Universidade Estadual Vale do Acaraú  UVA, bolsista daFundação de Apoio a Pesquisa no Ceará  FUNCAP.2Discente do curso de biologia bacharelado da UVA  estagiaria da Embrapa Caprinos e Ovinos.3Discente do curso de Biologia licenciatura da UVA, bolsista PIBIC/CNPq - Embrapa Caprinos e Ovinos.4Doutorando em Ciência Animal nos Trópicos, Universidade Federal da Bahia - UFBA.5Pesquisadora Embrapa Caprinos e Ovinos.6Pesquisador da Embrapa Caprinos e Ovinos, Orientador, Bolsista de Produtividade do CNPq.*Apresentador do pôster: bio.analidia@gmail.comOs pequenos ruminantes podem ser infectados por lentiviroses. Nosanimais afetados, a doença é multissistêmica, progressiva e crônica. Asprincipais manifestações clínicas incluem: pneumonia intersticial,encefalite, artrite, mastite e emagrecimento progressivo que podemocorrer de forma isolada ou simultânea. Esse processo infeccioso érealizado in vitro através de cultivo celular de tecidos e células que sãonaturalmente infectados pelo vírus no animal (in vivo) para uma produçãode antígeno satisfatória para os testes sorológicos. Assim, deve-se sabero título do inóculo viral, o qual é definido como a recíproca da maior diluiçãoque apresentar, 14 dias após inoculação, sincícios em 50% dos poçosinoculados, correspondendo a uma dose formadora de sincício (DFS). Oprocesso de titulação é essencialmente utilizado para especificar qual amaior diluição capaz de provocar reação específica nas células inoculadaspelo agente infeccioso e informa também a quantidade aproximada departículas virais presente no material. A pesquisa foi desenvolvida naEMBRAPA Caprinos e Ovinos, onde se utilizou um cabrito para o explant56 I Encontro de Iniciação Científica da Embrapa Caprinos e Ovinosdas células de Membrana Nictitante (MN) e realização do cultivo celular.Após a confluência dos explant, foi feito o processo de subcultivo por meiode tripsinização e inoculação pela cepa viral CAEV CORK. Após, osobrenadante foi coletado e destinado a diluições seriadas de 10-1 a 10-10 elevado às placas de 96 poços com células de MN, mantidas em estufa deCO2 por 14 dias. As placas foram coradas com cristal violeta, realizando-se leitura em busca de efeitos citopáticos virais. Na placa inoculada,observaram-se sincícios contendo mais de quatro núcleos nos poços comas diluições entre 10-1 a 10-3. Já para a diluição de 10-4, verificou somentedois poços positivos e na de 10-5, apenas um poço possuía sincício.Calculou-se o título viral obtendo, 104,2 TCID50/mL. Em seguida, houve acomparação dos títulos virais encontrados em referencial teórico, onde acepa CAEV CORK possui titulo viral de 104,8 TCID50/mL e o obtido noexperimento de 104,2 TCID50/mL.  Com a titulação realizada, foi possívelestabelecer a diluição necessária que produza efeitos citopáticosconsequentes da infecção viral, como a morte celular acentuada, a presen-ça de sincício e de vacúolos nas células infectadas. Com essas caracterís-ticas, se alcança uma produção de antígeno eficaz para os testessorológicos na detecção das lentiviroses caprinas.Palavras-chave: Caprino, lentivírus, titulação, antígeno.Suporte financeiro: Embrapa, CNPq, FUNCAP, Banco do Nordeste.

Titulação de lentivírus de pequenos ruminantes através do cultivo de células de membrana nictitante caprina.

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/938551/1/racTitulacaodelentivirus.pdf

Titulação de lentivírus de pequenos ruminantes através do cultivo de células de membrana nictitante caprina.

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