FILHO, J. A.

HOFFMANN-CAMPO, C. B.

KAWASSAKI, N. F. C.

KUNZ, E. T.

SALVADOR, M. C.

SILVA, S. H.

Repository Open Access to Scientific Information from Embrapa

Quantificação de Rutina e Genistina e Identificação de Metabólitos Secundários em Raízes e Folhas de SojaKAWASSAKI N.F.C.1,2, SALVADOR M.C.2, SILVA S.H.2, KUNZ E.T.2, FILHO J.A2, HOFFMANN-CAMPO C.B 2 1 Universidade Norte do Paraná- UNOPAR, nat@cnpso.embrapa.br 2Embrapa Soja, Caixa Postal 231, 86001-970, Londrina-PR.Os metabólitos derivados de fenilpropanóides são extensamente distri-buídos no reino vegetal. Estão relacionados à proteção de plantas contra insetos, patógenos e raios ultravioletas, bem como na determinação das cores de flores e atração de insetos polinizadores. Devido à sua estrutu-ra diversificada e distribuição complexa, diversos papéis lhes têm sido atribuído, incluindo a possível atuação na regulação do crescimento e desenvolvimento dos vegetais (Graham, 1991). Em soja, flavonóides fo-ram identificados em diversas partes de genótipos da planta (Hoffmann-Campo, 1995). O objetivo deste trabalho foi identificar flavonóides em diferentes fases do desenvolvimento da soja e quantificar a rutina e a genistina nas culti-vares escolhidas.Os genótipos com característica de resistência a insetos (PI 227687, PI 274454 e Dowling) e ‘BR-16’ (suscetível) foram semeados com três repetições cada um, em casa-de-vegetação, na Embrapa Soja, Londrina - PR, em vasos de cinco litros, na quantidade de 12 sementes por vaso. Após o desbaste, deixaram-se apenas cinco plantas por vaso. No está-dio V5 foram retiradas três plantas por genótipo, sendo uma planta por vaso, escolhida aleatoriamente. No laboratório, as folhas frescas, sepa-radas por estádios de desenvolvimento (V1, V2, V3, V4 e V5), e mais a raiz foram pesadas em balança analítica, com auxílio de um vidro de 220 Embrapa Soja. Documentos, 297relógio. Após a pesagem, foram maceradas com nitrogênio líquido, em cadinho de porcelana; o macerado foi transferido para tubos de vidro onde se adicionou metanol-80 %, na proporção de cinco vezes o volume do solvente para a massa da amostra. Os extratos foram deixados no ultrassom por 20 minutos e, em seguida, secos em nitrogênio gasoso. As amostras foram ressolubilizadas em 1 mL de MeOH-80 % e retorna-das ao ultrassom para completar a dissolução. A seguir, foram filtradas com membrana de nylon, com poros de 0,45 µm e diâmetro de 13 mm, e logo transferidas para frascos de amostrador automático para HPLC. Uma alíquota de 10 µL foi injetada em cromatógrafo líquido, equipado com coluna C18 de fase reversa, de 250 mm de comprimento e 4,6 mm de diâmetro interno, com tamanho de partícula de 5 micra. O mé-todo utilizado foi com a fase móvel constituída de ácido acético (HOAc) a  2 % (C) e metanol, ácido acético e água, na proporção de 18:1:1 (MeOH:HOAc:H2O)  (A). O sistema inicial do gradiente foi composto de 75 % de C e 25 % de A. Aos 40 minutos, o sistema inverteu-se e, com 45 minutos, voltou à situação inicial, aí permanecendo até completar 50 minutos de corrida. O fluxo do solvente foi de 1 mL/min. e a absorção de UV foi medida a 260 nm. Os padrões de flavonóides utilizados foram rutina	(quercetina	3-O-raminoglicosideo)	e	genistina	(genisteina,7-O-β-D-glicosideo). Para obtenção das áreas das substâncias padrões, três concentrações de rutina (0,01, 0,02 e 0,04) e cinco de genistina (0,01, 0,02, 0,04, 0,08 e 0,16), todas em mg/mL, foram injetadas no equipa-mento, conforme descrito acima. Com as áreas das substâncias-padrão, em suas respectivas concentrações, foi construído um gráfico de disper-são e obtida a equação de regressão linear correspondente. Injetadas as amostras e determinadas as áreas, as concentrações das substâncias (mg/g), em cada genótipo, foram determinadas por meio da referida cur-va de calibração. Nas folhas dos genótipos estudados, pôde-se observar a presença das seguintes substâncias (Tabela 1).Na raiz de todos os genótipos foram encontradas daidzina, coumestrol, genistina, malonil-daidzina, malonil-genistina, daidzeína e genisteína.221III Jornada Acadêmica da Embrapa SojaComparando-se os genótipos, observou-se que a PI227687 apresentou a maior concentração de rutina em mg/g (Fig.1). Houve, também, diferen-ça na concentração dessa substância quanto aos estádios de desenvol-vimento: o estádio V5 apresentou maior concentração (0,1957 ± 0,05) ) em relação aos estádios V3 e V4 (0,0837± 0,06; 0,0769 ± 0,01) respectivamente. O genótipo PI274454 apresentou baixa concentração nos diferentes estádios de desenvolvimento, e esse resultado confirma os obtidos por Piubelli (2004). Tabela 1. Identificação das substâncias encontradas nas folhas das cultivares. (+) presença da substânciaGenótipos Substâncias  BR-16 PI227687 PI274454 Dowling Canferol  + + + +Daidzina + + + +Daidzeína +Genistina + + +Gliciteína + + + +Malonil daidzina + + + +Malonil genistina + + + +Rutina + +Fig. 1. Concentração comparada de rutina (mg/g) entre PI 227687 e PI 274454 em diferentes estádios de desenvolvimento.Rutina mg/g00.050.10.150.20.250.3V1 V2 V3 V4 V5EstádiosConcentraçãoPI227 PI 274222 Embrapa Soja. Documentos, 297Fig. 2. Concentração comparada de genistina (mg/g) entre Dowling, PI 227687 e PI 274454 em diferentes estádios de desenvolvimento.Genistina mg/g00.010.020.030.040.050.060.07V1 V2 V3 V4 V5 RaizEstádiosConcentraçãoPI 227PI 274DowlingEm relação à genistina, foram observadas diferentes concentrações, nos genótipos analisados (Fig. 2). A Dowling apresentou no estádio V5 a maior concentração (0,0554 ± 0,006) dessa substância. Na BR-16 não foram encontradas rutina e genistina nas folhas.A cultivar BR-16 (suscetível) apresentou o menor número de subs-tâncias, comparativamente aos genótipos considerados resistentes. Genistina e rutina não foram observadas nessa cultivar sugerindo a possibilidade de que a característica de resistência observada nos outros genótipos possa ser decorrente de efeito acumulativo de dois ou mais compostos. Essa hipótese reforça igualmente a possibilidade de que o melhoramento da soja, realizado na maioria das vezes visando à obten-ção de características agronômicas, tais como o aumento de produtivi-dade, não priorize a resistência aos insetos e, com isso, praticamente elimine substâncias secundárias de defesa da planta. ReferênciasGRAHAM, T.L. Flavonoid and isoflavonoid distribution in develo-ping soyabean seedling tissues and in seed and root exudates. Plant Physiology. v. 95, p. 594-603, 1991.HOFFMANN-CAMPO, C. B. Role of the flavonoids in the natural resis-tance of soyabean to Heliothis virencis (F.) and Trichoplusia ni (Hübner). 1995. 165 f. Dissertation ( Ph.D) – The University of Reading, Reading.223III Jornada Acadêmica da Embrapa SojaPIUBELLI, G. C. Bioatividade de genótipos da soja resistentes a Anticarsia gemmatalis Hübner ( Lepidoptera: Noctuidae) e interações de suas substâncias químicas com inimigos naturais. 2004. 126 f. Tese (Doutorado em Entomologia) - Universidade Federal do Paraná, Curitiba.

Quantificação de rutina e genistina e identificação de metabólltos secundários em raízes e folhas de soja.

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repository Open Access to Scientific Information from Embrapa

RCAAP - Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal