ABDELNOOR, R. V.

MARIN, S. R.

SANTOS, J. V. M. dos

SILVA, D. C. G. da

SILVEIRA, C. A. da

SOUZA, L. G. de

YAMANAKA, N.

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Saturação de Regiões Genômicas da Soja Associadas a Genes de Resistência à Ferrugem AsiáticaSOUZA, L.G. DE1,3 ;   SILVA, D.C.G.2 DA ; SILVEIRA,C.A.DA3 ; MARIN, S.R.3 ; SANTOS, J.V.M. DOS4,3 ; YAMANAKA, N.5 ; ABDELNOOR, R.V.3 ; 1Centro Universitário Filadélfia – UNIFIL, CEP 86020-000, Londrina-Pr, luanags@cnpso.embrapa.br; 2 Universidade Estadual Paulista, Campus Jaboticabal – UNESP – Jaboticabal ; 3Embrapa Soja ; 4Universidade Estadual do Norte do Paraná, Campus Faculdade Luiz Meneghel – FFALM ; 5Japan International Research Center for Agricultural Sciences – JIRCAS.A principal doença que acomete a produção de soja no Brasil é a ferrugem asiática, causada pelo fungo Phakopsora pachyrhizi Sydow & Sydow. (Tecnologias,2006). A ferrugem asiática tem causado sérios prejuízos e um aumento de custos decorrente do uso de defensivos químicos para o seu controle. Uma alternativa de controle econômico e efetivo é a obtenção de cultivares com alta resistência e produtividade (Tan et al, 1983). Associado a isso faz-se necessário a identificação de marcadores moleculares ligados aos genes de resistência à ferrugem asiática. Hoje, existem informações disponíveis na literatura a respeito de quatro genes de resistência à ferrugem asiática: Rpp1 (identificado na PI 200692), Rpp2 (PI 230970), Rpp3 (PI 462312), e Rpp4 (PI 459025) (Bromfield & Hartwig,1980; Hartwig, 1986). Foram identificados genes de resistência em outros genótipos como o FT-2, uma cultivar brasileira. Todos esses genes eram efetivos quando a doença foi descoberta no Brasil, entretanto, em 2003, houve uma quebra da resistência conferida pelos genes Rpp1, Rpp3 e pelo lócus identificado na cultivar FT-2, enquanto os genes Rpp2 e o Rpp4 permanecem efetivos (Arias et al, 2004).22 Embrapa Soja. Documentos, 297Este trabalho tem como objetivo saturar as regiões cromossômicas que contêm os genes de resistência à ferrugem asiática Rpp2 e Rpp4, utili-zando marcadores moleculares RAPD.Em um trabalho realizado anteriormente (Silva et al, 2006), no qual foram mapeados os genes Rpp2 e Rpp4 no grupo de ligação da soja, fo-ram utilizados dois cruzamentos: um entre a cultivar suscetível BRS184 e o genótipo PI 230970 (possuidora do gene de resistência Rpp2), e outro entre a BRS184 e a PI 459025 (possuidora do gene de resistência Rpp4). Das plantas F1 desses cruzamentos, foram obtidas populações segregantes F2:3, compostas por 130 e 80 indivíduos, respectivamente. Tais populações foram inoculadas com o fungo Phakopsora pachyrhizi. Para identificar marcadores mais próximos ao gene da ferrugem da soja, foram construídos dois bulks de DNA de 12 plantas diferentes, obtidos de cada uma das populações F2 em estudo: um bulk de plantas homozi-gotas resistentes e um de plantas homozigotas suscetíveis. Esses bulks foram utilizados para a amplificação de marcadores RAPD (Michelmore et al, 1991). A amplificação dos loci foi realizada de acordo com a método descrito por Williams et al. (1990). As reações de PCR foram compostas de Tris a 10 mM e pH 8,5, KCl a 50 mM, Mg2+  a 2,4 mM, dNTPs a 100 µM, primers a 0,4 µM, o DNA genômico a 10 ng e 1 unidade de Taq DNA polimerase, em um volume total de 25 µL. As condições de amplifica-ção consistiram de um período inicial de desnaturação do DNA de cinco minutos a 94 ºC, seguido de 40 ciclos térmicos, com cada um deles incluindo as etapas de desnaturação do DNA por 30 segundos a 94 ºC, anelamento dos primers por 45 segundos a 35 ºC e extensão por 60 segundos a 72 ºC. Após os ciclos térmicos, um período final de exten-são de sete minutos a 72 ºC foi realizado. A eletroforese dos fragmentos amplificados foi feita em géis de agarose 1,3 %, corados com brometo de etídeo.Foram testados 20 primers aleatórios de RAPD (Operom Techonologies). Alguns primers geraram polimorfismo entre os bulks, entretanto, para vários deles, a reação controle sem DNA (branco) apresentou banda, 23III Jornada Acadêmica da Embrapa Sojasugerindo sua contaminação com DNA. A maioria dos primers selecio-nados apresentou-se contaminada com DNA, não sendo confiável a sua utilização no presente trabalho. Devido a isso, foi alterada a estratégia do trabalho, com o uso de marcadores tipo AFLP, que têm como vanta-gem o grande número de fragmentos que são gerados e resolvidos em um único gel. No momento, a metodologia de AFLP está sendo imple-mentada e testada no laboratório para ser usada na identificação de polimorfismos entre os bulks de DNA. Os marcadores AFLP polimórficos serão usados para a saturação das regiões genômicas contendo os alelos Rpp2 e Rpp4.  ReferênciasARIAS, C.A.A.; RIBEIRO, A. S.; YORINORI, J. T.; BROGIN, R. L.; OLIVEIRA, M. F.; TOLEDO, J.F.F. de. Inheritance of resistance of soybean to rust (Phakopsora pachyhizi Sidow). In: WORLD SOYBEAN RESEARCH CONFERENCE, 7.; INTERNATIONAL SOYBEAN PROCESSING AND UTILIZATION CONFERENCE, 4.; CONGRESSO BRESILEIRO DE SOJA, 3., 2004, Foz de Iguaçu. Abstracts of con-tributed papers and posters. Londrina: Embrapa Soybean, 2004. p. 100 (Embrapa Soja. Documentos, 228). Editado por Flávio Moscardi, Clara Beatriz Hoffmann-Campo, Odilon Ferreira Saraiva, Paulo Roberto Galerani, Francisco Carlos Krzyzanowski, Mercedes Concosdia Carrão-Panizzi.BROMFIELD, K.R.; HARTWIG, E.E. Resistence to soybean rust (Phakopsora pachyrhizi) and mode of inheritance. Crop Science, v. 20, 1980. p.254-255.Tecnologias para a produção de soja – região central do Brasil – 2007. Londrina: Embrapa Soja; Embrapa Cerrados; Embrapa Agropecuária Oeste, 2006, 225p. Disponível em < http://www.cnpso.embrapa.com.br > Acesso em dezembro de 2006. 24 Embrapa Soja. Documentos, 297HARTWIG, E.E. Identification of a 4th Major Gene Conferring Resistance to Soybean Rust. Crop Science, v.26, p.135-1136, 1986MICHELMORE, R.W.; Paran, I.; Keselli, V.  Identification of markers linked to disease-resistance genes by bulked segregant analysis: a rapid method to detect markers in specific genomic regions by using segre-gant populations. Proceedings of the National Academy of Science, v.88 p.9828-9832, 1991. SILVA, D.C.G.; YAMANAKA, N.; BROGIN, R.L., PEREIRA, S. dos S.; NOGUEIRA, L.M.; PASSIANOTTO, A.L.; CATELLI, L.L.; ARIAS, C.A.A.; NEPOMUCENO, A.L.; ABDELNOOR R.V. Mapeamento de genes de resis-tência à ferrugem asiática da soja. In: 3º Congresso de Soja do Mercosul – Mercosoja, p 253, 2006.  TAN, Y.J.; Yu, Z..L.; Liu, J.L. Studies on the epidemic regulation and control of soybean rust caused by Phakopsora pachyrhizi Sydow. INTSOY International Soybean Program series,1983 p. 169-174.WILLIAMS J.; Kubelik A.; Livak K.; Rafalski J.; Tingey S. DNA poly-morphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Research v.18, p.6531-6535, 1990.

Saturação de regiões genômicas da soja associadas a genes de resistência à ferrugem asiática.

SILVEIRA,C. A. da

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