ASSALIN, M. R.

FERRACINI, V. L.

PIOVESANA, A. M.

ROSA, M. A.

VIEIRA, R. F.

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Identificação e quantificação de fitohormônios produzidos por bactérias por UPLC-ESI-MSMS.

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Sociedade Brasileira de Espectrometria de Massas – BrMASS 4º Congresso BrMass – 10 a 13 de Dezembro de 2011 Identificação e quantificação de fitohormônios produzidos por bactérias por UPLC-ESI-MSMS Márcia R. Assalin1, Aliny M. Piovesana1, Maria A. Rosa1, Vera L. Ferracini1, Rosana F. Vieira1  massalin@cnpma.embrapa.br   1Laboratório de Resíduos e Contaminantes/Embrapa Meio Ambiente -Jaguariúna/SP   Hormônios vegetais são compostos orgânicos de ocorrência natural, produzidos na planta, os quais mesmo em baixas concentrações são capazes de promover, inibir ou modificar processos morfológicos e fisiológicos do vegetal. Os hormônios de plantas são tradicionalmente classificados nos seguintes grupos: auxinas, citocininas, ácidos giberélico e abscíssico.  A detecção e quantificação de fitohormônios em diferentes matrizes é um processo bastante complexo [1]. Neste trabalho desenvolveu-se uma metodologia de extração, identificação e quantificação por UPLC-ESI-MSMS do acido indol-3-acético (auxina), zeatina (citocinina) e Acido Giberélico (giberelina), em Trypticase Soy Broth (TSB), para a seleção de bactérias produtoras desses hormônios, eficientes para o feijoeiro. A extração dos fitohormônios foi realizada com acetato de etila, seguida por uma etapa de partição, promovida pela adição de sais. Após centrifugação, uma alíquota do sobrenadante foi submetida à evaporação até secura e o resíduo foi ressuspendido em fase móvel (75% de ácido fórmico 0,1% e 25% de metanol). A amostra foi injetada em um cromatógrafo líquido de ultra eficiência (UPLC – Ultra Performance Liquid Chromatography), com coluna Waters (Acquity UPLC BEH, C18; 17µm; 2,1x 50mm) acoplado a espectrometria de massas com interface electrospray e analisador tipo triploquadrupolo (UPLC-ESI-MS/MS). Tempo de corrida total de 3 minutos. Parâmetros de instrumento: Capilar (kV) 3.00; Cone (V) 25.00; Extractor (V) 4.00, Temperatura da fonte (ºC) 120; Temperatura dessolvatação (ºC) 300. O modo MRM foi selecionado, com monitoramento de duas transições por analito. Os limites de detecção (LD) do instrumento para Zeatina e Ácido indolacético foram de 0,010 µg mL-1  e para o Ácido Giberélico foi de 0,025 µg mL-1. Os limites de quantificação (LQ) do instrumento obtidos para Zeatina, Ácido indolacético e Ácido Giberélico foram de 0,050 µg mL-1. A curva analítica foi utilizada na faixa de 0,05 – 1,00 µg mL-1.  Modo de ionização Transições Zeatina (+) 352.16 > 135.90 352.16 > 220.00 Ácido Giberélico (-) 345.00 > 143.00 345.00 > 239.00 Ácido Indolacético (+) 176.10 > 103.00 176.10 > 130.00 As recuperações obtidas para a Zeatina foram de 68,5% e 57,0% para 0,10 e 0,50 µg mL-1 respectivamente, para o Ácido indolacético foram de 80,5% e 73,0% para 0,10 e 0,50 µg mL-1 respectivamente e para o Ácido Giberélico foram de 70,0% e 75,6% para 0,10 e 0,50 µg mL-1 respectivamente.       [1] Boiero, L.; Perring, D.; Masciarelli, O.; Penna, C.; Cassán, F.; Luna, V. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2007, 74, 874 - 880.   

http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/bitstream/doc/919923/1/2011RA113.pdf

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